全 文 ：研究报告 香料香精化妆品
FLAVOUR FRAGRANCE COSMETICS
2 0 1 6年2月第1期
F e b . 2 0 1 6 , N o . 1
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白蔹中没食子酸含量测定研究 *
1. 信阳农林学院，河南信阳　464000；
2. 信阳市中药资源开发工程技术研究中心，河南信阳 464000；
3. 信阳市中药分析检测重点实验室，河南信阳　464000
………………王海燕1,2,3　李　娟1,2,3　梁利香1,2,3　陈　琼1,2,3
研究并优化了白蔹中没食子酸含量测定时供试品溶液的最佳制备方法。采用 RP - HPLC 法测定白蔹中没食子酸
含量，并用正交试验法考察了提取方法、提取溶剂、溶剂用量对没食子酸含量测定结果的影响。得出最佳提取条件
为：以 50%（质量分数）甲醇为提取溶剂，加入药材 10 倍体积量的溶剂，超声提取 1 h。其中提取方法因素的影响最
为显著。该方法下没食子酸的提取率高，共存组分干扰小，操作简便易行，可作为白蔹及含白蔹化妆品中没食子酸含
量测定时的供试品溶液制备方法。
白蔹　没食子酸　样品制备　正交试验
Study on the Determination of Gallic Acid in Ampelopsis Japonica (Thunb) Makino*
WANG Hai - yan1,2,3　LI Juan1,2,3　LIANG Li - xiang1,2,3　CHEN Qiong1,2,3
(1. Xinyang College of Agriculture and Forestry, Xinyang 464000, Henan, China; 2. Xinyang Engineering
Research Center for the Exploitation of Chinese Medicine Resources, Xinyang 464000, Henan, China; 3.
Xinyang Key Laboratory of Detection and Analysis of Chinese Medicine, Xinyang 464000, Henan, China)
Abstract:　The optimal preparing method for sample of Ampelopsis Japonica (Thunb) Makino to be used for determining
the content of gallic acid in it was investigated. The RP - HPLC was used as analytical method, and the influence of extraction
method, extraction solvent and solvent dosage on the test results were studied in an orthogonal experiment. The results showed
that the best extraction condition were as follows: the extraction solvent was 50%(mass fraction) methanol, the proportion
of material to solvent was 1∶10(volume ratio), the ultrasonic time was 1 h. The established extraction method showed
higher extracting rate, less coexisting interferential components, which can be used as a method of sample preparation for
determining gallic acid in Ampelopsis Japonica(Thunb) Makino or relative cosmetics.
Key words:　Ampelopsis Japonica (Thunb) Makino　gallic acid　sample preparation　orthogonal test
作 者 简 介
王海燕（1982—），女，硕士，讲师，研
究方向为中药制剂新剂型与新技术的
开发。
联系电话：13613768720
E - mail：512201369@126.com
*基金项目：河南省科技厅 2 0 1 4年度科技计划项目（编号：
142102310213）
收稿日期：2015 - 05 - 07；修回日期：2015 - 06 - 08
白蔹为葡萄科蛇属植物白蔹 A m p e l o p s i s
Japonica（Thunb）Makino 的干燥块根，具有清热
解毒、消痈散结、敛疮生肌之功效 [1]。《神农本草
经》言其“主痈肿疽疮，散结气，止痛。”它是美容
方中常用药，常用以消肿、敛疮及治疗各种皮肤
病。现代医学研究证明，白蔹对皮肤真菌有抑制作
用。白蔹的化学成分包括甾醇及苷类 [2-3]、有机酸
类 [4]、三萜类及蒽醌类 [2,5] 等。没食子酸为白蔹中
抗菌、抗病毒的主要药效成分，且其含量较高 [2-3]。
在《中国药典》（2010 版）中，白蔹药材的质量标
准只有定性分析部分。为更好地控制白蔹生药材
及含白蔹化妆品的质量，更好地利用白蔹生药资源
和适应中药现代化的发展要求，本研究参考其他药
研究报告
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材中没食子酸含量测定 [6-11] 时供试品溶液的制备方
法，应用正交试验优化测定白蔹中没食子酸含量时
的供试品溶液制备方法，探索各因素对没食子酸含
量测定结果的影响，以期制定出提取率高、操作简便
的测定白蔹中没食子酸含量的供试品溶液制备方法。
1　材料与方法
1.1　材料、试剂和仪器
白蔹药材，购于信阳市药材站（经河南同源制
药有限公司检验合格）；没食子酸对照品，中国药品
生物制品检验所，批号 110831 - 200803；纯化水，自
制；乙腈为色谱纯；甲醇、磷酸等试剂均为分析纯。
1100 高效液相色谱仪，美国 Agilent 公司；水
循环恒温水浴箱，上海智城分析仪器制造有限公
司；PB602 - S 电子天平，瑞士 Mettler - Toledo 公
司；SCQ - 8201E 超声清洗仪，上海声彦超声波仪
器设备有限公司。
1.2　制备与测定方法
1.2.1　色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈
- 0.2%（质量分数）磷酸溶液（体积比 3∶97）为
流动相；流速 1.0 mL/min；检测波长为 270 nm。
1.2.2　对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，添加 50%
（质量分数）甲醇制成每 1 mL 含 0.23 mg 没食子酸
的对照品溶液。
1.2.3　供试品溶液制备
取白蔹粉末（过四号筛）约 5 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，参照正交试验的设计加入规定量的
提取溶剂，按设计中的提取方法提取 1 h，放冷，滤
过，再称定质量，用提取溶剂补足减失的质量，摇
匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
1.2.4　测定法
分别精密吸取对照品溶液 10 μL 与供试品溶
液 5～10 μL，注入液相色谱仪进行分析测定。
1.2.5　供试品溶液制备的正交试验
参考文献 [6-11] 与预试验的结果，以提取方法、
提取溶剂、提取溶剂用量为因素，以 L9（3
3）正交表
进行设计。正交试验的因素水平表见表 1。
表 1　因素 - 水平表
水平 A（提取方法） B（V 药材∶V 溶剂） C（提取溶剂）
1 回流提取 [11] 1∶8 甲醇 [8]
2 冷浸提取 1∶10 50% 甲醇 [6,10]
3 超声提取 [6 - 10] 1∶12 水 [9,11]
2　结果与讨论
2.1　正交试验结果
正交试验结果如表 2 所示。
表 2　正交试验结果
试验号
因素 没食子酸质量比
含量 /（mg•g - 1）A B C D
1 1 1 1 1 0.209
2 1 2 2 2 0.298
3 1 3 3 3 0.214
4 2 1 2 3 0.293
5 2 2 3 1 0.220
6 2 3 1 2 0.235
7 3 1 3 2 0.314
8 3 2 1 3 0.340
9 3 3 2 1 0.350
K1 0.721 0.816 0.784 0.779
/
K2 0.748 0.858 0.941 0.847
K3 1.004 0.799 0.748 0.847
R 0.094 0.020 0.064 0.023
注：K 为不同水平时实测数据的累加值，R 为极差
对正交试验的结果进行直观分析，可知各因素
影响的主次顺序依次为提取方法、提取溶剂、溶剂
用量，即提取方法为主要影响因素，溶剂用量影响
最小，在考察范围内，供试品溶液制备的最佳条件
可选择为 A3B2C2。
表 3 为方差分析结果，由 F 值可知提取方法
有极显著性影响，提取溶剂有显著性影响。结合实
际情况，确定制备方法为：用药材 10 倍体积量的
50% 甲醇超声提取。验证试验结果表明，在该条件
下，提取的没食子酸平均质量比为 0.348 mg/g（n =
3，相对标准偏差 0.84%）。
表 3　方差分析表
方差来源 SS γ MS F 值 显著性
因素 A 0.0163 2 0.0082 20.50 **
因素 B 0.0006 2 0.0003 / /
因素 C 0.0070 2 0.0035 8.75 *
误差 E 0.0010 2 0.0005 / /
误差 E* 0.0016 4 0.0004 / /
F0.05（2,4） = 6.94　　F0.01（2,4） = 18.00
第1期　　　　　　　　　　　　　王海燕，等：白蔹中没食子酸含量测定研究
研究报告 香料香精化妆品 2016年2月
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2.2　提取时间考察
按照超声法制备样品，取同一批次白蔹粉末
（过四号筛）5 g，平行称取 5 份，精密称定，置具
塞锥形瓶中，加入 50% 甲醇 50 mL，称定质量，分
别超声处理 30、45、60、90 和 120 min，放冷，再
称定质量，用 50% 甲醇补足减失重量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得供试品溶液。分别精密吸取对
照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，
用外标一点法计算，测定 5 个不同提取时间白蔹样
品中没食子酸含量。结果见表 4。
表 4　提取时间考察结果
提取时间 /min 30 45 60 90 120
没食子酸质量比 /
（mg•g - 1）
0.327 0.338 0.349 0.352 0.351
由表 4 可知，用超声法制备白蔹供试品溶液，
超声提取 60 min，没食子酸基本提取完全。
3　结论
（1）通过正交试验，确定用 HPLC 法测定白蔹
中没食子酸时供试品溶液制备方法的优选参数为
A3B2C2，并用方差分析考察各因素的影响是否具有
统计学意义。结果显示因素 A 有极显著性影响，因
素 C 有显著性影响，因素 B 则无显著性影响。从
经济适用性考虑，确定最佳制备方法为：以药材 10
倍体积量的 50% 甲醇为溶剂，超声提取 60 min。
在此条件下，测得白蔹中没食子酸平均质量比含量
为 0.348 mg/g。
（2）采用本试验确定的样品制备方法制备白蔹
中没食子酸定量分析用供试品溶液，对没食子酸的
提取率高，共存组分干扰小，操作简便易行，为进
一步制定白蔹及含白蔹化妆品的质量标准提供了
参考依据。
参考文献
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●经国家林业局批准，《沉香》国家标准于 2014 年正式列入国家林业标准制定计划，由中国林业科学
研究院木材工业研究所牵头负责起草，标准的制定将促进沉香行业向规范化、规模化发展。
● 2015 年 11 月 25 日，国家知识产权局公开一件由河北中烟工业有限责任公司和云南瑞升烟草技术
（集团）有限公司共同申请的发明专利：一种青莲香型植物卷烟材料的制备方法及应用。
●据商务部的权威数据，2015 年 1-10 月云南省具有较强资源优势的七种主要出口农产品品种中，香
料油的出口值达 9 590 万美元，同比增长 59.8%。
●新疆生产建设兵团农四师伊帕尔汗香料股份公司生产的薰衣草精油热销全国，已成为兵团香料产业
的一张名片。
●湖南松本林基地及深加工项目落户攸县签约仪式于 2015 年 12 月举行。国内以松脂为基本原料进
行松香、松节油深加工的高科技企业——湖南松本林业科技股份公司将投资兴建原料林基地及深加工产业
园建设项目，包括年产 20 000 t 香料中间体生产线一条。
（本刊讯）
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