全 文 ：果 树 学 报 2011，28（5）: 814~819
Journal of Fruit Science
广西龙荔遗传多样性的 ISSR分析
潘丽梅 1，3，4，朱建华 2*，秦献泉 2，4，彭宏祥 2，黄凤珠 2，卢美英 1
（1广西大学农学院，南宁 530005； 2广西农业科学院园艺研究所，南宁 530007；
3广西药用植物园，南宁 530023； 4广西作物遗传改良生物技术重点实验室，南宁 530007 ）
摘 要: 选用 l2 条 ISSR 引物组合分析了广西 67 个龙荔单株和 10 个龙眼品种 （单株）、12 个荔枝品种以及 l0 个野
生荔枝单株的遗传多样性，均得到了清晰指纹。 在所扩增的 151 条 ISSR 主带中，有 127 条具有多态性，多态性比率
占 84.11％。所用引物可将供试的品种（单株）区分开来。供试龙荔单株的遗传相似系数在 0．61~0．97，表明广西龙荔种
质具有较广泛的遗传多样性。 龙荔与龙眼、 荔枝间遗传物质存在明显的差异，99 份供试材料间的相似系数变化在
0.53~0.98，在相似系数 0.53 处荔枝供试材料自聚为 1 类，而龙荔与龙眼聚为 1 类，表明龙荔与荔枝的遗传差异较大，
龙荔在遗传物质上更接近龙眼。
关键词: 龙荔； 遗传多样性； ISSR； 广西
中图分类号：S667．2 文献标识码：A 文章编号：1009－9980(2011)05－814－06
Genetic diversity analysis of Dimocarpus confinis in Guangxi by intersim-
ple sequence repeats（ISSRs）
PAN Li-mei1，3，4， ZHU Jian-hua2*， QIN Xian-quan2，4， PENG Hong-xiang2，HUANG Feng-zhu2， LU Mei-
ying1
（1Agriculture College， Guangxi University， Nanning，Guangxi，Guangxi 530005 China； 2Institute of Horticulture， Guangxi Academy of A-
gricultural Sciences，Nanning，Guangxi 530007 China； 3Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plant，Nanning，Guangxi 530023； 4Guangxi
Crop Genetic Improvement and Biotechnology Lab， Nanning，Guangxi 530007 China）
Abstract: Twelve pairs of ISSR primer combinations were used to determine the genetic diversity of Dimo-
carpus confinis in Guangxi. Materials included 67 D. confinis individual plants， 10 longan varieties， 12
litchi varieties and 10 wild litchi plants in Guangxi and all the materials obtained clear fingerprints. A total
of 151 major ISSR bands were observed，and 127 bands （84.11％） were polymorphic． All of the cultivars
could be distinguished with the markers used． Genetic similarities among all D. confinis ranged from 0.61
to 0.97， and it indicated that D. confinis germplasm in Guangxi had abundant genetic diversity. There
were obvious differences among D. confinis， longan and litchi， genetic similarities among all 99 taxa
ranged from 0.53 to 0.98， litchi formed a single cluster and D. confinis and longan formed another clus-
ter at Dice coefficient 0.53. The results showed that D. confinis was closer to longan in genetic material.
Key words： Dimocarpus confinis； Genetic diversity； ISSR； Guangxi
龙荔 [Dimocarpus confinis （How et Ho） H. S. Lo]
又名肖韶子、山龙眼、山荔枝、盲眼果，是无患子科
（Sapindaceae）龙眼属（Dimocarpus）植物，分布于广
西各地、云南南部、贵州南部、广东西部、湖南西南部
和越南北部[1-2]，其中广西是我国龙荔的主要分布区。
龙荔性状介于荔枝、龙眼，且其抗寒性强，在育
种和科研上意义重大[1]。 刘冰浩等[3]应用叶片组织细
胞结构紧密度（CTR 值） 对广西 39 个龙眼品种（单
株）和龙荔进行耐寒性鉴定，结果表明龙荔耐寒性最
强，可用于与龙眼进行远缘杂交培育耐寒品种。陈秀
萍等[4]应用龙荔作龙眼砧木试验，结果表明以龙荔为
砧木对立冬本龙眼有显著的矮化效果。 可见龙荔在
育种等科研上意义重大， 是值得进一步研究与利用
的资源。目前对于龙荔的研究都较为单一，虽然前人
收稿日期： 2010－11－26 接受日期: 2011－02－27
基金项目： 广西农业科学院基本科研业务专项（201035 基）；广西科学基金项目（桂科自 0339023）
作者简介： 潘丽梅，女，硕士，从事果树种质资源研究。 Tel: 13978686371，E-mail: plimei2006@163.com
觹 通讯作者。 Author for correspondence． Tel: 0771-3248990, E-mail： y66899@126.com
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2011.05.016
表 1 供试材料
Table 1 Plant materials of DNA
4 期
已利用龙荔进行过同工酶分析 [5]、RAPD 分析 [6-7]、
AFLP 分析 [8-12]；IST 分析 [13]等，但所利用的龙荔分析
材料少，有的仅用了 1 个单株样本，而且只是用来分
析龙荔与龙眼、荔枝的亲缘关系，未对龙荔种群的遗
传关系进行系统研究， 目前龙荔资源群体的遗传多
样性研究尚未有报道。
ISSR 分子标记简便、快捷，广泛用于品种亲缘
关系和遗传多样性研究[14-15]。 我们应用 ISSR分子标
记技术对广西龙荔种群进行遗传多样性分析， 以期
对其遗传多样性及亲缘关系有更全面了解，为龙荔种
质资源的保护与利用以及龙眼、 荔枝遗传育种提供参
考。
1 材料和方法
1.1 材料
材料采自广西宁明、隆安、灵山、防城、桂林、灵
川、荔浦、邕宁等地的龙荔单株 67 份， 广西大学果
树标本园、 广西农业科学院园艺研究所种质资源圃
的龙眼 10份、荔枝 12 份，以及广西博白县江宁镇野
生荔枝 10份（表 1）。 试样采集方法均为随机采样方
潘丽梅等: 广西龙荔遗传多样性的 ISSR 分析
序号
Number
编号
Code
类型
Species type
序号
Number
编号
Code
类型
Species type
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
宁明-1 Ningming-1
宁明-2 Ningming-2
宁明-3 Ningming-3
宁明-4 Ningming-4
宁明-5 Ningming-5
宁明-6 Ningming-6
宁明-7 Ningming-7
宁明-8 Ningming-8
宁明-9 Ningming-9
宁明-10 Ningming-10
宁明-11 Ningming-11
宁明-12 Ningming-12
宁明-13 Ningming-13
宁明-14 Ningming-14
宁明-15 Ningming-15
宁明-16 Ningming-16
宁明-17 Ningming-17
宁明-18 Ningming-18
宁明-19 Ningming-19
宁明-20 Ningming-20
宁明-21 Ningming-21
宁明-22 Ningming-22
宁明-23 Ningming-23
宁明-24 Ningming-24
龙虎山-1 Longhushan-1
龙虎山-2 Longhushan-2
龙虎山-3 Longhushan-3
龙虎山-4 Longhushan-4
龙虎山-5 Longhushan-5
龙虎山-6 Longhushan-6
龙虎山-7 Longhushan-7
龙虎山-8 Longhushan-8
龙虎山-9 Longhushan-9
龙虎山-10 Longhushan-10
龙虎山-11 Longhushan-11
龙虎山-12 Longhushan-12
龙虎山-13 Longhushan-13
龙虎山-14 Longhushan-14
龙虎山-15 Longhushan-15
龙虎山-16 Longhushan-16
龙虎山-17 Longhushan-17
龙虎山-18 Longhushan-18
龙虎山-19 Longhushan-19
龙虎山-20 Longhushan-20
龙虎山-21 Longhushan-21
龙虎山-22 Longhushan-22
龙虎山-23 Longhushan-23
龙虎山-24 Longhushan-24
龙虎山-25 Longhushan-25
龙虎山-26 Longhushan-26
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D.confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
龙虎山-27 Longhushan-27
植物所-1 Zhiwusuo-1
植物所-2 Zhiwusuo-2
灵川-1 Lingchuan-1
灵川-2 Lingchuan-2
灵川-3 Lingchuan-3
荔浦-1 Lipu-1
邕宁-1 Yongning-1
热作所-1 Rezuosuo-1
热作所-2 Rezuosuo-2
热作所-3 Rezuosuo-3
防城-1 Fangcheng-1
防城-2 Fangcheng-2
防城-3 Fangcheng-3
防城-4 Fangcheng-4
防城-5 Fangcheng-5
灵山-1 Lingshan-1
07-3
07-4
07-5
07-6
07-7
07-8
07-9
07-10
07-11
07-12
桂味 Guiwei
鸡嘴荔 Jizuili
灵山香荔 Lingshanxiangli
三月红 Sanyuehong
立夏红 Lixiahong
无核荔枝 Wuhelizhi
禾荔 Heli
糯米糍 Nuomici
钦州红荔 Qinzhouhongli
黑叶 Heiye
贵妃红 Guifeihong
桂糯 Guinuo
灵龙 Linglong
东壁 Dongbi
储良 Chuliang
立冬本 Lidongben
大乌圆 Dawuyuan
石硖 Shixia
春龙早 1 号 Chunlongzao No. 1
春龙早 2 号 Chunlongzao No. 2
桂香 Guixiang
桂明 1 号 Guiming No.1
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
龙荔 D. confinis
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
野生荔枝 Wild litchi
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培荔枝 Litchi (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
栽培龙眼 Longan (cv.)
815
果 树 学 报 28 卷
式，采集嫩绿或成熟叶数片，放于密封口袋置于冰盒
中带回实验室，于-30℃低温冰箱中保存备用。
1.2 方法
1.2.1 基因组 DNA 的制备 采用改良的 CTAB 法
提取龙荔基因组 DNA[15]。
1.2.2 PCR 反应与电泳 ISSR 引物、dNTP、Taq 聚
合酶等均购自上海生工公司。 PCR 反应程序: 94℃
预变性 5 min；94 ℃变性 1 min， 退火 1 min，72 ℃延
伸 2 min，共 40 个循环，72 ℃延伸 10 min，4 ℃保存。
扩增产物于 2％琼脂糖凝胶电泳，100 bp ladder DNA
Marker 作为标准分子量对照，溴化乙锭（EB）染色，
紫外凝胶成像系统照相。
1.2.3 数据统计与分析 ISSR 为显性标记，同一引
物扩增产物中电泳迁移率一致的条带被认为具有同
源性， 电泳图谱中的每一条带均视为 1 个分子标记
（Marker），并代表一个引物结合位点。 对 DNA 条带
进行统计，按照条带的有或无赋值，在相同迁移位置
上有带记为 1，无带记为 0，依此构成 0/1 遗传相似
矩阵。对于多态位点，仅在重复试验中能够稳定出现
的用于数据分析。 二元数据矩阵用 NTSYS2.1 软件
中的 DICE 法计算遗传相似系数，UPGMA 法聚类分
析，绘制树状聚类图。
2 结果与分析
2.1 多态性分析
12 条 ISSR 引物扩增到 151 个条带， 其中多态
性条带 127 个，多态性比例为 84.11％，说明样品间
存在的遗传差异较大（表 2）。
2.2 不同地区龙荔遗传多样性聚类分析
从图 1可以看出， 龙荔种群遗传相似系数变化
表 2 ISSR 引物和多态性分析
Table 2 ISSR primers and polymorphic analysis
图 1 67 个龙荔样品的 ISSR 聚类分析
1~67 对应品种名同表 1
Fig. 1 Dendrogram of phylogenetic relationship among 67 Dimocarpus confinis by ISSR markers based on UPGMA analysis
1 to 67 mean cultivar name same Table 1
1
2
3
5
4
6
7
8
9
10
11
12
14
13
15
16
17
19
20
21
22
23
18
24
58
55
54
56
52
53
57
60
63
66
65
64
62
59
61
67
25
26
27
29
30
31
32
33
34
40
39
28
36
37
38
35
41
42
43
45
48
49
44
47
46
50
51
0.61 0.70 0.79 0.88 0.97
Coefficient
引物
Primer
多态性条带数量
Number of
polymorphic bands
总条带数量
Number of
total bands
多态性比例
Percentage of
polymorphic
bands/%
UBC807
UBC811
UBC816
UBC829
UBC847
UBC848
UBC856
UBC862
UBC866
UBC880
UBC889
UBC891
总计 Total
平均 Average
10
6
11
10
13
11
13
13
12
12
7
9
127
12
8
13
11
16
14
16
15
13
14
9
10
151
83.33
75.00
84.62
90.91
81.25
78.57
81.25
86.67
92.31
85.71
77.78
90.00
84.11
816
5 期
图 2 99 份 DNA 供试材料的 ISSR 聚类分析
1~99 对应材料名称见表 1
Fig. 2 Dendrogram of polymorphic relationship among 99 plant materials of DNA by ISSR cluster analysis
1 to 99 mean cultivar name same Table 1
0.53 0.64 0.75 0.87 0.98
Coefficient
1
2
3
5
4
6
7
8
9
10
11
12
14
13
15
16
17
19
20
21
22
23
18
24
58
60
63
66
65
64
62
59
61
52
53
55
54
56
57
67
25
26
27
29
30
31
32
33
34
40
39
28
36
37
38
35
41
42
43
45
48
49
44
47
46
50
51
90
91
92
98
99
94
95
96
97
93
68
69
70
71
72
75
77
73
76
74
83
87
88
89
80
86
78
79
85
84
82
81
潘丽梅等: 广西龙荔遗传多样性的 ISSR 分析 817
果 树 学 报 28 卷
在 0.61～0.97。 在 0.61相似水平下，龙荔种群可分为
2 个类群， 隆安龙虎山一带 27 份材料聚为一个类
群，其余 40 份材料聚为另一个类群，并在 0.64 相似
水平下再分为 2个类群， 其中采自宁明县的所有龙
荔材料自聚为一个类群，另外采自灵山、邕宁、桂林
（包括灵川、荔浦、广西植物研究所），防城以及广西
亚热带作物研究所的材料聚为一个类群；此外，采自
灵山的龙荔材料在相似水平为 0.79 时聚为一个类
群，而采自邕宁的龙荔材料在相似水平为 0.81 时也
聚为一个类群，其余在相似水平为 0.85 时分为 2 个
类群，一个类群是采自桂林一带的龙荔材料，另一个
类群是采自防城一带的龙荔材料。 在采自龙虎山一
带的龙荔类群中， 采自龙虎山龙马的龙荔材料在相
似水平为 0.70 时聚为一个类群， 而采自龙虎山龙
尧、底隘屯的龙荔材料各聚为一个类群。
2.3 龙荔与龙眼、荔枝间的亲缘关系分析
对 67 份广西龙荔材料、10 份龙眼品种 （单株）
材料、12 份荔枝品种材料以及 10 份野生荔枝材料
进行 ISSR标记聚类分析，作种群间个体亲缘关系图
谱。 结果显示 99份材料间的相似系数变化为 0.53～
0.98。 如果以 0.53 作为相似系数分界点，99 份材料
通过基因组 ISSR 分析先分成 2 大类（图 2），其中荔
枝自聚为一类，龙眼与龙荔种群聚为一类。在聚类图
中，龙荔和龙眼亲缘关系较近，在 0.58 处聚在一起，
可见在亲缘关系上龙荔更靠近龙眼。
3 讨 论
利用12 条 ISSR 引物对广西龙荔资源进行多样
性研究，结果显示龙荔种群间的地域关系较为明显。
首先是崇左市宁明县那堪的野生龙荔在相似系数为
0.75时聚为一类，该野生群体位于中越边境山脉，据
当地人介绍， 之前曾在附近大山丛林中发现有大面
积野生龙荔， 因此可推测宁明县那堪的龙荔应属于
较原始的类群。 来自南宁隆安县龙虎山一带的野生
龙荔资源在相似系数为 0.67 时聚为一个大类，而且
显示出较丰富的遗传多样性， 其中底隘屯和龙尧的
两个龙荔单株在相似系数为 0.88 时与龙虎山龙马
的龙荔群体分开而聚为一个类群， 说明在实生繁殖
的情况下，由于种子传播距离有限，使得不同地理位
置的实生群体在遗传物质上产生了一定的差异。 此
外，桂林（包括灵川、荔浦、广西植物研究所）、防城、
灵山和邕宁的龙荔资源在相似系数为 0.77 时聚为
一类，在这个类群中，除防城-1、防城-2、防城-3 生
长于山野外，其余均为人工种植，因此不排除上述人
工种植的龙荔最初来源于具有相似遗传背景的野生
群体； 其中广西亚热带作物研究所保存的 2 份龙荔
种质与防城龙荔在相似系数为 0.86 时聚在一起，推
测这 2份龙荔种质可能来源于防城种群； 桂林市所
属灵川、 荔浦和广西植物研究所的龙荔种质在相似
系数为 0.84 时聚在一起，由于三地之间距离相对较
近，且桂北地区龙荔资源数量少，推测它们之间的来
源更为接近。另外，桂林与防城的龙荔在相似系数为
0.84时聚在一起，亲缘关系较近，由此可推测桂林人
工种植的龙荔有可能来源于防城。 由于龙荔人工种
植主要采用实生繁殖， 从而出现了不同单株间遗传
多样性的变化。
同时，通过与龙眼、荔枝的亲缘关系分析，表明
龙荔与龙眼、荔枝间遗传物质存在明显的差异，龙荔
与荔枝的遗传差异较大， 而龙荔在遗传物质上更接
近龙眼，得出了与前人相同的结论[5-6]。
4 结 论
利用 12 条 ISSR 引物对 67 份龙荔种质、10 份
龙眼种质、22 份荔枝资种质进行遗传多样性研究，
分析结果表明，广西龙荔资源具有较丰富的遗传多
样性，来自不同区域的遗传差异性较大。 但龙荔与
龙眼、荔枝间遗传物质存在明显的差异，龙荔与荔
枝的遗传差异较大，而龙荔在遗传物质上更接近龙
眼。
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5 期 潘丽梅等: 广西龙荔遗传多样性的 ISSR 分析
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