全 文 ：地锦粗提物对脾虚小鼠抗氧化能力影响的试验
刘力源 1，李 静 1，任 捷 1，李敬文 2
（1.安徽科技学院，安徽 凤阳 233100；2.滁州市第一人民医院，安徽 滁州 239000）
摘要：为了探讨地锦粗提物对脾虚小鼠脏器抗氧化能力的影响。 采用泻下加劳倦过度的方法建立脾虚模型，造模时间
为 60 d，期间测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和血浆淀粉酶活性，二者活性显著降低后为脾虚模型建立。 建立脾虚
模型前和脾虚模型建立后相比较：脾虚组和地锦组小鼠的血浆淀粉酶活力均降低，均差异显著（P<0.05）；脾虚组和地锦
组的血浆 GSH-PX 活力均降低，差异显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）。 将脾虚模型小鼠随机分为脾虚组和地锦组，同时
设对照组。 地锦组每天给予地锦水煎剂 30 g/（kg·bw），脾虚组和对照组给予相同剂量的生理盐水，试验期为 60 d。 试验
结束后，剖杀各组小鼠，取内脏，测超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果表明，脾虚组和地锦组小
鼠各脏器 SOD的活力均低于对照组，差异显著（P<0.05）或极显著（P<0.01），且随地锦粗提物试验期的增加，地锦组小鼠
SOD 的活力较脾虚组高，差异显著（P<0.05）；脾虚组和地锦组 MDA 的含量较对照组高，且差异显著（P<0.05）或极显著
（P<0.01），随地锦粗提物试验期的增加，脾虚组 MDA的含量较地锦组高，差异显著（P<0.05）。 表明地锦水煎剂粗提物可
明显提高脾虚症状小鼠抗氧化能力。
关键词：地锦；脾虚；抗氧化；动物模型
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章顺序编号：1672-5190（2010）10-0012-03
Effect of Crude Extracts from Herba Euphorbiae humifusae on Antioxidant Index of Spleen -
deficiency of Mice
LIU Li-yuan1, LI Jing1, REN Jie1, LI Jing-wen2
（1.Anhui Science and Technology University，Fengyang 233100, China；2.The First People Hospital of Chuzhou, Chuzhou 239000,
China）
Abstract：This experiment was designed to study the effect of crude extracts from Herba E. humifusae on antioxidant index of mice with
spleen -deficiency. The modle was set up to produce splenasthenic syndrome by adopts lapactic and exhaustion for 60 days, the
established modle was ensured by determining the activity of GSH-PX and amylase in plasma, when they significantly decline（P<0.05）
or （P<0.01）compared with that of the former, then mice which is spleen-deficiency were randomly divided into the group of spleen-
deficiency（SD） and the group of E. humifusae（EH）, and the control group（C） also was settled. The animals of EH was given decoction
of 30 g/（kg·bw）, while the same dosage of sodium chloride in SD and C. 60 days later, the trial animals were treated, the content of SOD
and MDA was detected. The result showed that SOD activity in SD and EH is markedly lower than that of C（P<0.05）, with the elongation
of using crude extracts from Herba E. humifusae, SOD activity was markedly higher than that of SD （P<0.05）; Meanwhile, MDA activity
in SD and EH is markedly higher than that of C （P<0.05）, with the elongation of using crude extracts from Herba E. humifusae, MDA
activity was markedly higher than that of EH（P<0.05）. The conclusion could be made that the crude extracts of Herba E. humifusae can
enhanced the anti-oxidation activity obviously.
Key words：Herba Euphorbiae humifusae；spleen-deficiency; antioxidant; animal model
中医诊断“脾虚”，是以脾的生理功能减退所出现的一
系列症状为依据。目前对脾虚证的动物模型研究比较广泛。
陈小野等 ［1］对脾虚证动物模型的规范化进行初步研究，表
明复制的脾虚模型有小肠吸收功能障碍、 细胞免疫功能低
下和植物神经功能紊乱的改变，与临床脾虚证较为吻合。曲
长江等 ［2］采用大黄泻下与劳倦过度方法建立脾虚模型，并
对脾虚模型的免疫学影响进行比较研究， 结果表明劳倦过
度不失为一种确切有效的、便于长期施加的脾虚造模因素。
同时， 亦说明了复合因素在脾虚造模上占有绝对的优势。
脾虚证的试验研究需进一步与现代临床医学结合， 中西合
璧，探索到更多的与脾虚证有关的因素。同时检测脾虚证的
指标要多元化，要具有特异性，为临床诊断疾病提供更具代
表性的标准和模式，从而为治疗提供客观可靠的依据。
地锦作为常用中药材，具有清热解毒、凉血止血、利湿
通乳等功效。 近 10 年来，人们对地锦的化学组成及其生物
学活性的研究取得了重大进展。谭红等［3］对地锦总黄酮的体
外抑菌研究结果表明，总黄酮（TFEH）具有很强的清除和抑
制自由基的作用。陈福星等 ［4］研究了地锦对老龄小鼠不同组
织 SOD 活力和 MDA 含量的影响， 试验进一步表明地锦具
有较强的抗氧化能力。 随着社会的发展，人们工作、生活节
奏越来越快，过度劳累、心力交瘁更容易“夺其精气”，使体
内脂质过度氧化，形成脾虚症状。 地锦如能应用于临床治疗
由于过氧化损伤引起的脾虚、 运动补剂的开发以及改善机
体内部环境，将有很大的应用前景。
1 试验材料与试剂
1.1 试验动物 试验动物购于安徽科技学院畜牧科技园。
选择 50 日龄健康的昆明小鼠 30 只， 按体重相近的原则分
成 3组，即对照组（n=11）、脾虚组（n=9）和地锦组（n=10）。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 主要仪器： 紫外可见分光光度计 （型号 ：UVmini-
1240）、可调移液器（型号：50～250 μL）、TDL-50B 型低速台
收稿日期：2010－10－11
基金项目：安徽科技学院大学生创新课题基金资助；安徽科技
学院引进人才专项基金资助项目（ZRC2007139）。
作者简介：刘力源（1988—），男，主要研究方向为动物医学。
通讯作者：李静（1979—），女，讲师，博士，主要研究方向为中草
药。
Animal Husbandry and Feed Science畜牧与饲料科学 2010，31（10） :12-14
DOI:10.16003/j.cnki.issn1672-5190.2010.10.041
式离心机、STSY-2 型数显恒温水浴箱、DY89-I 型电动玻璃
匀浆机等。
1.2.2 试验试剂：超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、丙二
醛（MDA）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定
试剂盒、淀粉酶（AMS）测定试剂盒（试剂盒购于南京建成生
物工程研究所），大黄、芒硝、厚朴、枳实（购于凤阳县华佗药
店），地锦（安徽科技学院校园内采集）。
1.3 大承气汤、地锦粗提物的制备 大黄、芒硝、厚朴、枳实
按重量 1∶2∶1∶1 配伍，后三者先一起煎沸 30 min 后，加大黄
再共煎沸 10 min，过滤后，药渣二煎 30 min，合并滤液，加乙
醇再过滤浓缩即配成大承气汤（1 g生药/mL）。
将采集的地锦洗净、干燥后切碎。 取 100 g 地锦碎片，
加 500 mL水煮沸 1 h后，加乙醇 30 mL得浸膏，过滤后浓缩
成 100 mL地锦水醇浸出液（1g生药/mL）。
2 试验方法
2.1 脾虚模型的建立 劳倦：让小鼠游泳至力竭（勿死亡），
水温为 28～32℃，水深为 50 cm，为保证小鼠的运动强度，应
避免其以尾撑底休息。 为缩短游泳时间， 采用负重游泳方
法， 所负重量应少于小鼠在水中维持呼吸所能承受的最大
重量（约占体重的 6%～8%）。
泻下：造模组每天按 30 g/（kg·bw）的剂量灌服大承气汤
（1 g生药/mL），对照组灌服等量生理盐水。
劳倦+泻下连续操作，1 次/d，连续 60 d，至出现食欲减
退、泄泻、消瘦、被毛失泽后，采血检测血浆淀粉酶和 GSH-
PX活性，直至造模组小鼠的血浆淀粉酶和 GSH-PX 活性明
显低于对照组为止。 至此脾虚模型基本建立。
2.2 给药方案 脾虚模型建立后， 进行地锦粗提物对脾虚
小鼠抗氧化能力影响的试验， 试验期为 60 d。 具体给药方
案：对照组和脾虚组每只小鼠每天按 30 g/（kg·bw）的剂量
灌服生理盐水， 地锦组每只小鼠每天灌服等量地锦粗提液
（1 g生药/mL）。
2.3 样本采集及检测方法
2.3.1 样本采集： 建立脾虚模型前， 全部小鼠眼眶静脉采
血，检测 GSH-PX 和血浆淀粉酶活性；造模期间，定期采血
检测 GSH-PX 和血浆淀粉酶活性，直至二者活性显著降低，
即造模成功。脾虚模型建立后，进行地锦粗提物对脾虚小鼠
抗氧化能力的影响试验，试验期为 60 d。 试验结束后，剖杀
各组小鼠，取心、肝、脾、肺、肾称量，制备 10%匀浆液，测定
各脏器匀浆液的 SOD活性和 MDA含量。
2.3.2 检测方法：
①血浆淀粉酶活性测定：采用 IFCC速率法。
②谷胱甘肽过氧化物酶 （GSH-PX） 活性测定： 采用
DTNB法。 组织中 GSH-PX 酶活力：每毫克蛋白质每分钟扣
除非酶促反应作用，使反应体系中 GSH 浓度降低 1 μmol/L
为一个酶活力单位。
③超氧化物歧化酶（SOD）活性测定：采用黄嘌呤氧化
酶法。
④丙二醛（MDA）含量：采用硫代巴比妥比色法。
2.4 数据处理 用 SPSS 18. 0 软件对数据进行方差分析，
结果以平均数±标准差（x±SD）表示。
3 结果与分析
3.1 血浆淀粉酶活性检测 采用泻下加劳倦过度的方法
建立脾虚模型，造模时间为 60 d 。 脾虚模型建立前后各组
小鼠血浆淀粉酶活力测定结果见表 1。
从表 1 可以看出， 建立脾虚模型前和脾虚模型建立后
相比较，脾虚组和地锦组的血浆淀粉酶活力均降低，均差异
显著（P<0.05）。 对照组的血浆淀粉酶活力差异不显著（P >
0.05）。
3.2 各组小鼠血浆 GSH-PX 活力的测定 采用泻下加劳
倦过度的方法建立脾虚模型，造模时间为 60 d。脾虚模型建
立前后各组小鼠血浆 GSH-PX 活力测定结果见表 2。
从表 2可以看出， 建立脾虚模型前和脾虚模型建立后
相比较，脾虚组和地锦组的血浆 GSH-PX 活力均降低，差异
显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）。对照组的血浆 GSH-PX 活
力差异不显著（P >0.05）。
3.3 各组小鼠脏器 SOD 活力的测定 地锦粗提物对脾虚
小鼠抗氧化能力的影响试验结束后， 测各组小鼠脏器 SOD
的活力，测定结果见表 3。
从表 3 可以看出， 脾虚组和地锦组分别与对照组相比
较，脾虚组小鼠心、肝、脾和肾中 SOD 活力均降低，均差异
极显著（P<0.01），肺中 SOD活力降低差异不显著（P >0.05）；
地锦组小鼠心、肝、脾和肾中 SOD 活力均降低，均差异显著
（P<0.05），肺中 SOD活力降低差异不显著（P >0.05）。脾虚组
和地锦组比较，地锦组小鼠肝和脾中的 SOD 活力高于脾虚
表 1 各组小鼠血浆淀粉酶活性检测
组别
对照组
脾虚组
地锦组
劳倦
否
是
是
大承气汤
[g/（kg·bw）]
0
30.0
30.0
造模前
1.18±0.13
1.17±0.33
1.18±0.12
造模后
1.18±0.30
0.83±0.11A
1.16±0.23a
血浆淀粉酶活性（U/mL）
注：同行之间比较，不同小写字母表示差异显著（P<0. 05），
不同大写字母表示差异极显著（P<0. 01），表 2同。
表 2 各组小鼠血浆 GSH-PX活力的测定
组别
对照组
脾虚组
地锦组
劳倦
否
是
是
大承气汤
[g/（kg·bw）]
0
30.0
30.0
造模前
274.74±58.43
161.19±51.88
178.43±41.28
造模后
269.65±54.21
151.24±43.28a
200.34±34.27A
血浆 GSH-PX活力（U/mL）
组别
对照组
脾虚组
地锦组
心
466.56±68.46
357.63±120.10A
375.24±111.29a
肝
325.21±83.28
226.01±99.37A
273.60±52.55aA
脾
428.06±193.26
257.41±19.01A
270.09±29.47aA
肺
259.14±130.92
225.19±32.31
240.15±34.49
肾
320.12±63.02
218.86±43.25A
264.95±64.15a
各脏器匀浆液中 SOD活力（U/mg）
表 3 各组小鼠脏器 SOD活力的测定
注：同列之间比较，小写字母表示差异显著（P<0. 05），大写字母表示差异极显著（P<0. 01），表 4 同。
刘力源等：地锦粗提物对脾虚小鼠抗氧化能力影响的试验第 10 期 13
组别
对照组
脾虚组
地锦组
心
1.59±1.04
3.06±1.29A
2.49±1.36a
肝
1.99±1.24
4.25±3.22aA
2.73±1.37a
脾
0.61±0.31
1.17±0.48aA
0.66±0.17
肺
0.41±0.15
1.78±1.62A
0.48±0.28
肾
1.00±0.43
1.44±0.64A
0.98±0.49a
各脏器匀浆液中 MDA 活力（nmol/mg）
表 4 各组小鼠脏器 MDA含量的测定结果
陈小野，周永生，樊雅莉，等.脾气虚证动物模型规范化的
初步研究［J］.中国医药学报，2001，16（4）：52-58.
曲长江，夏淑杰，林庶如.大黄泻下与劳倦过度单复脾虚模
型免疫学研究［J］.辽宁中医杂志，1999，26（2）：85-86.
谭红，刘伟.地锦草总黄酮的体外抑菌试验［J］.中兽医医药
杂志，2007（4）：5-6.
陈福星，陈文英，宫新城，等.地锦草对老龄小鼠不同组织
SOD 和 MDA 的影响［J］.中国兽医杂志，2009，45（1）：53-
54.
LOVLIN R，COTTLE W，PYKE I，et al. Are indices of free
radical damage related to exercise intensity［J］.European Jour-
nal of Applied Physiology and Occupational Physiology，
1987， 56（3）： 313-316.
胡琳琳.复合因素塑造劳倦过度脾虚证动物模型的实验研
究［D］.西安:西北大学，2005.
王镜岩，朱圣庚，徐长法 .生物化学［M］.北京：高等教育出
版社，2002：96-102. □
组，差异显著（P<0.05），其他脏器的 SOD 活力差异不显著（P
>0.05）。
3.4 各组小鼠脏器 MDA 含量的测定 地锦粗提物对脾虚
小鼠抗氧化能力的影响试验结束后， 测各组小鼠脏器中
MDA 的含量，测定结果见表 4。
从表 4 可以看出， 脾虚组和地锦组分别与对照组相比
较，脾虚组小鼠心、肺和肾中 MDA 含量均升高，均差异极显
著（P<0.01），肝和脾中 MDA 含量升高差异显著（P<0.05）或
差异极显著（P<0.01）；地锦组小鼠心、肝和肾中 MDA 含量
均升高，均差异显著（P<0.05），脾和肺中 MDA 含量均升高，
但差异不显著（P >0.05）。脾虚组和地锦组比较，脾虚组小鼠
各脏器 MDA 含量较地锦组高，两组间小鼠脾、肺中 MDA 含
量差异显著（P<0.05），其他脏器差异不显著（P >0.05）。
4 讨论
自由基是引起许多疾病与损伤病理过程的重要因素。
运动时自由基产生增多， 被认为是引起运动性疲劳的重要
原因之一 ［5］。 大量研究已经证实，人体内本身就具有清除多
余自由基的能力，这主要是靠内源性自由基清除系统，它包
括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶
等一些酶和维生素 C、维生素 E、还原性谷胱甘肽、胡萝卜素
和硒等一些抗氧化剂。 血浆中淀粉酶活性显著降低是脾虚
症状量化指标之一 ［6］，脾虚模型建立前和建立后相比较，脾
虚组和地锦组小鼠的血浆淀粉酶活力均降低， 均差异显著
（P<0.05）。 GSH-PX 是动物机体的重要抗氧化指标，建立脾
虚模型期间，在各抗氧化指标中以 GSH-PX 变化最为明显，
全血中 GSH-PX 活性， 脾虚组和地锦组显著低于对照组。
SOD为体内重要的清除活性氧金属酶， 其活性的相对稳定
对维持机体正常生理机能极为重要，SOD 的指标可以相对
反映地锦粗提物清除体内自由基的作用， 地锦粗提物可使
血清 SOD 的活性明显升高， 从而提高机体的抗氧化能力。
其中地锦组肝、脾中 SOD 活性较脾虚组高，差异显著（P<
0.05），而两者肺中 SOD 活性差异不显著（P >0.05）。 这可能
反映了地锦粗提物对抗氧化酶影响的组织差异以及酶在不
同组织中的代谢差异。 丙二醛（MDA）是机体脂质氧化的产
物，当生物膜的脂质发生过氧化作用后，其流动性必然发生
改变，严重时其生物活性丧失 ［7］，MDA 能够与细胞内各种成
分发生强烈反应，引起对酶和膜的严重损伤，最终导致对膜
结构的破坏及其生理功能的影响。 其含量是机体抗氧化功
能的又一个重要指标，MDA 含量的变化反映了组织细胞受
自由基攻击的程度以及脂质过氧化程度。从试验结果看来，
地锦水煎剂粗提物能显著抑制 MDA 的产生， 尤其是在心、
肺、肾的组织中，地锦组 MDA 含量明显低于脾虚组，均差异
极显著（P<0.01），并有接近对照组的趋势。 进一步表明地锦
粗提物具有明显的抗氧化能力。
关于因过度运动机体脂质过度氧化造成多余自由基积
累，中医理论认为，“虚劳”即呈脾虚症状，目前多使用一些
西药对其进行治疗，由于西药毒副作用大，往往难以付诸实
际应用。地锦为中医常用药物，毒副作用很小。该研究表明，
灌服地锦水煎液可明显提高脾虚症状小鼠血浆及脏器的抗
氧化能力。通过初步研究，地锦如能应用于临床治疗由于脂
质过度氧化损伤引起的脾虚疾病、运动补剂的开发、改善机
体内部环境，将有很大的应用前景。
参考文献：
［1］
［2］
［3］
［4］
［5］
［6］
［7］
畜牧与饲料科学 第 31 卷14
《畜牧与饲料科学》杂志简介
★中国畜牧兽医优秀期刊 ★中国期刊方阵双效期刊
《畜牧与饲料科学》是经科技部和国家新闻出版总署批准的学术类期刊。 1973 年创刊，是《中国学术期刊综合评价数
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艺设备、生态工程、特种养殖等。
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