全 文 ：30　 林业科技开发　2007年第 21卷第 5期
大叶冬青叶抗肿瘤活性初步研究
陈凤美1　李晓储 1, 2　杨守辉1　冯友建 1　蒋继宏 1
(1徐州师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室　2江苏省林业科学研究院)
摘　要:用 MTT法对大叶冬青叶不同提取物和挥发油抗肿瘤活性的测定表明 , 大叶冬青提取物具有一定的抗肿
瘤活性。其中老叶乙醇提取物和鲜叶挥发油抗肿瘤活性最高 , 老叶乙醇提取物对胃癌细胞株 SGC-7901的抑制率
为 62.40%,鲜叶挥发油对肺癌细胞株 NCI-H460抑制率为 93.33%。 进一步实验表明大叶冬青挥发油对 NCI-
H460(肺癌)细胞的 IC50为 42.86μg/mL。研究结果为大叶冬青叶保健 、药用产品的开发提供了科学依据。
关键词:大叶冬青;提取物;挥发油;抗肿瘤活性
TheAntitumorActivitiesoftheLeavesofIlexlatifoliaThunb∥CHENFeng-mei, LIXiao-chu, YANGShou-hui,
FENGYou-jian, JIANGJi-hong
Abstract:TheextractsandvolatileoiloftheleavesofIlexlatifoliaagainsttumorweredeterminedbyMTTassay.There-
sultsshowedthattheantitumoractivitiesofethanolextractsfromoldleavesofIlexlatifoliawerethestrongest, andinhibi-
tingratewas62.40% againstSGC-7901.TheinhibitingrateofvolatileoilfromfreshleavesofIlexlatifoliawas93.33%
againstNCI-H460, andIC50ofNCI-H460 was42.86mg/mL.Theseresultssuppliedascientificbasisforplantmedicine
developmentofIlexlatifolia.
Keywords:Ilexlatifolia;Extracts;Volatileoil;Antitumoractivity
Firstauthor saddress:KeyLabortoryofBiotechnologyfroMedicinalPlantofJiangsuProvince, XuzhouNormalUniversi-
ty, 221116, Xuzhou, China
收稿日期:2007-05-31　　　　修回日期:2007-07-06
基金项目:江苏省农业三项工程项目 “优良观赏保健树大叶冬青种质
资源引进 、扩繁与开发 ”研究(编号:SX2001-0687),国家科学技术部
“十五 ”攻关重大专项课题 “中国森林生态网络体系 `点 的研究与示
范 ”攻关协作研究(编号:2002BA516A-07)内容之一。
第一作者简介:陈凤美(1953-),女 ,副教授 ,从事药用植物生物技术
研究。
　　大叶冬青(IlexlatifoliaThunb)系冬青科冬青属
常绿乔木 ,自然分布于我国长江流域以南地区 。树干
通直 ,枝叶繁茂 ,树形优美。因其适应性强 、较耐寒 、
耐阴 、耐湿 ,病虫害少 ,萌蘖性强 ,是我国城市生态园
林绿化的优良观赏树种 [ 1, 2] 。大叶冬青叶内除含有
黄酮类 ,芦丁 、杨梅酮 、槲皮素等多种对人体有益的活
性物质 ,具清热解毒 ,降血压 ,降血脂 ,降胆固醇等药
用保健功效 。叶是制作绿色植物保健剂苦丁茶的重
要原料 [ 3 ～ 9] 。因此 ,又是优良的药用生态保健树种 。
为了深度开发大叶冬青叶用保健资源 ,本实验室
对大叶冬青保健成分可溶性蛋白含量 、超氧化物歧化
酶(SOD)和叶抗菌活性物质进行测定 [ 10, 11] ,同时对
大叶冬青提取物及挥发物进行了大叶冬青抗肿瘤活
性测定 ,现报道如下。
1　材料与方法
1.1　材　料
供试大叶冬青采自南京江苏省林业科学研究院
苗圃 ,种源为浙江新昌 , 苗龄 4a。阴干粉碎 , 备用 。
SGC-7901(胃癌)由江苏省药用植物生物技术重点
实验室提供。 NCI-H460(人肺癌)细胞株购于 ATCC
公司 , RPMI1640培养基为 GIBCO公司产品 ,胎牛血
清为北京四季青公司产品 , MTT为南京生兴生物技
术有限公司产品 , DMSO为厦门星隆达(Sanland)化
学试剂有限公司产品 ,其余试剂均为分析纯。 96孔
细胞培养板。
1.2　仪　器
RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1.3　方　法
1.3.1　大叶冬青提取物和挥发油的提取
将大叶冬青嫩叶(取稍顶部 3片叶)和老叶分
开 ,各取 100g, 分别用 95%乙醇和双蒸水浸提 12h,
重复 3次 ,合并 3次浸提液 ,浓缩成浸膏 ,放入 4℃冰
箱保存待用。
大叶冬青叶片 100g,经适量双蒸水浸泡 12h,用
挥发油提取器连续回流提取 5h,提取液经乙醚萃取 ,
回收乙醚得淡黄色油状物 ,再用无水硫酸钠脱水得纯
挥发油。
1.3.2　抗肿瘤活性测定
细胞培养:NCI-H460培养用 RPMI1640培养基 ,
应用研究　
　林业科技开发　2007年第 21卷第 5期 31　
含 100U/mL青霉素和 100U/mL链霉素及 10%已灭
活的胎牛血清 ,用 1mol/LHCl溶液调定 pH值为
7.2,在 5%CO2 37℃培养箱中培养 ,实验用细胞均处
于对数生长期。
MTT法测定方法:细胞以 8×104个 /孔的浓度接
种于 96孔培养板中 ,在 5%CO2 37℃温箱中培养 24h
后 ,加入挥发油浓度为 100μg/mL,继续培养 48h,弃
去溶液 , 用 200μL基本培养基洗 1次 ,每孔加入
50μL37℃预热的 MTT(2mg/mL)4h,弃去培养基 ,
用 PBS洗 1次 ,每孔加 200μLDMSO,加入不含细胞
的培养基的孔做空白值 ,加细胞液不加药的孔做对照
值 ,在平板摇床上摇 30min,在酶标仪 570nm下读
板 ,设 3个重复。根据测得的吸光度值按下式计算抑
制率。公式为抑制率 =(1 -实验组吸光度值 /对照
组吸光度值)×100%。
2　结果与分析
2.1　大叶冬青不同提取物的抗肿瘤活性
从表 1可以看出 ,鲜叶挥发油和老叶乙醇提取物
具有较强的抗肿瘤活性 ,鲜叶挥发油对肺癌细胞 NCI
-H460和胃癌细胞 SGC-7901的抗肿瘤活性分别为
93.33%和 32.44%, 老叶乙醇提取物对胃癌细胞
SGC-7901的抗肿瘤活性较高 ,抑制率为 62.40%,而
对肺癌细胞 NCI-H460的抗肿瘤活性较低。
表 1　大叶冬青不同提取物的抗肿瘤活性
提取物 抑制率 /%(NCI-H460)
抑制率 /%
(SGC-7901)
嫩叶乙醇提取物 9.03±5.84 33.42±8.16
老叶乙醇提取物 8.56±3.36 62.40±4.35
嫩叶水提取物 9.35±5.63 21.33±7.20
老叶水提取物 12.56±1.26 23.47±1.66
鲜叶挥发油 93.33±5.28 32.44±6.27
2.2　大叶冬青不同浓度挥发油对 NCI-H460(肺癌)
细胞的抑制率
从表 2可以看出大叶冬青不同浓度挥发油对
NCI-H460(肺癌)细胞的抑制率很高 ,其 50μg/mL
高达 71.60%, IC50为 42.86μg/mL
表 2　大叶冬青不同浓度挥发油对 NCI-H460
(肺癌)细胞的抑制率
挥发油 /μg·mL-1 抑制率 /%
6.25 3.28±2.72
12.50 20.61±3.26
25.00 42.52±7.25
50.00 71.60±1.32
100.00 93.33±5.28
3　结　论
(1)用 MTT法对大叶冬青叶不同提取物和挥发
油抗肿瘤活性的测定结果表明 ,大叶冬青提取物具有
一定的抗肿瘤活性。其中老叶乙醇提取物和鲜叶挥
发油抗肿瘤活性最高 ,老叶乙醇提取物对胃癌细胞株
SGC-7901的抑制率为 62.40%,鲜叶挥发油对肺癌
细胞株 NCI-H460抑制率为 93.33%。
(2)鲜叶挥发油实验表明大叶冬青挥发油对 NCI
-H460(肺癌)细胞的 IC50为 42.86μg/mL
(3)研究结果为大叶冬青叶保健 、药用产品的开
发提供了科学依据 ,同时为城市森林建设选择大叶冬
青作为生态保健树种提供了理论依据。至于大叶冬
青含有的挥发物质种类和抑制肺癌细胞的物质的种
类具体是哪种 ,及其作用机理及治疗效果尚待继续研
究和进行临床验证 。
(4)大叶冬青是茶 ,泡茶时 ,香气沁人心脾 ,同时
又具有抗肿瘤等药用价值 ,值得深入研究。大叶冬青
含有多种有效成分 ,如生物碱 、黄酮类化合物 ,因此有
必要进一步研究大叶冬青不同成分的抗肿瘤活性 。
目前 ,抗肿瘤研究只在细胞水平上 ,还需做动物等一
系列实验 ,进而为大叶冬青抗癌功能和保健功能提供
科学依据 。
参考文献
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(通讯地址:221116, 江苏省徐州市铜山新区上海路 101号)
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