全 文 ：JTCVM
年第 1 期2012
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Effect of bean pulp fermented with Aspergillus usami on the phosphorusmetabolism
in growing-finishing pigs
LIU Jin-min
（Food Bureau of Gansu Province，Lanzhou Gansu 730000，China）
Abstract: 15 8-week-old growing-finishing pigs （average body weight of 23.6 kg） with duality
cross were randomly divided into 3 groups with 5 in each. Normal bean pulp and fermented with
Aspergillus usami ones were given to the pigs，then all feces were collected to study the effect of
fermented bean pulp on the phosphorusmetabolism in growing-finishing pigs. The results showed that
the pigs fed with fermented bean pulp were significantly improved on the digestibility of phosphorus
and crude protein. It was concluded that bean pulp fermented with Aspergillus usami could not only
improve the digestibility of phosphorus and protein，but also decrease the emission of P and N.
Key words: fermented bean pulp；growing-finishing pig；phosphorus；digestibility
收稿日期：2011-09-01
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目“中兽药现代化技
术研究与开发”（项目编号：2008BADB4B00）
作者简介：高迎春（1957-），男，研究员，主要从事兽药和畜禽
产品质量监督检验及科研，电话：0531-87198026，
E-mail：Gaoyingchun@ivdc . gov . cn
地锦草颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病临床疗效试验
高迎春 1，张传津 1，都业良 2
（1.山东省兽药质量检验所，山东济南 250022；2.青岛农业大学）
摘 要：为考察地锦草颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果，将 SPF 鸡 210 只随
机分成 7 组，对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果显示，按每升饮用水加本品 2 g，连续用
药 5 d，有效率、治愈率分别为 76.9%、69.2%，与四黄止痢颗粒药物对照组比较，差异显著
（P＜0.05）。
关键词：地锦草颗粒；禽大肠杆菌病；治疗试验
中图分类号：S853.74文献标识码：A 文章编号：1000-6354（2012）061-0052-04
鸡大肠杆菌病（Chicken colibacillosis）是由致
病性大肠埃希氏菌（Escherichia coli，简称大肠杆
菌 E．coli）某些血清型所引起的传染病。临床表现
为多种症型，较常见的有大肠杆菌性败血症、肉芽
肿、心包炎、肝周炎、气囊炎、肠炎、脐炎、全眼球
炎、卵黄性腹膜炎等，近年还报道有肿头综合征
等。自 1894 年由 Lignieres 首次报道以来，鸡大肠
肝菌病很快遍及世界各地，各日龄鸡均可发病，以
雏鸡和中鸡居多，发病率为 11%～69%，致死率为
40.2%～90.3%，与其它病原混合感染时，死亡率更
高，其危害居细菌性疾病之首，常给养鸡业带来巨
大经济损失。
由于抗生素和化学抗菌药物的大量使用，大
肠杆菌产生了广泛的耐药性，使治疗效果不断下
降，临床又不得不加大剂量并延长给药时间，大幅
度提高了治疗难度与成本；同时抗生素和化学药
物在鸡肉、内脏和鸡蛋等产品中形成有害残留，危
害食品安全。因此，研究与开发更加安全、有效的
中药制剂用于鸡大肠杆菌病的防治具有重要的经
济和社会效益。
地锦草颗粒是采用现代化中药提取工艺精制
而成纯中药新制剂，本试验旨在验证该药对鸡人
实
验
技
术
实
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技
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DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2012.01.015
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工感染大肠杆菌病的治疗效果，确定临床使用剂
量和疗程。
1 材料与方法
1.1 试验药物
地锦草颗粒，批号：20091001，山东省兽药质
量检验所提供。对照药物：（1）四黄止痢颗粒，批
号：20091001，山东省兽药质量检验所提供；（2）三
黄汤提取物（黄连 100 g，大黄 100 g，黄芩 100 g），
每 1 mL 含生药 1 g，批号：20091101，山东华尔康
兽药有限公司提供。
1.2 试验动物
22 日龄 SPF 鸡，购自济南斯帕法斯家禽有限
公司，许可证号 SCXK（鲁）20090002。
1.3 菌（毒）种
鸡大肠杆菌 O2标准菌株，购自中国兽医药品
监察所。
1.4 培养基
营养琼脂平板、营养肉汤培养基，按常规方法
制备，4 ℃冰箱保存备用。
1.5 菌种复壮和活菌计数
将冻干保存的鸡大肠杆菌接种于普通营养
肉汤培养基中，按常规方法培养、平皿计数，大
肠杆菌为 9×108 cfu/mL。使用前，将保存菌种先
接种普通平板，于 37 ℃培养 24 h 后，挑选典型
菌落接种于肉汤中，再经 37 ℃培养 18 h 取出，
将此肉汤培养物 1 mL/只颈部皮下注射健康鸡
复壮。从病死鸡肝脏无菌分离大肠杆菌并接种
平板培养，最后挑选典型菌落，用普通肉汤培
养，制备攻毒菌液，然后进行 10 倍递增稀释，用
营养琼脂平板进行活菌计数，计数结果大肠杆
菌为 5×108 cfu/mL。
1.6 试验饲料
无药配合饲料，每天给料 3次，自由饮水。
1.7 试验场地
室温 20-24 ℃，相对湿度 60%～70%。
1.8 临床治疗试验
1.8.1 攻毒剂量测定 攻菌量以近半数致死量
为宜。取试验鸡 30只，随机分为 3组，分别经颈部
皮下注射已计数的大肠杆菌培养液，观察 7 d。第
1 组为 0.2 mL/只（含大肠杆菌约 1 亿），第 2 组为
0.3 mL/只（含大肠杆菌约 1.5 亿），第 3 组为 0.5
mL/只（含大肠杆菌约 2.5亿）。攻毒 6 h后，1组 4
只出现发病症状，2 只死亡（发病率 40%，死亡率
为 20%）；2 组 9 只出现发病，死亡 4 只（发病率
90%，死亡率为 40%）；3 组全部发病，死亡 6 只
（发病率 100%，死亡率为 60%）。对死亡鸡进行剖
检，肝脏、心包膜等行细菌分离培养鉴定，据此将
攻毒剂量定为 2.5亿/只。
1.8.2 试验动物及其处理 取 22日龄 SPF鸡 210
只，随机分成 7个组，各组称体重。具体处理见表 1。
表 1 试验鸡给药途径及分组情况
Tab.1 Grouping and treatment for the chickens
in all groups
1.8.3 人工感染及用药方法 Ⅰ－Ⅵ组颈部皮下
注射大肠杆菌培养液 2.5 亿/只。Ⅰ－Ⅴ组于攻毒
后出现症状时投服试验药物，用药前禁水 2 h，颗
粒剂先用适量开水溶解后备用，三黄汤混饮。将试
验药混入少量饮水中，将每天剂量均分，早晚各投
药一次，供试验鸡自由饮水，连续用药 5 d。Ⅵ-Ⅶ
组不用药。
1.8.4 临床观察及观察指标 攻毒后每天注意观
察各组临床症状，主要包括精神状态、食欲、粪便
等，分别记录各组发病时间、发病及死亡情况。剖
检病死鸡，观察病变程度作细菌分离培养，确定死
因，停药后继续观察 14 d。
重度病变：败血症或心、肝脏、肠管等有一个
器官以上（含 1 个器官）发现严重病变，或病变虽
不严重但有多个（3个或 3个以上）器官有病变。
轻度病变：有 1 个或 2 个器官呈现轻度病理
变化。
无病变：各脏器无任何病理变化。
1.8.5 疗效评价指标 治愈：在试验期间，鸡经
组别 数量/只 初体重/g 处理
30
30
30
30
30
30
30
182.7 ±33.1
194.0 ±28.4
182.7 ±32.9
179.3±32.9
163.3 ±32.9
184.7 ±32.9
183.0 ±25.9
Ⅰ高剂量组
Ⅱ中剂量组
Ⅲ低剂量组
Ⅳ对照药物⑴组
Ⅴ对照药物⑵组
Ⅵ阳性对照组
Ⅶ空白对照组
感染 混饮 4 g/ L
感染 混饮 2 g/ L
感染 混饮 1 g/L
感染 混饮 1 g/L
感染 混饮 1 g / L
感染 不给药
不感染 不给药，隔离饲养
实
验
技
术
实
验
技
术
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混饮给药后，大肠杆菌病症状消失，其精神状态、
食欲、呼吸等恢复正常者均属治愈。治愈率=症状
消失鸡数/发病鸡数。有效：在试验期间，鸡经混饮
给药后，腹泻等症状减轻，精神状态、食欲、呼吸等
逐步恢复正常者均属有效。有效率=症状好转鸡
数/发病鸡数。死亡：在试验期间出现大肠杆菌病
症状并死亡，剖检有典型的病变特征，病料能分离
出大肠杆菌，判定为感染该菌而死亡。死亡率=死
亡鸡数/试验鸡数。增重：根据试验开始及试验结
束时每只鸡的体重，计算每只鸡的增重量，据此计
算每组试验鸡的平均增重和标准偏差。相对增重
率按各用药治疗组与健康对照组的增重之比计
算，其中健康对照组鸡增重率设为 100%。
1.8.6 结果统计 统计各组发病率、死亡率、有
效率、治愈率，各组间进行 χ2 检验，对试验组与
攻毒对照组作 χ2检验。
χ
2
＝ （ad-bc）
2
n
（a+b）（c+d）（a+c）（b+d）
a：试验组存活数；b：阳性对照组存活数；c：试
验组死亡数；d：阳性对照组死亡数；n 为两组动物
总数。
2 结果与分析
2.1 临床治疗结果
空白对照组鸡在试验期间精神良好、饮食
欲正常，无呼吸道、肠道症状，试验结束时剖检
无病变。
阳性对照组鸡在攻毒 6 h 后，开始表现怕
冷、扎堆、精神不振、采食减少或不食、腹泻、排
黄绿色或白色粪便等症状，发病率达 90%，攻毒
后 12 h陆续出现急性死亡鸡只，24 h内共有 10只
死亡，死亡鸡仰脖。剖检：发现轻度病变，注射部
位黄色渗出物，点状出血；心包炎、肝周炎不明
显；最主要病理变化是盲肠、十二指肠出血等典
型的大肠杆菌病病变。48－72 h 内有 4 只死亡，
72－150 h 内死亡 2 只，其余发病鸡逐渐转为慢
性大肠杆菌病，排白绿色稀粪，增重缓慢，试验
结束时有 4 只已无明显临床症状，基本自愈。后
期死亡鸡剖检发现重度病变，死亡鸡心包炎、肝
周炎明显；尿酸盐沉积，肾肿大；十二指肠出血；
气囊混浊。取肝脏病料在伊红－美蓝鉴别培养基
上划线培养，菌落紫黑色，并带有金属光泽。病理
变化和病原学检查证实病鸡系大肠杆菌感染引
起的死亡。
治疗组攻毒后均出现程度不同的发病症状：
精神沉郁、怕冷挤堆、闭目似睡、食欲减退、排稀
粪等。用药 24 h 后可见精神明显好转，采食量稍
有增加，各试验组临床症状有不同程度改善。地
锦草高剂量组攻毒后 18 h 死亡 2 只，72 h 后死
亡 1 只，96-150 h 后鸡群逐步恢复正常，试验结
束时 2 只仍有轻度临床症状，其余 20 只发病鸡
已基本痊愈，无明显临床症状；地锦草中剂量组
攻毒后 18 h 死亡 3 只，72 h 后死亡 1 只，试验结
束时 18 只发病鸡已基本痊愈，2 只仍有腹泻症
状。地锦草低剂量组攻毒后 12 h 有 6 只死亡，
48 h 后死亡 3 只，72 h 后死亡 1 只。试验结束时
有 12 只无明显临床症状，3 只精神、采食量等明
显好转，症状得到改善，其余 2 只发病鸡症状仍
明显。四黄止痢颗粒组攻毒后 12 h 有 6 只死亡，
48-72 h 内有 3 只死亡，至试验结束时有 12 只
基本痊愈，5 只临床症状有所改善；三黄汤组攻
毒后 18 h 有 3 只死亡，72 h 后又死亡 1 只，经用
药治疗，至试验结束时有 16 只基本痊愈，4 只临
床症状有所改善。临床观察证实，地锦草颗粒
高、中剂量组治疗大肠杆菌感染效果明显。试验
结果见表 2。
表 2 地锦草颗粒治疗大肠杆菌病临床试验结果
Tab.2 Curative effect of Humifuse Euphorbia
granula on Avian Colibalillosis
以死亡只数、存活只数对试验组和阳性对照
组进行 χ2 检验，结果表明，地锦草颗粒中剂量组
与阳性对照组之间差异极显著；高剂量组、对照药
物⑵组与阳性对照组之间差异显著；四黄颗粒组、
30
30
30
30
30
30
30
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
分组
实验
数/只
发病
数/只
死亡
数/只
有效
数/只
治愈
数/只
发病
率/%
死亡
率/%
有效
率/%
治愈
率/%
27
26
27
28
26
27
0
3
4
10
9
4
16
/
22
20
15
17
20
/
/
20
18
12
12
16
4*
/
90．0
86．7
90．0
93．3
86.7
90．0
/
10.0
15.3
33.3
30.0
13.3
59.3
/
81.5
76.9
55.5
60.7
76.9
/
/
74.1
69.2
44.4
42.8
61.5
/
/
实
验
技
术
实
验
技
术
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地锦草颗粒低剂量组与阳性对照组之间差异不显
著；地锦草颗粒高、中剂量组间差异不显著，地锦
草颗粒中、低剂量组间差异极显著；地锦草颗粒中
剂量组与四黄止痢颗粒组差异极显著。
2.2 地锦草颗粒对人工感染大肠杆菌鸡体重的影响
试验期间体重变化如表 3 所示，以健康对照
组为 100％（相对增重率）来计算，地锦草颗粒高、
中剂量组相对增重率明显高于感染对照组。
表 3地锦草颗粒对人工感染大肠杆菌病鸡体重影响
Tab.3 Effect of Humifuse Euphorbia granula on
the body weight of chicks
3 讨论
3.1 地锦草为大戟科植物地锦草 Euphorbia hum－
ifusa Willd.的干燥全草。地锦草抗菌、止血有效成分
主要是槲皮素、山素苷、地锦草素等黄酮及其苷类
化合物，根据黄酮及其苷类化合物的性质选择以
乙醇为提取溶剂经科学工艺制成地锦草颗粒。
3.2 高迎春等应用 1/2 MIC 中药提取物对大肠
杆菌耐药菌株进行了耐药性消除的初步研究，结
果表明临床多重耐药大肠杆菌用中药提取物作用
24 代以后，地锦草提取物耐药消除作用最强，对
某些氨基糖苷类药物的 MIC 明显下降。另外，对
消除前后的细菌提取质粒，扩增氨基糖苷类的耐
药基因，发现随着 MIC 的降低，耐药基因的数量
也不同程度的减少和消失。由此可见地锦草等中
药提取物对可移动的耐药基因元件有一定的消除
作用，对耐药基因的扩散有抑制作用。
3.3 临床试验结果表明，地锦草颗粒对鸡大肠杆
菌病的临床疗效确实可靠。临床推荐应用剂量为：
每升饮用水加本品 2 g，混饮 5 d为一个疗程。
高剂量
中剂量
低剂量
对照药物⑴组
对照药物⑵组
阳性对照
健康对照
组别 试验鸡数
给药前平均
体重/g
给药后平均
体重/g
相对增重
率/%
30
30
30
30
30
30
30
182.7 ±33.1
163.3±32.9
182.7 ±32.9
179.3±32.9
194.0 ±28.4
184.7±32.9
183.0±25.9
347.28±2.43
328.84±3.97
335.48±3.52
304.44±3.97
339.25±4.02
275.37±4.85
356.78±2.69
94.71
95.23
87.90
72.10
89.34
52.18
100
Treatment for chick artificially infected with Avian Colibacillosis by
Humifuse Euphorbia granula
GAO Ying-chun，ZHANG Chuan-jin
（Institute of Veterinary Drug Control of Shandong Province，Jinan Shandong 250022，China）
Abstract：The curative effect of Humifuse Euphorbia granula on chick experimentally infected with
Avian Colibalillosis was studied. The results showed that the cure rate and effective rate was 69.2% and
76.9% at a dosage of 2 g/L twice daily for 5 successive days，which was significant different from that of
the control group（P＜0.05）.
Key words: Humifuse Euphorbia granula；Avian Colibacillosis；curative effect
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