全 文 :收稿日期:2010-10-14; 修订日期:2011-03-30
基金项目:教育部科学技术研究重点支持项目(No. 210168)
作者简介:苏 炜(1979-) ,男(汉族) ,广西玉林人,现任广西师范学院副
教授,博士学位,主要从事天然产物活性分子结构修饰与改造研究工作.
黄花棯挥发油化学成分及其抗氧化活性的研究
苏 炜1,李培源2,霍丽妮2,刘良铨1,郭娜娜1,吴采颖1
(1.广西师范学院化学与生命科学学院,广西 南宁 530001;
2.广西中医学院药学院,广西 南宁 530001)
摘要:目的 对黄花棯挥发油化学成分进行分析鉴定并对其抗氧化活性进行研究。方法 用水蒸气蒸馏法提取黄花棯全
草的挥发油,通过 GC - MS分析方法对其挥发油的化学成分进行研究,并采用 ABTS法和铁氰化钾还原法对其抗氧化能
力进行研究。结果 从黄花棯挥发油中鉴定了 21 个化合物,主要成分为植醇(43. 67%)、棕榈酸(18. 33%)、二十烷
(7. 28%)和反 - 9 -十八碳烯酸甲酯(3. 52%)。黄花棯挥发油对 ABTS +·自由基具有较好的清除能力,清除率最高达
到 81. 3%。结论 揭示了黄花棯挥发油化学物质基础,并研究了其抗氧化活性,为综合开发利用黄花棯提供了科学依据。
关键词:黄花棯; 挥发油; 气相色谱 -质谱; 抗氧化
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 09. 032
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2125-02
黄花棯 Sida acuta burm. F.为锦葵科黄花棯属植物,分布于
台湾、福建、广东、广西和云南等地,以全株入药,有清热利湿、排
脓止痛、抗菌消炎等功效[1],可用于治疗感冒发热、扁桃体炎、细
菌性痢疾、泌尿系结石等疾病。由于其功效显著,在民间被广泛
使用。曹剑虹等[2]从黄花稔带根全草中分离鉴定出 4 种成分,分
别为白芷属脑、β -谷甾醇、丁香苷和胡萝卜苷。但关于黄花棯
挥发油化学成分和抗氧化活性的研究未见报道。本研究用水蒸
汽蒸馏法提取黄花棯的挥发油,通过 GC - MS分析方法对其挥发
油的化学成分进行研究,并采用 ABTS法和铁氰化钾还原法对其
抗氧化活性进行研究。
1 仪器与材料
美国 Agilent5973N气相色谱 -质谱(GC - MS)联用仪;北京
Tu - 1800 SPC 紫外可见分光光度计。黄花棯采集于广西玉林,
由广西中医学院壮药学院韦松基教授鉴定为锦葵科黄花棯属植
物黄花棯 Sida acuta Burm. F.。2,2 -联氨 -双(3 -乙基苯并噻
唑啉 - 6 -磺酸盐) (ABTS)购于美国 SIGMA 公司;无水乙醚、无
水硫酸钠、三氯乙酸、铁氰化钾和三氯化铁购于广州西陇化学试
剂公司;其它试剂均为分析纯。
2 方法
2. 1 挥发油的提取[3] 称取新鲜黄花棯全草 100 g ,置于挥发油
测定器烧瓶中。加入蒸馏水 1 500 ml,常压水蒸气蒸馏 5 h。馏
出液加入 50 ml乙醚萃取 3 次,合并萃取液。
2. 2 气相色谱 -质谱联用条件 所用仪器为 Agilent 5973N 气相
色谱 -质谱联用仪(美国安捷伦公司)。色谱条件:HP - 5 MS
(30 m × 0. 25 μm i. d.,film thickness 0. 25 μm)弹性石英毛细管
柱;柱温采用程序升温,即 70 ℃保持 3 min,以 8 ℃ / min速度升
温至 200 ℃保持 5 min,最后以 20 ℃ / min速度升温至 280 ℃,保
持 8 min;载气为高纯氦气(99 . 999 %) ,流量为 1. 0 ml·
min -1;进样量为 1 μl;分流比为 20∶ 1。质谱条件:离子源为电子
轰击源(EI) ;离子源温度 230 ℃;进样口温度 280 ℃;电子能量
70 eV;扫描范围 50 ~ 550 aum。
2. 3 ABTS +·自由基清除能力测定[4] 将 ABTS 用蒸馏水配制
成 2 mmol /L溶液,取 50 ml 上述溶液与 200 ml K2S2O8 水溶液
(70 mmol /L)混合均匀,避光放置 12 ~ 16 h,得到 ABTS +·溶液。
用磷酸盐缓冲液(PBS)将 ABTS +·溶液稀释至最大波长处(Abs
= 734 nm)吸光度为(0. 70 ± 0. 02)。取 0. 8 ml 不同浓度挥发油
药液,加入 4 ml ABTS +·溶液,在 1,3,5 和 10 min 时测其吸光
度。ABTS +·自由基清除率(S%)计算公式如下:
S% =(A0 - A)/A0,
其中 A0 为 ABTS
+·溶液的吸光度,A为加药液后的吸光度。
2. 4 还原能力测定 采用铁氰化钾还原法[5]。取 1 ml 药液,加
入 2. 5 ml PBS溶液(pH = 7. 4)和 2. 5 ml K3Fe(CN)6 溶液(1%) ,
50℃下恒温 20 min。加入 2. 5 ml 三氯乙酸溶液(10%) ,离心 10
min,取上清液 2. 5 ml,加入 2. 5 ml 蒸馏水及 0. 5 ml FeCl3
(0. 1%)。室温放置 10 min后,在最大吸收波长(700 nm)下测吸
光度。
3 结果与讨论
3. 1 化学成分分析 按色谱条件和质谱条件对黄花棯挥发油进
行 GC - MS分析,经过质谱计算机数据系统检索对各色谱峰加
以确认,用峰面积归一化法计算出各成分的相对质量分数,结果
见表 1 。从黄花棯中鉴定了 21 个化合物,占挥发油总质量的
85. 49%。相对含量最高的成分为植醇(43. 67%)、棕榈酸
(18. 33%)、二十烷(7. 28%)以及反 - 9 - 十八碳烯酸甲酯
(3. 52%)。其次为邻苯二甲酸二乙酯(2. 30%)、棕榈酸甲酯
(1. 63%)和苯乙醛(1. 62%)。
3. 2 ABTS +·自由基清除能力测定结果 ABTS在适当的氧化剂
作用下会氧化生成绿色的 ABTS +·,在抗氧化物存在时 ABTS +
·的产生会被抑制,因此在 414 nm或 734 nm测定 ABTS +·的吸
光度即可测定并计算出样品的 ABTS +·自由基清除能力。黄花
棯挥发油对 ABTS +·自由基清除能力如图 1 所示。可见,随着
反应时间的增加,药液对 ABTS +·清除率增加。浓度为 0. 5 mg /
ml的药液,在 1 和 3 min时清除率分别为 31%和 39. 6%,而在 10
min时清除率达到了 45. 9%;浓度为 0. 75 mg /ml 的药液,1 min
时清除率为 43. 9%,10 min时则增大到 67. 2%。同时,随着浓度
增大,药液对 ABTS +·自由基清除能力迅速增大。在 1 min 时,
浓度为 0. 25 和 0. 5 mg /ml 的药液,其 ABTS + ·清除率分别为
20. 9%和 31%,而 1. 0 mg /ml 的药液对 ABTS +·清除率增大到
43. 6%。10 min时,浓度为 0. 25 mg /ml 药液的 ABTS +·清除率
为 28%,而 1. 0 mg /ml的药液对 ABTS +·清除率达到 81. 3%,表
现出较好的 ABTS +·自由基清除能力。
3. 3 还原能力测定结果 还原能力法的原理是样品将
K3Fe (CN)6还原成 K4Fe (CN)6,K4Fe (CN)6 再与 Fe
3 +作用,生
成普鲁士蓝。在 700 nm波长处测定吸光值,可以检测所生成普
鲁士蓝的量,从而可计算样品的还原能力。吸光度的数值越大,
表明药液的还原能力越强。黄花棯挥发油的还原能力测定结果
如图 2 所示。药液在浓度为 0. 25 mg /ml 时吸光度为 0. 18,浓度
为 0. 5 和 0. 75 mg /ml时吸光度分别为 0. 26 和 0. 32,浓度增大到
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1. 0 mg /ml时吸光度为 0. 39。可见,随着药液浓度增大,药液的
还原能力越强。
表 1 黄花棯挥发油化学成分
编号
保留时间
t /min 化合物 分子式 分子量
相对含量
(%)
1 5. 38 Phenylacetaldehyde 苯乙醛 C8H8O 120 1. 62
2 5. 85
2 - Phenylethyl Alcohol 2 -苯
乙醇
C8H10O 122 0. 53
3 6. 13 Terpinolene 异松油烯 C10H16 136 0. 42
4 7. 27
2 - Methoxy - 4 - vinylphenol
乙烯基愈创木酚
C9H10O 150 0. 18
5 8. 59
Trans - Linalool Oxide 反 - α,
α - 5 -三甲基 - 5 - 乙烯基
四氢化 -2 -呋喃甲醇
C10H18O2 170 0. 39
6 9. 10 Undecanal 十一醛 C11H22O 170 0. 67
7 10. 18
3,7 - Dimethyl - 2,6 - octadi-
en - 1 - ol 3,7 -二甲基 - 2,6
-辛二烯 -1 -醇
C10H18O 154 0. 31
8 10. 82
1,6 - Trimethyl - 1,2 - Di-
hydronaphthalene 1,6 - 三甲
基 -1,2 -二氢萘
C13H16 172 0. 29
9 13. 56 Tetradecane 正十四烷 C14H30 198 0. 27
10 18. 30
Diethyl Phthalate 邻苯二甲酸
二乙酯
C12H14O4 222 2. 30
11 22. 55 Octadecanamine 十八胺 C18H39N 270 0. 67
12 22. 92
Dibutyl Phthalate 邻苯二甲酸
二丁酯
C16H22O4 278 0. 37
13 23. 72
Methyl hexadecanoate 棕榈酸
甲酯
C17H34O2 270 1. 63
14 24. 05 Isophytol 异植醇 C20H40O 297 0. 78
15 24. 34 Palmitic Acid 棕榈酸 C16H32O2 256 18. 33
16 26. 87
Elaidic Acid Methyl Ester 反 -
9 -十八碳烯酸甲酯
C19H36O2 296 3. 52
17 27. 07 Phytol 植醇 C20H40O 296 43. 67
18 28. 07 Eicosane 正二十烷 C20H42 283 7. 28
19 29. 64
1 - Chloro - Heptacosane 1 -
氯 -二十七烷
C27H55Cl 415 0. 97
20 30. 53
Ditridecyl Phthalate 邻苯二甲
酸二十三酯
C34H58O4 531 0. 68
21 31. 94 Nonahexacontanoic Acid C69H138O2 1030 0. 61
图 1 黄花棯挥发油对 ABTS +·自由基的清除能力
图 2 黄花棯挥发油的还原能力
4 结论与展望
锦葵科黄花棯属植物黄花棯在民间作为抗菌消炎的药物使
用已有悠久的历史。本论文用水蒸气蒸馏法提取黄花棯全草的
挥发油,通过 GC - MS 分析方法对其挥发油的化学成分进行研
究,并采用 ABTS 法和铁氰化钾还原法对其抗氧化能力进行评
价。从黄花棯挥发油中鉴定了 21 个化合物,均为首次从该植物
挥发油中鉴定出。黄花棯挥发油对 ABTS +·自由基具有较好的
清除能力,且清除能力随药液浓度的增大而增大,清除率最高达
81. 3%。黄花棯挥发油化学成分及其抗氧化活性的分析研究,不
仅揭示了黄花棯的化学物质基础,也将对进一步研究黄花棯提取
物的生物活性提供依据。
参考文献:
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学
出版社,1992:19.
[2] 曹剑虹,齐一萍. 黄花稔化学成分的研究[J]. 中国中药杂志,
1993,11:681.
[3] Faix ,Juhas1 ,Faixová Z. The Effect of Essential Oil Intake on Chan-
ges of Plasma Antioxidant Status in Mice. Acta Vet[J]Brno,2007,76:
357.
[4] Tabart J,Kevers C,Pincemail J,et. al. Antioxidant Capacity of Black
Currant Varies with Organ,Season,and Cultivar [J]. J. Agric. Food
Chem. 2006,54:6271.
[5] Mazor D,Greenberg L,Shamir D,et. al. Antioxidant properties of bucil-
lamine:Possible mode of action[J]. Biochem. Bioph. Res. Co.,2006,
349:1171.
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