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藏方猫乳散对尿酸钠致痛风性关节炎模型大鼠TNF-α、IL-1、IL-6含量的影响



全 文 :2008年 第 9卷 第 6期
藏方猫乳散对尿酸钠致痛风性关节炎模型大鼠 TNF-α、IL- 1、IL- 6含
量的影响
程生辉 1,李会芳 1,孙晓波 2,秦旭华 2,代竹青 2
(1.山西中医学院,山西 太原 030024; 2.成都中医药大学药学院,四川 成都 610075)
摘要 目的:探讨藏方猫乳散治疗急性痛风性关节炎的作用机理。方法:40只雄性 SD大鼠随机分成空白组、模型
组、猫乳散组、吲哚美辛组 4组,每组 10只。空白组、模型组灌服生理盐水,猫乳散组、吲哚美辛组分别灌服猫乳散
和吲哚美辛溶液,共给药 5 d。于给药第 3 d 将 0.2 mL尿酸钠溶液注入除空白组外其余各组大鼠右侧踝关节腔造
模,于给药第 5 d 处死大鼠,分离右踝关节周围软组织并制成匀浆,取上清液检测 TNF-α、IL- 1、IL- 6的含量。结
果:模型组局部组织中 TNF-α、IL- 1、IL- 6含量明显高于空白组(P<0.05),猫乳散组和吲哚美辛组 TNF-α、IL- 1、
IL- 6含量明显低于模型组(P<0.05)。结论:藏方猫乳散抗痛风作用机理与其能够降低局部炎性细胞因子 TNF-α、
IL- 1、IL- 6的含量有关。
关键词 藏方猫乳散;痛风性关节炎;炎性细胞因子;TNF-α;IL- 1;IL- 6
中图分类号:R289.5 文献标识码:A 文章编号:1671- 0258(2008)06- 0013- 02
近年来随着人民生活水平的提高,嘌呤类食物摄入
的增多,痛风的发病率逐年升高。西藏地处高寒地区,当
地居民的饮食习惯是长期以牛、羊肉等高嘌呤食物为
主,且喜饮酒以御寒,因而高尿酸血症和痛风的发病率
较高[1]。藏族人民在长期的生活和医疗实践中总结了许
多治疗痛风的宝贵经验,本课题在藏医药理论的指导
下,通过查阅大量的藏医药文献,从众多的藏医药经验
方中筛选出复方猫乳散[猫乳、达布桑(秦皮)、吉解那
保(大叶秦艽)、杰尔哇(黄檗)]用于高尿酸血症及痛风
的治疗。《晶珠本草》记载猫乳有“干黄水”之功[2],主要
用于关节“黄水”增盛引起的关节红肿疼痛,是常用来治
疗痛风的藏药。前期研究已经表明藏方猫乳散具有良好
的降低血尿酸和治疗痛风性关节炎的作用[3-4],本文拟
从局部炎性细胞因子 TNF-α、IL-1、IL-6方面探讨该方
的抗痛风作用机理。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 SPF级 SD大鼠,雄性,180 g~220 g,
四川省医学科学院实验动物研究所提供,动物合格证
号:SCXK(111)2004-16。
1.1.2 药品与试剂 藏方猫乳散全方药物购自成都五
块石药材市场,经成都中医药大学卢先明教授鉴定。实
验用药为猫乳散的水提液(1 g/mL)和醇提液(1 g/mL)的
[作者简介]程生辉,男,助教,从事外科教学与科研
[通讯作者]李会芳,女,博士,E-mail:sunshine-613@163.com
[收稿日期]2008-07-12
Effect of Tibetan Formula Maoru Powder on Inflammation Cytokine
TNF-α、IL-1、IL-6 ofRatswithAcuteGoutyArthritis
Cheng Shenghui,Li Huifang,Sun Xiaobo,Qin Xuhua,Dai Zhuqing
(Shanxi College of TCM,Taiyuan Shanxi 030024)
Abstract Objective:To explore the mechanism of Tibetan formula Maoru powder on acute gouty arthritis.Methods:40
male SD rats were randomly divided into four groups:control group,model group,Maoru powder group and antifani group.
On the third day of treatment,the acute gouty arthritis rat models were established with once injection of 0.2 mL monosodi-
um urate solution into the right ankle joint cavity of every rat.On the 5th day of treatment,all rats were killed,then soft tis-
sue around right rankle joint was obtained and made into homogenate,TNF-α,IL- 1,IL- 6 contents in supernatant
were detected.Results:Contents of TNF-α、IL- 1、IL- 6 of model group rats were significantly higher than those of control
group rats (P<0.05),contents of TNF-α、IL- 1、IL- 6 of Maoru powder group and antifani group rats were significantly
lower than those of model group rats(P<0.05).Conclusion:The anti- gout effects of Maoru powder may be related to the
decrease in contents of TNF-α、IL- 1、IL- 6 of soft tissue around rankle joint.
Keywords Tibetan formulaMaoru powder,goutyarthritis,inflammation cytokine,TNF-α,IL- 1,IL- 6
实验中医药学
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2008 Vol.9 No.6
混合物;吲哚美辛片,由江苏亚邦药业集团股份有限制
造分公司生产,批号:0404111;尿酸,SIGMA公司生产,
批号:050K08822;大鼠 TNF-α ELISA试剂盒,批号:
041025,晶美生物工程有限公司进口分装;大鼠 IL-1
ELISA试剂盒,上海森雄科技实业有限公司进口分装,
批号:141108;大鼠 IL-6 ELISA试剂盒,批号:041008,
晶美生物工程有限公司进口分装。
1.1.3 实验仪器 Thermo Labsystems MuLtikan MK3全
自动酶标仪;Thermo Labsystems WeLLwash 4MK2全自
动洗板机。
1.2 实验方法
1.2.1 分组与给药 40只 SD大鼠随机分为空白组、模
型组、吲哚美辛组、猫乳散组 4组,每组 10只。造模前 2 d
开始灌胃给药,吲哚美辛组和猫乳散组分别按 0.04 g/kg
和 5 g/kg给药,每日 1次;空白组和模型组以同体积生
理盐水灌胃。造模后各组连续给药 3 d。
1.2.2 尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备[5] 取 194 mL
蒸馏水加 6 mL NaOH(1 M),煮沸后加 1 g尿酸,用 1 N
HCl调 pH至 7.2,搅拌冷却,贮存于 4℃冰箱中 24 h,去
上清液,用滤纸将沉淀物水份吸干,干燥即可得尿酸钠
结晶。取 1 250 mg尿酸钠结晶,加入 45 mL生理盐水,
同时加入 5 mL吐温 80,加热搅拌,配成 50 mL尿酸钠
溶液备用。
1.2.3 造模方法 用 6号注射针在模型组、吲哚美辛
组、猫乳散组大鼠右足右侧踝关节背侧从 45 ℃方向插
入胫骨肌腱内侧,将 0.2 mL尿酸钠溶液(2.5 mg/100
mL)注入踝关节腔。
1.2.4 TNF-α、IL-1、IL-6 含量的测定方法 用药 5 d
后,大鼠股动脉放血处死,于置有冰块的干燥托盘内快
速分离出右足踝关节周围软组织,制成匀浆,取上清液
作样本测内含物 TNF-α、IL-1、IL-6的含量(根据 ELISA
试剂盒法)。
2 结 果
藏方猫乳散对痛风性关节炎模型大鼠局部细胞因
子的影响,结果见表 1。由表 1可以看出,与空白组比
较,模型组 TNF-α、IL-1、IL-6 的含量明显升高(P<
0.05);与模型组比较,吲哚美辛组和猫乳散组 TNF-α、
IL-1、IL-6含量显著降低(P<0.05)。
组别 n IL- 1 TNF-α IL- 6
空白组 10 558.38±92.54 569.99±160.34 831.50±227.31
模型组 10 616.24±123.31# 709.92±139.62# 1 081.38±286.57#
吲哚美辛组 10 477.51±198.82* 583.86±109.91* 604.33±154.83*
猫乳散组 10 379.76±170.54* 438.23±90.97* 581.62±178.97*
表 1 藏方猫乳散对痛风性关节炎模型大鼠局部细胞因子的影响
注:与空白组比较,#P<0.05;与模型组比较,*P<0.05
(pg/mL,x±s)
3 讨 论
急性痛风的疼痛非常剧烈,犹如“虎咬之状”,难以
忍受。痛风急性发作是尿酸钠结晶在关节周围组织沉积
引起的急性炎症反应,尿酸钠结晶刺激局部组织产生大
量 TNF-α、IL-1、IL-6等炎性细胞因子,引起局部血管
扩张、通透性增加、渗出、水肿、白细胞聚集等炎症反应。
本实验也证实造模后,局部关节软组织中 TNF-α、IL-1、
IL-6含量增高,而藏方猫乳散能显著降低痛风性关节
炎模型大鼠局部 TNF-α、IL-1、IL-6的含量,从而减轻
局部“红、肿、热、痛”的炎症反应,从而发挥抗痛风作用。
藏方猫乳散发挥抗痛风作用机理可能与其能够降低局
部炎性细胞因子 TNF-α、IL-1、IL-6的含量有关。
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(上接第 12页)
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实验中医药学
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