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JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGE Vol.33 No.２ 2016
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高于≤1/2，Ⅲ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴结转移明显高
于无淋巴结转移。见表2:
表2 HMGB1、MMP-9 mRNA表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系
临床病理参数 n HMGB1 mRNA MMP-9 mRNA表达量 P 表达量 P
年龄(岁） ≤50 22 0.871±0.035 ＞0.05 0.571±0.025 ＞0.05＞50 10 0.838±0.037 0.563±0.023
浸润深度 ≤1/2 18 0.483±0.029 ＜0.05 0.398±0.041 ＜0.05＞1/2 14 0.615±0.039 0.509±0.043
分化程度 高+中 26 0.898±0.033 ＞0.05 0.532±0.021 ＞0.05低 6 0.930±0.029 0.683±0.019
FIGO分期 Ⅰ+Ⅱ 26 0.706±0.021 ＜0.05 0.579±0.040 ＜0.05Ⅲ 6 1.128±0.032 0.831±0.047
淋巴结转移 有 24 1.009±0.036 ＜0.05 0.752±0.029 ＜0.05无 8 0.781±0.023 0.386±0.033
3　讨论
最近的研究表明，HMGB1 在乳腺癌[3]、前列腺癌[4]、大
肠癌[5]和宫颈癌[6] 等肿瘤组织或血清中高表达。Schlueter
等[7]发现，HMGB1参与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移，可
能与促进肿瘤周围血管生成有关;Zhu等[8] 研究HMGB1
在大肠癌中的意义，发现HMGB1可通过RAGE/Snail/
NF-κB信号通路促进肿瘤上皮细胞向间质细胞的转化
过程，从而促进肿瘤细胞的转移。本研究发现，子宫内膜
癌组织HMGB1 mRNA的表达量明显高于正常、单纯性
增生和非典型增生子宫内膜组织，并且子宫内膜癌组织
HMGB1 mRNA的表达量与与FIGO分期、淋巴结转移和
浸润深度有关，提示HMGB1可能参与了子宫内膜癌的发
生、发展过程。
MMP-9又称为明胶酶B，被激活后形成Ⅳ型胶原
酶，降解、破坏靠近肿瘤表面的Ⅳ型、Ⅴ型胶原和明胶，有
助于肿瘤细胞沿缺失的基底膜向周围浸润，最终导致肿
瘤的侵袭和转移。本研究显示，子宫内膜癌组织MMP-9
mRNA的表达量明显高于正常、单纯性增生和非典型增
生子宫内膜组织，并且子宫内膜癌组织MMP-9 mRNA
的表达量与与FIGO分期、淋巴结转移和浸润深度有关。
与卢建军等[9] 报道的采用免疫组织化学法检测MMP-9
在子宫内膜癌组织中的表达结果一致，提示MMP-9可能
参与了子宫内膜癌的发生、发展过程。
本研究发现，HMGB1 mRNA、MMP-9 mRNA的
表达量均随FIGO分期的增高、出现淋巴结转移和浸润深
度加深而升高，表明HMGB1与MMP-9与子宫内膜癌的
侵袭和转移有关。因此提示，HMGB1和MMP-9可能成为
子宫内膜癌早期诊断、预后评价的分子标志物和新的治
疗靶点。
【参考文献】
Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, et al. Cancer incidence and
mortality worldwide: sources, methods and major patterns in
GLOBOCAN 2012[J]. Int J Cancer, 2015, 136(5): E359-386.
Tang D, Kang R, Zeh HR, et al. High-mobility group box 1 and
cancer[J]. Biochim Biophys Acta, 2010, 1799 (1/2): 131-140.
Shang GH, Jia CQ, Tian H, et al. Serum high mobility group box
protein 1 as a clinical marker for non-small cell lung cancer[J].
Respir Med, 2009, 103(12): 1949-1953.
Ishiguro H, Nakaigawa N, Miyoshi Y, et al. Receptor for advanced
glycation end products (R AGE) and its ligand, amphoterin are
overexpressed and associated with prostate cancer development[J].
Prostate, 2005, 64(1): 92-100.
Liu W, Zhang Z, Zhang Y, et al. HMGB1-mediated autophagy
modulates sensitivity of colorectal cancer cells to oxaliplatin via
MEK/ERK signaling pathway[J]. Cancer Biol Ther, 2015, 16(4):
511-517.
Wang L, Wang Q, Li HL, et al. Expression of MIR200a,
miR93,metastasis-related gene RECK and MMP2/ MMP9 in
human cervical carcinoma-relationship with prognosis[J]. Asian J
Cancer Prev, 2013, 14(3): 2113- 2118.
Schlueter C, Weber H, Meyer B, et al. Angiogenetic signaling
through hypoxia: HMGB1: an angiogenetic switch molecule[J].
Am J Pathol, 2005, 166(4): 1259-1263.
Zhu L, Li X, Chen Y, et al. High-mobility group box 1: a novel
inducer of the epithelial-mesenchymal transition in colorectal
carcinoma[J]. Cancer Lett, 2015, 357(2): 527-534.
卢建军，伊莉萍，托娅，等.基质金属蛋白酶-9在子宫内膜
癌组织中的表达水平及临床意义[J].实用临床医药杂志，
2014，18(15):63-65.
（收稿日期：2015-10-11）
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HPLC法测定不同采收期承德产山里红叶牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量
杜义龙，李明臣，王领弟，李艳荣，潘海峰△
（河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德　067000）
【摘要】目的: 采用高效液相色谱(HPLC）法测定承德地区不同采收期山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的
△ 通讯作者
DOI:10.15921/j.cnki.cyxb.2016.02.004
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Vol.33 No.２ 2016
山里红叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida
Bge.var.major N. E. Br.的干燥叶，主产于河北承德、山东和
辽宁等地[1-3]。山里红叶药材化学成分复杂，主要为黄酮
类和有机酸类[1]。现代药理实验表明，山里红叶具有降血
脂、抑制血小板聚集、改善冠脉流量保护心肌和清除自由
基、抗氧化等作用[4-7]。黄酮类化合物是山里红叶生理活
性的主要成分，包括牡荆素-4″-O-葡萄糖苷、牡荆素等，
其中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷在山里红叶中含量较高[8]。
本研究采用HPLC法测定了承德地区三个产地不同月份
山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量，以期找到
牡荆素-4″-O-葡萄糖苷含量变化的规律，从而确定针
对牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的最佳采集时间，为承德山
里红叶资源的开发提供参考。
1　材料
1.1　仪器　Agilent1200 Series液相色谱仪(G1322A在线
脱气机、G1311A二元泵、G1316A柱温箱、G1329A自动进
样器、G1315D二极管阵列检测器）;Agilent Chemstation
色谱工作站;KQ-700型超声波清洗器（昆山市超声仪
器有限公司，功率700W，频率40KHz），梅特勒-托利多
AG245电子分析天平，HC-2062高速离心机(科大创新股
份有限公司中佳分公司）。
1.2　药材　山里红叶药材均由河北民族师范学院董建
新教授鉴定为蔷薇科山楂属植物山里红的干燥叶，药材
分别于2011年6月、7月、8月、9月、10月采自承德市滦平县、
双桥区和承德县。对照品：牡荆素-4″-O-葡萄糖苷（批号，
A0513），成都曼思特生物科技有限公司，纯度＞99%。
2　方法与结果
2.1 色谱条件 流动相:0.1% 甲酸水溶液(A）-乙腈
(B）-四氢呋喃(C），梯度洗脱方式:0-20-30-40-50min，
A(90%-84%-84%-78%-74%）、B(8%-14%-14%-20%-24%）、
C(2%-2%-2%-2%-2%）; 色 谱 柱:Agilent ZORBAX SB-
C18(4.6mm×250mm,5μm）; 检测波长:340nm; 流速1.0ml/
min; 柱温30℃;进样量10μl。山里红叶牡荆素-4″-O-葡
萄糖苷色谱图见附图。
2.2　供试品溶液的制备 将山里红叶去除杂质后，65℃
干燥至恒重(约2h），粉碎机粉碎后过80目筛;取山里红
含量。方法: 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm）;流动相:0.1%甲酸水溶液-乙腈-
四氢呋喃溶液，梯度洗脱;检测波长:340nm; 流速1.0ml/min; 柱温30℃。结果: 牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的
线性范围是0.001-0.16mg/ml; 平均加样回收率为100.2%(RSD=2.8%）;5-10月承德不同产地山里红叶中牡
荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量均值分别为滦平县3.00mg/g，双桥区4.00mg/g，承德县2.84mg/g。结论: 承德
地区山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量在8月份达到最高，为最佳采收期，以承德市双桥区产的山里
红叶含量最高，为最佳产地。
【关键词】山里红叶;牡荆素-4″-O-葡萄糖苷;高效液相色谱法;含量测定
【中图分类号】R284.1　　　　【文献标识码】A　　　　【文章编号】1004-6879(2016）02-099-03
CONTENT DETERMINATION OF VITEXIN -4”-O-GLUCOSIDE IN CHENGDE HAWTHORN LEAF AT
DIFFERENT COLLECTING TIME BY HPLC
DU Yi-long, LI Ming-chen, WANG Ling-di, et al
(Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine, Institute of Chinese Materia Medica,
Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)
【ABSTRACT】Objective: To determine the content of vitexin -4”-O-glucoside in Chengde hawthorn leaf at different
collecting time by HPLC. Methods: The separation was carried out in Agilent ZORBAX SB-C18 column (4.6mm×250mm,
5μm) with 0.1% formic acid, acetonitrile and tetrahydrofuran as mobile phase in gradient elution model (detection wave:
340nm, fl ow rate:1.0ml/min, column temperature:30℃). Results: The linear range of vitexin -4”-O-glucoside was 0.001-0.16
mg/ml. The average recovery rate was 100.2% (RSD=2.8%). The average content of vitexin -4”-O-glucoside in Chengde
hawthorn leaf from May to October was respectively 3.00mg/g from Luanping County, 4.00mg/g from Shuangqiao District
and 2.84mg/g from Chengde County. Conclusions: According to the content of vitexin -4”-O-glucoside, August is the
optimum collecting time and Shuangqiao District is the optimal producing area.
【KEY WORDS】Hawthorn leaf; Vitexin -4”-O-glucoside; HPLC; Content determination
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月份牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量最高，在8月份达到
最高值后逐月减少;三个产地中以承德市双桥区山里红
叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量最高。
表1 加样回收率试验结果
成分 含量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
均值
(%)
RSD
(%)
牡荆素
-4″-O-
葡萄糖苷
1.60 2.0 3.55 96.87
100.2 2.8
1.55 2.0 3.51 97.41
1.57 2.0 3.60 101.9
1.62 2.0 3.69 104.3
1.53 2.0 3.55 101.3
1.58 2.0 3.57 99.36
表2 不同采收期药材中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷含量测定结果(mg/g)
产地 采收时间 含量 产地 采收时间 含量 产地 采收时间 含量
滦
平
县
2011.06 3.19
双
桥
区
2011.06 3.69
承
德
县
2011.06 2.87
2011.07 3.06 2011.07 3.15 2011.07 2.87
2011.08 3.43 2011.08 7.18 2011.08 3.54
2011.09 2.99 2011.09 3.04 2011.09 2.89
2011.10 2.33 2011.10 2.96 2011.10 2.02
均值 3.00 均值 4.00 均值 2.84
3　讨论
研究不同采收时期药材有效成分含量的变化，对确
定目标产物最佳采收期具有重要意义。本研究对承德地
区6月到10月山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含
量进行检测分析，结果显示8月份牡荆素-4″-O-葡萄糖
苷的含量最高，为最佳采收期;三个产地中，以承德市双
桥区产山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量最高，
为最佳产地。
【参考文献】
陈忠，卢树杰，张维库，等.HPLC测定山楂叶总黄酮中牡
荆素鼠李糖苷含量[J].中成药，2009，31(10):1615-1616.
郝近大.实用中药材经验鉴定[M]. 北京:人民卫生出版
社，2001.40-44.
张文洁，杨英，张辉.山楂叶提取物对高血脂大鼠的影响
[J].辽宁中医杂志，2008，35(2):307-308.
叶希韵，张隆，张静，等.山楂叶总黄酮对乳鼠心肌细胞
缺血缺氧损伤的实验研究[J]. 中国现代应用药学，2005，
22(3):202-204.
蔡久英.山楂叶汤和银杏叶片对冠状动脉粥样硬化性心
脏病患者血脂载脂蛋白和血小板聚集功能影响的比较[J].
中国中西医结合急救杂志，1999，6(8):344-346.
于秋红，黄沛力，张淑华，等.山楂叶提取物抗氧化作用[J].
中国公共卫生，2006，22(4):463-464.
王领弟，李艳荣，张晓峰，等.山楂叶指纹图谱研究[J]. 中
国实验方剂学杂志，2011，17(19):74-78.
（收稿日期：2015-10-12）
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[2]
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粉末0.5g，置于50ml具塞三角瓶中，加入80%甲醇25ml，
称重;超声提取30min，称重，补足失量;过滤，续滤液过
0.45μm滤膜，即得。
附图 山里红叶HPLC色谱图
2.3　对照品溶液的制备　精密称取牡荆素-4″-O-葡萄
糖苷适量，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，制成每
ml含牡荆素-4″-O-葡萄糖苷0.16mg的对照品溶液。
2.4　线性关系考察　以对照品溶液为1号溶液，采用倍
比稀释法将对照品溶液制成系列浓度溶液，得2-5号对
照品溶液。以2.1的色谱条件，分别取上述系列对照品
溶液各10μl进样，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，
对照品浓度(C)为横坐标，进行线性回归，回归方程为
A=15875C-9.6313(r=1.0000)。牡荆素-4″-O-葡萄糖苷
的线性范围是0.001-0.16mg/ml。
2.5　精密度试验　按2.2的方法制备供试液，连续进样
6次，按2.1的色谱条件测定，记录峰面积，峰面积RSD
＜0.5%(n=6)。表明仪器的精密度良好。
2.6　重现性试验　取同一批山里红叶药材，按2.2的方
法制备6份供试品溶液，按2.1的色谱条件测定，记录峰面
积，峰面积RSD＜1.5%(n=6)。表明该方法重现性较好。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、
12、24h进样测定，记录峰面积，峰面积RSD＜3%(n=6)。表
明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.8　加样回收率试验　精密称定已知牡荆素-4″-O-
葡萄糖苷含量的山里红叶6份，每份0.25g，加入牡荆
素-4″-O-葡萄糖苷适量，按2.2的方法制备供试品溶液，
按2.1的色谱条件测定峰面积，由标准曲线方程计算样品
中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量，计算平均回收率和
RSD。结果见表1。
2.9　样品含量测定　取各批次山里红叶样品，按2.2的
方法制备供试品溶液各3份，按2.1的色谱条件测定分析，
通过回归方程计算山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷
的含量。结果见表2:承德地区三个产地的山里红叶中，8