全 文 ：HPLC法测定马比木根中喜树碱的含量
邓仕明 1 ,王发松1, 2＊ ,周大寨1 ,郑 涓2　
(1.生物资源保护与利用湖北省重点实验室 ,湖北恩施 445000;2.湖北民族学院化学与环境工程学院 ,湖北恩施 445000)
摘要　[目的 ]建立HPLC测定马比木根中喜树碱含量的方法。 [方法 ] HPLC法测定 ,色谱柱为DiamonsilC18柱(5 μm, 250mm×4.6
mm),流动相为乙腈∶水(30∶70),检测波长 254nm,流速 1.0ml/min,柱温为室温。 [结果]喜树碱含量在 0.046～ 0.230 mg/ml范围内线
性关系良好;仪器精密度良好 ,其RSD值为 1.30%;试验的重现性良好 ,其RSD值为 0.87%;试验的稳定性良好 ,其RSD值为 2.30%,说
明喜树碱在 48h内比较稳定。加样回收率试验 ,重复 5次 ,计算得到平均回收率为 99.2%, RSD值为 1.20%。湖北恩施和重庆黔江产马
比木根中的喜树碱含量分别为 0.143 6%和 0.144 8%。 [结论 ]该方法分离效果好、专属性强、分析速度快 、灵敏度高 ,可作为马比木根
中喜树碱含量测定的方法。
关键词　马比木;HPLC;喜树碱
中图分类号　R284.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)09-04965-02
HPLCDeterminationofCamptothecineinRootsofNothapodytespitosporoides
DENGShi-mingetal　(KeyLaboratoryofBiologicalResourcesProtectionandUtilizationofHubeiProvince, Enshi, Hubei445000)
Abstract　[ Objective] TheaimwastoestablishaHPLCmethodfordeterminingthecamptothecininrootsofNothapodytespitosporoides.
[ Method] DiamonsilC18 column(250mm×4.6mm, 5μm)wasused, themobilephasewasconsistedofCH3CN-H2O(30∶70), theUVdetectorwavelengthwas254nm, andflowratewas1.0ml/min.[ Result] Thecalibrationcurvesshowedthatagoodlinearityhasbeeninthe
rangeof0.046-0.230mg/mlwithRSDas1.30%;thereproducibilityofthetestwasgood, withRSDas0.87%;andthestabilitywasalso
good, withRSDas2.30%, whichshowedthatthecamptothecineisstabilitywithin48h.Theaveragerecoveryexperiment, repeatedforfive
times, calculatedtheaveragerecoverywas99.2%, RSDvaluewas1.20%.Camptothecinecontentswere0.143 6% inEnshisampleand
0.144 8%inQianjiangsample.[ Conclusion] ThemethodfordeterminingthecamptothecineinrootsofN.pitosporoideswasrapid, sensitive
andaccurate.
Keywords　Nothapodytespittosporoides;HPLC;Camptothecine
基金项目　湖北省教育厅科技研究计划优秀中青年人才项目(Q-
20082901)。
作者简介　邓仕明(1981-),男 ,湖北巴东人 , 硕士研究生 ,研究方向:
天然药物化学与制备工程。 ＊通讯作者 , E-mail:zsuwangfa-
song@yahoo.com.cn。
收稿日期　 2009-12-07
　　马比木(NothapodytespitosporoidesOliv.sleum.), 又名
海桐假柴龙树 ,为茶茱萸科植物 [ 1] ,其根部含喜树碱(camp-
tothecine)及喜树碱的甲氧基衍生物 [ 2] ,临床上主要用于治疗
消化系统恶性肿瘤 [ 3] 。据报道印度产铁青科小灌木马比木
中也含有喜树碱 [ 2] ,但关于马比木根中喜树碱含量的测定方
法未见文献详细报道。基于此 ,笔者采用 HPLC法对湖北恩
施和重庆黔江两地马比木根中喜树碱的含量进行了测定 [ 4] ,
并对测定方法进行了研究 ,以期为开发喜树碱的新植物资源
提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　试材。马比木 ,采于湖北恩施(3个)和重庆黔江(3
个)。将其根部阴干 ,粉碎 ,过 60目筛 ,备用 。
1.1.2　测试仪器。Waters515 HPLC系统 (美国 Waters公
司 , Waters2487 Dual);SR2000色谱工作站(上海三锐科技
有限公司)。
1.1.3　主要试剂。喜树碱对照品 (Sigma公司 , 含量
98.1%);乙腈(上海化学试剂公司 , GR);水为超纯水;其他
试剂均为分析纯。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件 。色谱柱为 DiamonsilTM(钻石)C18(5
μm, 250 mm×4.6mm);流动相为乙腈∶水(30∶70);检测波
长为 254 nm;流速为 1.0 ml/min,进样量为 20 μl;柱温为室
温。在此条件下 ,喜树碱的保留时间为 12.85min。
1.2.2　标准曲线的绘制。精密称取喜树碱标准品 2.3 mg
(精确至 0.000 1 mg),用甲醇定容至 50 ml,得浓度为 0.046
mg/ml的喜树碱标准液。分别取标准液 1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0ml置于 10ml的容量瓶中 ,加甲醇定容于刻度 ,摇匀 ,分
别进样 20 μl进行测定。
1.2.3　精密度试验。取同一标准品溶液 ,在色谱条件下连
续进样 5次 ,计算得到喜树碱含量的 RSD值 。
1.2.4　重现性试验 。取样品 5份 ,精密称定(0.000 1 mg),
按样品测定方法进行测定并计算含量。
1.2.5　稳定性试验。精密吸取样品溶液 ,在色谱条件下进
样 ,分别在 2、4、8、24 、48 h各测定 1次 ,连续测定 5次并计算
喜树碱的含量。
1.2.6　加样回收率试验。精密吸取 5个样品待测液各 1
ml,精密加入 0.044mg/ml的标准品溶液各 1ml,在色谱条件
下进样 ,计算平均回收率 。
1.3　样品测定　精密称取马比木根的干燥粉末 1.0 g,放入
50ml的锥形瓶中 ,加入 25ml甲醇 ,冷浸 12h,超声波提取 30
min后 ,取出 ,过滤 ,放凉 ,用甲醇定容至 50 ml,摇匀 ,即得样
品提取液。精密吸取标准品溶液和供试品溶液各 20 μl,分
别注入液相色谱仪 ,连续进样 3次 ,记录各组分峰面积 ,代入
线性回归方程 ,计算得马比木中喜树碱含量。
2　结果与分析
2.1　HPLC法测定马比木根中喜树碱含量方法的验证　
2.1.1　标准曲线。由图 1、2可知 ,喜树碱在 12 ～ 15 min有
清晰的吸收峰。以峰面积 (Y)为纵坐标 ,喜树碱浓度 X
(mg/ml)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得线性回归方程为 Y
=289.08X+0.379 3,相关系数 R2值为 0.999 5。喜树碱的
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(9):4965-4966 责任编辑　夏静　责任校对　卢瑶
线性范围为 0.046 ～ 0.230 mg/ml。
图 1　喜树碱标准品HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsofcamptothecinestandardsubstance
图 2　喜树碱供试品HPLC色谱图
Fig.2　 HPLCchromatogramsofcamptothecinetestedsample
2.1.2　精密度 、重现性 、稳定性和加样回收率的测定结果 。
按方法 “1.2.3” ～ “1.2.6”进行试验 ,结果仪器精密度良好 ,
其 RSD值为 1.30%;试验重现性良好 ,其 RSD值为 0.87%;
试验稳定性良好 ,其 RSD值为 2.30%,说明喜树碱在 48 h内
比较稳定。加样回收率试验 ,重复 5次 ,计算得到平均回收
率为 99.2%, RSD值为 1.20%,回收率良好。因此 ,该方法分
离效果好 、专属性强 、分析速度快 、灵敏度高 ,可作为马比木
根中喜树碱含量测定的方法。
2.2　样品测定结果　按 “1.3”方法测定 6个样品的喜树碱
含量 ,得到湖北恩施和重庆黔江两地马比木根中喜树碱的平
均含量分别为 0.143 6%和 0.144 8%(表 1),两地的含量相
差不大。
表 1　2个不同产地的马比木根中喜树碱的含量测定结果
Table1　ContentdeterminationresultsofcamptothecineinrootsofN.
pitosporoidesfromtwoproducingarea
编号
No.
产地
Origin
含量测定∥%
Contentdetermination
平均含量∥%
Meancontent
1 湖北恩施 0.143 2
2 湖北恩施 0.147 8 0.143 6
3 湖北恩施 0.139 8
4 重庆黔江 0.144 2
5 重庆黔江 0.145 2 0.144 8
6 重庆黔江 0.145 0
　注:n=3。
　Note:n=3.
3　讨论
张玉红等报道喜树果中喜树碱含量一般在 0.10% ～
0.13%[ 5] ,黄晓舞等测定喜树果中喜树碱含量为 0.135%[ 6];
而湖北恩施和重庆黔江两地马比木根中的喜树碱含量比果
中的含量要高 ,平均含量分别为 0.143 6%和 0.144 8%,究竟
是何原因尚不清楚 ,有可能是测定方法的差异 。该植物在武
陵山区资源较丰富 ,分布相对集中 ,可作为喜树碱的新植物
资源进行深入研究和开发利用。
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(上接第 4955页)
首要问题。
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