全 文 ：　 2010年 2月第 29卷　第 2期
绵阳师范学院学报
JournalofMianyangNormalUniversity
Feb.2010
Vol.29　No.2　
收稿日期:2010-01-04
基金项目:绵阳师范学院科学研究项目(hx-09-10-4),绵阳市科技局自然科学研究重点项目(08Y002-3)
作者简介:李猛 , 绵阳师范学院化学与化学工程学院 2007级本科学生。
＊通讯作者:边清泉(1955-　),男 ,教授 ,主要研究方向:天然产物分离提取与检测。
HPLC法测定马比木中喜树碱的含量
李　猛 ,黄意涵 ,李沁媛 ,沈跃跃 ,易朝秋 ,边清泉＊
(绵阳师范学院化学与化学工程学院 , 四川绵阳　621000)
摘　要:高效液相色谱法测定马比木中喜树碱的含量。色谱柱为 PLATISILTMODS(4.6 ×250 mm, 5 μm);甲
醇∶水(55∶45)为流动相;检测波长 254 nm;柱温 30 ℃;流速 0.9 mL· min-1。 喜树碱线性范围为 0.2 μg-1.8
μg, 平均回收率 100.3%, RSD为 2.0%。该方法分离效果好 、专属性强 、分析速度快 、灵敏度高 , 可作为测定马比木
中喜树碱含量的方法。
关键词:HPLC;喜树碱;马比木
中图分类号:R975　　文献标识码:A　　文章编号:1672-612x(2010)02-0060-03
0　导言
马比木为茶茱萸科植物海桐假柴龙树(NothapodytesPitosporoides(Oliv.)sleum.)的根皮 ,别名公黄珠
子 、追风伞。[ 1-2]多年生草本 ,分布于湖北 、四川及贵州等省 。[ 3]马比木全草入药 ,具有祛风通络 、活血止痛
的功能 ,主治风湿痹痛 、半身不遂 、小儿惊风及跌打损伤等 。[ 4]其根部含喜树碱及喜树碱的甲氧基衍生物 ,
临床上主要用于治疗消化系统恶性肿瘤。[ 5-6]关于马比木中喜树碱的含量测定研究目前尚未见文献报道 ,
本实验采用 HPLC法对重庆黔江马比木根中喜树碱的含量进行测定 ,为进一步研究和开发喜树碱的植物资
源提供科学依据 。
1　实验部分
1.1　仪器和材料
LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括 SPD-10AUP检测器 , CLASS-vp5.0色谱数据
处理工作站 , CTD-6A色谱柱温箱 ,电子分析天平 , FW-80型粉碎机 , KQ250DE型医用超声波清洗器 ,
101-2A型电热鼓风恒温干燥箱 , SZ-93型自动双重纯水蒸馏器。喜树碱对照品购于成都天然产物研究
所(面积归一法测定含量:99.2 %)。马比木 , 采于重庆黔江 ,将其根部阴干 ,粉碎 ,过筛(0.30 mm),待用。
甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为 AR级 ,水为二次重蒸水。
1.2　色谱条件
色谱柱为 DiamonsilTMC18(5 μm, 4.6 mm ×250 mm),流动相:甲醇∶水(5.5∶4.5);流速:0.9 mL.mi
n-1;检测波长:254 nm;柱温:30 ℃;进样量:5μL。分离度大于 1.5;灵敏度为 0.050 AUFS;理论板数按喜
树碱计算均大于 4500。
1.3　样品制备
1.3.1　对照品溶液的制备
精密称取喜树碱对照品 5.0 mg,置 25 mL容量瓶中 ,加水溶解并定容。取 1 mL溶液加水稀释 10倍 ,
摇匀 ,即得对照品溶液 ,备用。喜树碱浓度为 20.0μg·mL-1。
1.3.2　供试品溶液制备
DOI :10.16276/j.cnki.cn51-1670/g.2010.02.015
将马比木样品于 75 ℃下干 12 h,粉碎后过筛(0.30 mm),精密称取样品细粉约 0.1 g,加入 10 mL甲
醇 ,超声(250 W, 30kHz)处理 20 min,过滤 ,滤渣再加入 10 mL甲醇超声 10 min。合并两次提取液 ,转至
25 mL容量瓶中 ,甲醇定容 , 0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液待测 。[ 7]
2　方法与结果
2.1　检测波长的选择
喜树碱对照品与供试品在本实验溶剂体系下 ,用二极管阵列检测器分析了对照品和样品中峰的紫外
光谱 ,紫外扫描图谱表明 ,喜树碱组分光谱图一致 ,最大吸收波长分别为 218nm、254nm和 352 nm, 218 nm
处供试品中其它不明物组分有一定吸收 ,将对测定产生干扰 ,导致测定误差 , 254 nm、352 nm虽无其它组分
干扰吸收 ,但 254nm的吸收更强。同时也兼顾各组分的检测灵敏度 ,确定最佳检测波长为 254 nm。
2.2　流动相的优化
喜树碱含量 HPLC测定流动相文献已有报道。[ 8-9]分别对文献中各流动相进行对比试验 ,结果发现 ,甲
醇与水体积比为 5.5∶4.5流动相体系时 ,峰形良好且保留值适宜 ,样品中喜树碱与相邻组分完全分离(R>
1.5),柱后处理简便 、省时。
2.3　供试品溶液制备条件选择
采用了微波提取 、超声提取 、加热回流提取 、索氏提取等方法。[ 10]其中微波提取速度快 、效率高 ,检测其
残渣无喜树碱特征峰 ,待测组分提取完全。分别以甲醇 、丙酮 、乙酸乙酯 、氯仿为溶剂超声提取喜树碱 ,甲
醇的提取效果最佳。
2.4　线性范围考察
分别精密吸取 1.3.1项制备的标准溶液 1、3、5、7、9 μL,注入高效液相色谱仪测定其峰面积(n=5),以
对照品溶液进样量 X(μg)为横坐标 ,以峰面积均值 Y(μv.s)为纵坐标作图 ,得到线性回归方程为 Y=
1.6199E6X-19573.3,相关系数 r=0.999 9,进样量在 0.2 ～ 1.8μg范围与峰面积呈线性关系良好 。
2.5　精密度试验与稳定性试验
精密吸取供试品溶液 5 μL,连续进样 6次 ,测定喜树碱峰面积 , RSD=1.3%。其结果表明仪器具有较
好的精密度 。
分别取供试品溶液在 0, 4, 8, 16 , 24 h进样分析 ,连续进样 5次 ,测定目标组分的含量 ,以考察供试品溶
液的稳定性 , RSD=1.8%。该结果表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2.6　样品加标回收率试验
精密量取已知含量的供试品溶液共 5份 ,分别加入对照品溶液适量 ,进样分析 ,计算得平均回收率为
100.3%, RSD=2.0%(n=5),结果见表 1。结果表明该方法具有较高的准确度。
表 1　样品加标回收率测定结果(n=5)
Tab.1　Resultsofrecoveryaboutsample(n=5)
样品含量 /μg 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均回 /% RSD/%
40.01 20.00 59.91 99.5
40.01 30.00 71.09 103.6
40.01 40.00 79.29 98.2 100.3 2.0
40.01 60.00 99.59 99.3
40.01 60.00 100.49 100.8
2.7　含量测定
在选定色谱条件下分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液 5 μL行色谱 ,连续进样 5次 ,求峰面积均
·61·第 2期 李猛等:HPLC法测定马比木中喜树碱的含量
值 ,按外标法以峰面积计算马比木中喜树碱的含量为 6.43 mg·g-1。色谱图见图 1。
图 1　对照品与样品 HPLC色谱图
Fig.1　TheHPLCChromatogramofcontrolampleandsample
参考文献:
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DeterminationofCamptothecininMappiaFoetidabyHPLC
LIMeng, HUANGYi-han, LIQin-yuan, SHENYue-yue, YIChao-qiu, BIANQing-quan＊
(SchoolofChemistyandChemicalEngineering, MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan　621000)
Abstract:TodeterminethecontentofcamptothecininmappiafoetidabyHPLC.TakePLATISILTMODS
(4.6×150mm, 5μm)asthecolumn, methanolandwater(55:45)asthemobilephase.Theinspectwavelengh
is254nm;thecolumntemperatureis30 andthevelocityofflowis0.9mL· min-1;thelinealrangeis0.2-
1.8μg, theaveragerateofrecoveryis100.3% andtheRSDis2.0%.Thismethod, withtheadvantagesofgood
separationefect, specificity, highsensibility, rapidanalysis, canbeusedtodeterminethecontentofcamptothe-
cininmappiafoetida.
Keywords:HPLC;campthothecin;mappiafoetida
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