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龙脷叶提取物的抗氧化活性研究



全 文 :第 1 期
第 55 卷第 8 期
2016 年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 55 No.7
Apr.,2016
2
1
1
Jan
6 1
7
6
7
收稿日期:2016-04-29
基金项目:广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室开放课题项目(kfkt2016045);2015 年自治区级大学生创新创业训练计划立项项目
(201510599055);国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科中药化学建设项目(国中医药人教发[2012]32 号);广西重点学科
药物化学建设项目(桂教科研[2013]16 号);广西高校科技创新能力提升工程建设项目(桂教科研[2015]5 号)
作者简介:陆秋娜(1993-),女,广西河池人,2012 级临床医学在读本科生,(电话)18778696617(电子信箱)lqn19930914@163.com;通信作者,
黄锁义(1964-),男,教授,主要从事食品卫生、天然产物化学、药物化学等的研究工作,(电话)0776-2850590(电子信箱)
huangsuoyi@163.com。
龙脷叶为大戟科植物龙脷叶(Sauropus spatuli-
folius Beille)的干燥叶[1],主要产于中国云南、四川、
广东和广西等地。文献报道龙脷叶中主要含有单萜、
倍半萜、香豆素、黄酮苷等多种生物活性成分 [2]。 龙
脷叶常用于治疗上呼吸道炎症引起的咳嗽、咽痛、急
性支气管炎等症[3]。
龙脷叶是中国药典 2010 年版一部收载品种,正
文中暂无含量测定项, 目前关于龙脷叶的薄层色谱
鉴别[4]和挥发油的气-质联用分析 [5]已有报道,但还
暂无龙脷叶的抗氧化性研究, 为了龙脷叶的开发和
利用, 本试验采用清除 DPPH·和 Fe3+还原力的不同
体外抗氧化模型, 比较龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙
醇提取物的不同抗氧化活性。 评价龙脷叶这两种提
取物的抗氧化活性, 以期进一步优化龙脷叶的综合
利用价值, 为加快龙脷叶药品的临床应用和开发新
型功能食品提供依据。
龙脷叶提取物的抗氧化活性研究
陆秋娜 1a,李兆叠 1a,郑鸿娟 1a,黄春阳 1a,齐梁煜 1a,黄月维 1a,黄锁义 1b,2
(1.右江民族医学院,a.临床医学院;b.药学院,广西 百色 533000;
2.广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室,广西 百色 533000)
摘要:通过采用清除 DPPH·和 Fe3+还原力的不同体外抗氧化模型,根据试验结果评价龙脷叶乙酸乙酯提
取物和乙醇提取物的体外抗氧化活性。结果表明,龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对 DPPH·均具有
较强的清除作用,乙酸乙酯提取物的半数抑制浓度(IC50)为 1.387 mg/mL,乙醇提取物的 IC50为 0.349 mg/mL。
提取物均对 Fe3+有还原能力,且随着提取液浓度的提高而增强,呈剂量效应关系。
关键词:龙脷叶;提取物;抗氧化活性
中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2017)01-0089-02
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.022
Investigation of Antioxidant Activity of Sauropus spatulifolius Beille Extract
LU Qiu-na1a,LI Zhao-die1a,ZHENG Hong-juan1a,HUANG Chun-yang1a,
QI Liang-yu1a,HUANG Yue-wei1a,HUANG Suo-yi1b,2
(1a.College of Clinical Medicine;1b. College of Pharmacy,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,Guangxi, China;
2.Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin,Baise 533000,Guangxi, China)
Abstract:Aiming to investigate antioxidant activity of ethyl acetate extract and alcohol extract of Sauropus spatulifolius Beille,
clearing ability of the extracts on DPPH· and reduction of Fe3+ were measured to evaluate its antioxidant activity. The results
showed that,ethyl acetate extract and alcohol extract of S. spatulifolius Beille had strong scavenging effects on DPPH· free
radical,half inhibitory concentrations (IC50) of ethyl acetate extract was 1.387 g / L,while IC50 of alcohol extract was 0.349 g / L.
The two extracts all had the reduction ability on Fe3+,the effects increased with the increasing of extract concentration,which
showed corresponding does-response relationship.
Key words: Sauropus spatulifolius Beille; extract; antioxidant activity
湖 北 农 业 科 学 2017 年
1 材料与方法
1.1 原料与试剂
龙脷叶购自广西百色市, 经右江民族医学院民
族医学教研室覃道光副教授鉴定,粉碎后备用。
乙酸乙酯、无水乙醇、DPPH(美国 Signe 公司)、
盐酸、磷酸盐缓冲液、铁氰化钾、三氯乙酸(TCA)和
三氯化铁等试剂均为分析纯,试验用水为蒸馏水。
1.2 仪器
高速万能粉碎机(FW100)(天津泰斯特仪器有
限公司);电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备
有限公司);电热式恒温水浴锅 HHS-21-4(江苏金
坛宏凯仪器厂);SHZ-D(III)循环水式多用真空泵
(巩义市子华仪器有限公司 );FA1204B 电子天平
(上海天美天平仪器有限公司);752N 紫外可见分光
光度计(上海精科实业有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 龙脷叶提取物的制备 称取龙脷叶干燥粉末
50 g,分别加入 10 倍量蒸馏水或 75%的乙醇室温浸
泡 1 h,加热回流提取 2 h,抽滤取滤液,旋转蒸发除
去溶剂,烘干制成浸膏。 称定质量,分别用相应溶剂
稀释成不同浓度的龙脷叶乙酸乙酯提取液和乙醇提
取液。
1.3.2 清除 DPPH自由基能力测定[6] 取 5支 10 mL
具塞比色管, 各加入新配制的 6×10-4 mol / L DPPH
溶液 0.5 mL, 分别加入不同质量浓度的样品溶液
1.0 mL,混匀后用无水乙醇定容至 10 mL,室温下暗
光反应 30 min,以无水乙醇调零,在 517 nm 处测定
其吸光度(A),平行 3次。 按下式计算清除率。
清除率=[(A1-A2) /A1]×100%, 式中,A1为空白
吸光度(t=0);A2为反应 30 min后吸光度。
1.3.3 还原 Fe3+的能力测定[7] 在 10 mL具塞比色管
中依次加入浓度为 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg / mL 的样
品液 2.5 mL,0.2 mol / L 磷酸盐缓冲液(pH 6.6)和
1%铁氰化钾各 2.5 mL, 混匀后置于 50 ℃水浴中反
应 20 min,加入 10%三氯乙酸溶液 2.5 mL,混匀,如
溶液浑浊则离心(3 000 r / min 离心 10 min),取上清
液 2.5 mL, 加蒸馏水 2.5 mL 和 0.1%三氯化铁溶液
2.5 mL,混匀,静置 10 min,以相应试剂为参比,于
700 nm处测定吸光度(n=3)。
2 结果与分析
2.1 清除 DPPH自由基能力
以自由基清除率为 50%时样品的浓度(IC50)来
衡量样品对自由基的清除能力。 IC50越小,表明样品
清除自由基的能力越强。 结果见表 1和图 1,结果表
明龙脷叶提取物对 DPPH自由基具有一定的清除能
力,且乙醇提取物的清除率优于乙酸乙酯提取物。
2.2 还原 Fe3+的能力测定结果
结果见图 2, 得龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇
提取物清除羟基自由基的回归方程分别为 y=
0.269x+0.058 1(R2=0.991 7),y=0.457 x+0.040 3(R2=
0.988 2),提示龙脷叶不同提取液对还原 Fe3+均具有
较强的能力, 且乙醇提取物还原能力优于乙酸乙酯
提取物。
3 小结
通过对清除 DPPH 自由基作用和还原 Fe3+能力
的考察, 证实龙脷叶提取物是一种有效的自由基清
除剂, 在消除自由基过程中使溶液中自由基数目减
少, 龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均具有较
强的抗氧化活性, 且在相对低浓度下乙醇提取物的
抗氧化作用总体比乙酸乙酯提取物强。 在正常情况
下,细胞内自由基的产生与清除处于动态平衡状态,
随着年龄的增长,这种平衡逐渐遭到破坏,结果自由
表 1 龙脷叶提取液清除 DPPH 自由基能力
样品
乙酸乙酯提取物
乙醇提取物
回归方程
y=21.965 x+19.541
y=143.21 x+0.035 0
R2
0.971 6
0.991 0
IC50/ mg/mL
1.387
0.349
清除 DPPH 自由基
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
样品液浓度//mg/mL
80
60
40
20
0



//%
图 1 龙脷叶提取液对 DPPH 自由基的清除率
乙醇提取液
乙酸乙酯提取液
图 2 龙脷叶提取液还原 Fe3+的能力
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
样品液浓度//mg/mL
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00



乙醇提取液
乙酸乙酯提取液
(下转第 94页)
90
湖 北 农 业 科 学 2017 年
基的浓度超过了阈值 , 链式的自由基反应使得
DNA、 蛋白质尤其是多不饱和脂肪酸等大分子物质
发生变性和交联,损伤细胞器、细胞膜等结构,导致
生物体的氧化应激伤害,最终出现衰老与死亡[8]。 由
此,清除体内自由基、抗氧化是预防机体衰老及多种
疾病的重要措施。
参考文献:
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(上接第 90页)
表 4 不同品种(系)的主成分分值
烤烟品种
金 80439
金 80418
金 80430
金 80530
CF223
CF224
CF26HD
CF8704
CF8701
CF2687
CF9787
CF8799
贵烟 2 号
2010A4
云烟 110
云烟 116
云烟 97
PRINl
1.25
0.72
-0.09
1.06
1.19
1.49
-1.43
-1.27
-0.73
-0.98
-0.83
-0.83
0.38
0.50
0.44
0.47
-1.35
PRlN2
-0.84
-0.67
0.74
1.02
-0.75
-0.93
-0.10
0.65
0.27
0.30
-0.09
-0.28
1.27
-0.34
2.29
-0.58
-1.96
PRlN3
0.37
0.80
0.24
1.37
1.08
-0.23
0.17
0.96
0.27
-0.39
-0.21
0.43
0.54
-1.01
-1.56
-2.62
-0.21
PRlN4
-1.64
-1.37
-0.08
0.96
1.91
-0.19
0.02
0.41
-1.44
-0.56
-0.54
0.48
0.60
-0.90
0.05
1.21
1.06
综合 PRIN
0.17
0.15
0.11
1.02
0.54
0.10
-0.50
0.01
-0.25
-0.47
-0.46
-0.21
0.68
-0.35
0.60
-0.21
-0.94
PRlN5
1.20
1.38
-1.30
0.20
-0.78
-1.08
-0.05
0.71
0.46
-1.04
-0.68
0.47
0.30
-2.02
0.50
1.47
0.24
综合排名
5
6
7
1
4
8
16
9
12
15
14
10
2
13
3
11
17
化为少数几个综合指标的多元统计分析方法。 在多
指标的研究中,由于相关的指标个数太多,各个指标
之间很可能存在一定的相关性。 主成分分析就是通
过线性变换, 将各指标间相互重叠的信息通过少数
几个综合的指标反映出来, 使这些综合的因子之间
尽量相互独立, 而且能够最真实地反映原指标的信
息,从而达到简化的目的。主成分分析目前已越来越
多地应用于农作物产量相关性状的分析中。
本研究以 17个烤烟品种(系)为研究对象,在量
化它们的农艺性状、化学成分、经济性状的基础上,
通过主成分分析得到它们的 5个主成分。 这 5个主
成分代表了烤烟 18 个性状 86.236%的信息,是综合
的相互独立的指标,且具有科学性和准确性。 根据
烤烟品种的 18 个性状主成分分析的 5 个主成分分
值由高到低进行综合排序,结果为金 80530、贵烟 2
号、云烟 110、CF223、金 80439、金 80418、金 80430、
CF224、CF8704、CF8799、云烟 116、CF8701、2010A4、
CF9787、CF2687、CF26HD、云烟 97。 区域试验和生
产试验也表明, 金 80530、 贵烟 2 号、 云烟 110、
CF223、 金 80439 等品系在重庆山地条件下表现较
优,有一定的应用价值。
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