全 文 :2015年第 28卷第 7期
中国科技 核心期刊
方 药·质量分析
红景天属植物在我国有73种,西藏有32种,
2个变种[1 ],就其青藏高原红景天而言,享有“高
原人参”之美誉。既是珍贵药用植物,亦是药食同
源植物,近年研究表明,红景天具有抗缺氧、抗寒
冷、抗微波辐射、延缓衰老和抗癌等功效,应用广
泛[2 ]。红景天的多种功效与其含有多种活性成分
密切相关,2010版《中华人民共和国药典》中把红
景天苷作为红景天的检测指标,随着研究的深入,
发现没食子酸在红景天成分中占有较大比例,同
时没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基
等多种生物学活性[3 ];目前主要应用于抗菌抗病
毒、抗肿瘤方面,其他行业也有广泛应用。本研究
采用液相色谱法,以其活性成分没食子酸为对照,
对青藏高原红景天进行定量分析研究,并对不同
产地,不同品种进行比较,为进一步开发利用及其
制剂的质量标准研究奠定基础和提供依据。
1 仪器与材料
梅特勒AE200电子天平;岛津LC-20A液相色
谱仪,配 SPD-20A 紫外可见检测器;Shim-pack
VP-ODS 色谱柱(250 mm×4.6 m);Phenomenex
Gemini ODS 色谱柱(250 mm×4.6 mm);WondaSil
C18(150mm×4.6mm);KQ-250DB超声清洗器(250W,
昆山超声仪器有限公司)。甲醇(色谱纯,Fisher公
司);乙醇(分析纯,成都全山化学试剂有限公司);
30%乙醇(取乙醇加水自配);磷酸(上海红卫农药
厂);蒸馏水(自制)。没食子酸(中国食品药品检定
研究院,批号:110831-201204)。青藏高原不同种
红景天由西藏藏医学院组织采集(共20个样品)。
青藏高原不同种红景天中
没食子酸含量的定量分析 *
刘 青 1,2,杜守颖 1△,尼玛次仁 2,米 久 2,次仁旺加 2
1北京中医药大学,北京 100102;2 西藏藏医学院
[摘 要]目的:对青藏高原不同种红景天中没食子酸进行分析,建立定量分析方法,为其进一步利用提供
依据。方法:采用HPLC法测定没食子酸的含量,以30%乙醇提取样品;Shim-pack VP-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm);
甲醇 -0.04%磷酸溶液(10∶90)为流动相;检测波长 274 nm。结果:线性范围为 1.0μg/mL~200.0μg/mL
(R=0.9999),平均回收率为100.49%,RSD为1.8%。结论:该方法简便,准确,重复性、回收率好,可用于青藏高原
不同种红景天中没食子酸含量的测定。
[关键词]红景天;青藏高原;HPLC;没食子酸
[中图分类号]R927.2[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2015)07-0025-03
QuantitativeAnalysisofGallicAcidinDifferentSpeciesofHongJingTian
inQinghai-TibetPlateau
LIU Qing1, 2, DU Shouying1△, NIMA Ciren2, MI Jiu2, CIREN Wangjia2
1 Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China;
2 Tibetan College of Tibetan Medicine
AbstractObjective: To provide reference for further utilization of gallic acid by analyzing gallic acid in differ-
ent species of HongJingTian (Rhodiola rosea L.) in Qinghai-Tibet plateau and establishing the method of quantitative
analysis. Methods: The contents of gallic acid were determined by HPLC, the samples were extracted with 30%
ethanol; Shim-pack VP-ODS chromatographic column (250 mm×4.6 mm); acetonitrile-0.04% phosphoric acid (10∶
90) as the mobile phase; detection wavelength was 274 nm. Results: Linear range was between 1.0 μg/mL and 200.0
μg/mL (R= 0.9999), average recovery rates were 100.49%, RSD was 1.8%. Conclusion: The method, which is simple,
accurate, reproducible and good recovery rate, could be used for content determination of gallic acid in different
species of HongJingTian in Qinghai-Tibet plateau.
KeywordsHongJingTian; Qinghai-Tibet plateau; HPLC; gallic acid
25
Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2015 Vol.28 No.7
中国科技 核心期刊
2.5 线性关系的考察精密配制系列浓度的没食子
酸对照品溶液1.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、
80.0μg/mL、120.4μg/mL、200.0μg/mL,分别精
密进样20μL,测定峰面积,见表1、图2。
根据上述试验结果,没食子酸浓度与其峰面
积之间在1.0~200.0μg/mL范围内,存在良好的
线性关系(R=0.9999)。
2.6 精密度试验精密量取没食子酸对照品溶
液10μl(100μg/mL)重复进样5次,其峰面积测
量值,计算其RSD为0.2%。
2.7 稳定性试验任取样品(2号样品)按正文
方法制备,分别在0、4、9、13、17、21小时测定,计
算其RSD为0.1%,结果表明,样品溶液在21小时
内稳定性良好。
2.8 重现性试验任取样品(4号样品)按正文
方法制备,每隔 1 小时进样 1 次,共 6 次,
(RSD=0.5%n=6)。
2.9 回收率试验采用加样回收法,精密称取适
量的已测知含量的红景天(没食子酸含量为
3.546 mg/g;6号样品)9份,分为低、中、高三个不
同浓度,分别精密加入没食子酸对照品溶液
(1.0 mg/g)7.1 mL、9 0、10.5 mL,计算加样回
收率,结果平均回收率为100.49%,RSD=1.8%。
2.10 样品测定取上述20个样品,按”2.1”色
谱条件测定,计算其中没食子酸的含量,见表2。
2 方法与结果
2.1 色谱条件Shim-pack VP-ODS 色谱柱
(250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇 -0.04%磷酸溶
液(10:90);柱温:25℃;流速:1.0mL/min;检测波
长274 nm。
2.2 供试品溶液制备取本品粉末约2.5g,精
密称定,置50mL量瓶中,加30%乙醇20mL,20℃
超声处理(功率250W,频率40KHz)20分钟,静置
室温,加 30%乙醇稀释至刻度,摇均,精密量取
5 mL,置25mL量瓶中,加 30%乙醇稀释至刻度,
摇均,滤过,取续滤液,即得。
2.3 对照品溶液制备精密称取没食子酸对照
品适量,加30%乙醇制成每1 mL中含0.2 mg的
溶液,即得。
2.4 系统适应性试验取”2.3”项对照品溶液及
供试品溶液,照“2.1”项下色谱条件,各进样
20μl,测得HPLC图谱。理论塔板数按没食子酸
峰计算不低于4000,见图1。
样品
图1 高效液相色谱图
方 药·质量分析
没食子酸对照品
表1 没食子酸线性范围测定结果
进样浓度
/(μg·mL-1)
峰面积值
1.0
128914
20.0
209106
40.0
2508037
80.0
4908562
120.4
7272527
200.0
11929668
图2 没食子酸线性范围测定结果
表2 样品测定结果
样品编号
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
大花红景天
圣地红景天
圣地红景天
圣地红景天
圣地红景天
圣地红景天
圣地红景天
卵萼红景天
卵萼红景天
长鞭红景天
狭叶红景天
产地
林芝.江达县
林芝.色季拉山
林芝.米林县
林芝.郎县
林芝.米拉山
山南.措美县
山南.桑日县
山南.措美县.卡雷拉山
那曲.那曲县
日喀则.昂仁县
林芝.江达县
山南.措美县
山南.措美县.卡雷拉山
拉萨.墨竹工卡县
日喀则.昂仁县
日喀则
拉萨.当雄县
那曲.那曲县
林芝.色季拉山
林芝.林芝县
1.049
1.855
3.546
1.502
0.29
1.365
6.632
0.488
2.775
0.865
1.18
1.068
0.101
2.998
0.975
1.858
1.648
1.017
0.102
0.288
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
名称 含量/(mg· -1)
26
2015年第 28卷第 7期
中国科技 核心期刊
3 讨论
根据相关文献[4-5],流动相比例为甲醇-0.04%
磷酸溶液(10∶90)能保证没食子酸峰与杂质峰的
分离度、理论板数较好;在274nm处有较高的吸
收。对于红景天中没食子酸的提取溶剂选择,比较
了甲醇,70%甲醇,50%甲醇,30%甲醇,乙醇,70%乙
醇,50%乙醇,30%乙醇,其中同浓度的红景天药材
中,30%乙醇作为溶剂时没食子酸的峰面积最大,
故以30%乙醇作溶剂进行提取。本研究采用HPLC
法对青藏高原不同种红景天中没食子酸进行了含
量测定,方法精密度好,测定结果准确。从测定结
果看,青藏高原不同种红景天中没食子酸含量分
别为大花红景天 0.29~6.6 mg/g,圣地红景天
0.10~2.9 mg/g,卵萼红景天1.0~1.6 mg/g,长鞭
红景天0.10 mg/g,狭叶红景天0.28 mg/g。从采
集的20个样品看,传统、市场都可以作为红景天
原药材使用,但就没食子酸含量差异的原因,主要
是品种差异,其生长环境不同(如沙地、草地、岩
石、溪流河畔等),还有采收时间、加工方法、贮藏
条件等。
参考文献
[1] 宋月英,韩慧文,郝素云,等.红景天研究进展[J].武警医学
院学报[J],2004,13(1):66-68.
[2] 尼玛次仁,刘青,多杰仁青,等.青藏高原红景天研究进展及
存在问题[J].中华中医药杂志.2013,28(9):2675-2678.
[3] 李肖玲,崔岚,祝德秋.没食子酸生物学作用的研究进展[J].
中国药师,2004,7(10):767-769.
[4] 章娟,段虎成,毕开顺.HPLC法同时测定大花红景天中的4
个酚类成分的含量[J].北方药学,2011,8(7):13-14.
[5] 顿珠,刘青,索朗其美,等.HPLC法测定藏药余甘子膏中没食
子酸的含量[J].中草药,2010,41(9):1477-1478.
收稿日期:2014-10-25
*基金项目:973计划前期研究专项(编号 2012CB722905)。
作者简介:刘青(1976—),男,讲师,在读博士研究生。研究方
向:中药(藏药)新型与技术。
△通讯作者:杜守颖(1960—),女,博士学位,教授,博士研
究生导师。研究方向:中药新剂型与制剂关键技术的研究。
方 药·质量分析
剪刀股(Ixeris debilis A.Gray)是菊科苦荬菜
属植物剪刀股全草,别名鸭舌草、鹅公英,具有清
热凉血、利尿消肿之功效。用于肺热咳嗽、喉痛、口
腔溃疡、急性结膜炎、阑尾炎、水肿、小便不利;外
剪刀股总黄酮的提取与含量测定 *
马金萍 1,杨 辉 2△
1沙岭子医院药剂科,河北 张家口075000,2 河北北方学院药学系
[摘 要]目的:建立剪刀股总黄酮的提取与含量测定方法。方法:通过正交试验优化剪刀股总黄酮最优提
取条件,采用分光光度法对剪刀股总黄酮的含量进行测定。结果:剪刀股总黄酮含量为3.16%,样品平均回收率
为97.5%,RSD为3.86%。结论:分光光度法测定剪刀股总黄酮含量,方法简便、准确、重现性好。
[关键词]剪刀股;正交试验;总黄酮;含量测定
[中图分类号]R657.3[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2015)07-0027-03
ExtractionandContentDeterminationofTotalFlavonoidsinJia D oGu
MA Jinping1, YANG Hui2△
1 Pharmacy Department of Shalingzi Hospital, Zhangjiakou 075000, China;
2 College of Pharmacy of Hebei North University
AbstractObjective: To establish the extraction methods and content determination of total flavonoids in Jian-
DaoGu (Ixeris japonica). Methods: The extraction conditions of total flavonoids in JianDaoGu were optimized by or-
thogonal design, and the contents of total flavonoids in JianDaoGu were detected by spectrophotometric method. Re-
sults: The contents of total flavonoids in JianDaoGu occupied 3.16%, average recovery rate of the samples were 97.5%,
RSD was 3.86%. Conclusion: Determination method of total flavonoids in JianDaoGu by spectrophotometric method is
simple, accurate and reproducible.
KeywordsJianDaoGu; orthogonal design; total flavonoids; content determination
27