全 文 ：山 东 农 业 科 学 2014，46(6):128 ～ 130 Shandong Agricultural Sciences
收稿日期:2014 －02 －20
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目“中兽药现代化技术研究与开发、“中兽药现代化技术研究与开发”(2008BADB4B00)
作者简介:张传津(1967 －)，男，研究员，主要从事兽药质量检验、兽医药理毒理的研究工作。E － mail:sdvmslu@ 163． com
地锦草颗粒的急性亚急性毒性试验
张传津，杨修镇，高迎春
(山东省兽药质量检验所，山东 济南 250022)
摘 要:为了评价地锦草颗粒的安全性，分别选取昆明种小白鼠、Wistar 大鼠进行了急性、亚急性毒性试
验。急性毒性试验结果，地锦草颗粒对小鼠经口服给药 LD50 ＞ 5 000 mg /kg b． w．，其毒副作用很小或无毒副
作用。亚急性试验结果，连续给药 4 周，停药后继续观察 2 周，试验组大鼠生理、生化及病理等各项指标均在
正常范围内，与对照组无显著差异(P ＞ 0． 05)，停药后各组也未见药物延迟性毒性反应，表明地锦草颗粒长
期用药对大鼠无明显毒性，是比较安全的制剂。
关键词:地锦草颗粒;急性毒性试验;亚急性毒性试验
中图分类号:S567． 21 + 9 文献标识号:A 文章编号:1001 －4942(2014)06 －0128 －03
Acute and Subacute Toxicity Tests of EUPHOＲBIA HUMIFUSA Granule
Zhang Chuanjin，Yang Xiuzhen，Gao Yingchun
(Institute of Veterinary Drug Control of Shandong Province，Jinan 250022，China)
Abstract In order to evaluate the security of EUPHOＲBIA HUMIFUSA granule，the acute and subacute
toxicity tests were conducted with Kunming mice and Wistar rats． The acute toxicity test showed that the LD50
for mice by oral medication was more than 5 000 mg /kg b． w．，which indicated that the preparation had little
toxicity． The subacute toxicity test showed that the physiological，biochemical and pathological indexes of rats
were all in the normal range after successive medication for 4 weeks and drug withdrawal for 2 weeks，which
had no significant differences with those of control (P﹥ 0． 05)． And there was no delayed toxicity reaction
after drug withdrawal． It indicated that long － time medication of EUPHOＲBIA HUMIFUSA granule had no
significant toxicity to rats，and it was a safer preparation．
Key words EUPHOＲBIA HUMIFUSA granule;Acute toxicity test;Subacute toxicity test
地锦草为大戟科植物地锦草(Euphorbia hu-
mifusa Willd．)的干燥全草。地锦草颗粒是由地
锦草采用现代化中药提取工艺精制而成的纯中药
新制剂，具有清热解毒、凉血止血功效。地锦草颗
粒主要成分为槲皮素、山素苷、地锦草素等黄酮及
其苷类化合物，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜
绿假单胞菌等均有明显的抑制作用［1］。对畜禽
大肠杆菌等细菌病感染有很好的疗效，并能有效
消除大肠杆菌的耐药质粒，减少耐药菌株的产
生［2］。为了对地锦草颗粒实施安全性评价，本研
究按照农业部新兽药一般毒性试验技术要求［3］，
进行了急性毒性试验和亚急性毒性试验，为临床
用药提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试验药品及器材 地锦草颗粒，批号:
20091001，山东省兽药质量检验所提供。灌胃器、
1 mL注射器、天平(1 mg)、量杯、烧杯等。
1． 1． 2 试验动物及饲养 昆明种小白鼠 80 只，
SPF级，体重 18 ～22 g，雌雄各半，购自山东大学实验
动物中心。Wistar 大鼠 80 只，体重 150 ～170 g，SPF
级，雌雄各半，合格证号:SCXK(鲁 2009 －0001)。
动物饲养于 IVC 鼠笼，温度:20 ～ 25℃，湿
DOI:10.14083/j.issn.1001-4942.2014.06.042
度:35% ～60%。给药前后，实验鼠雌雄分笼，用
标准鼠粮(由济南康大饲料有限公司提供，饲料
合格证号为:0000323)，自由饮水。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 急性毒性试验 ①给药方案:用生理盐
水将地锦草颗粒溶解(0． 2 g /mL)，采用灌胃给药
法。给药前禁食 8 ～ 12 h，但不限制饮水。
预试验:取 10 只健康昆明种小白鼠，雌雄各
半，随机分为 2 组，每组 5 只。一日多次给药，每
3 h给药 1 次，单次灌胃剂量为 0． 4 mL /只。按上
述给药方法，第一组给药剂量为 5 g /kg b． w．，第
二组给药剂量为 10 g /kg b． w．，观察中毒表现和
死亡情况，观察时间为 7 天。
正式试验:取 70 只健康小鼠，雌雄各半，随机
分 7 组，每组 10 只。前 6 组为受试药物组，各组
投药剂量为 1． 0、1． 3、2． 0、3． 0、4． 5、6． 7 g /kg，第 7
组用等量生理盐水同时灌胃为空白对照组。各受
试组一次灌胃剂量为 0． 2 ～ 0． 4 mL /只，可多次给
药，每次间隔 3 h，观察小鼠的健康状况、中毒表现
和死亡情况。观察期为 7 天。
② 评价指标:运动及反应，包括不正常叫声、
烦躁不安、易怒、嗜睡、昏迷、肌肉抽搐、僵硬等;有
无眼睑下垂、流泪、眼球突出、震颤、结膜混浊，有
无分泌物，瞳孔有否缩小或放大、流泪;呼吸状态、
鼻有无分泌物、心率快慢等;消化系统流涎、呕吐、
腹胀、腹泻，大便性状和色泽;泌尿生殖系统会阴
部有无肮脏、阴茎脱垂，阴户、乳腺有无肿胀;皮肤
和毛发颜色及完整性，皮肤有无充血、苍白、皮疹
及松散;其他如精神状态、食欲等。
1． 2． 2 亚急性毒性试验 ①给药方案:将Wistar
大鼠随机分成 4 组，每组 20 只，雌雄各半，Ⅰ、Ⅱ、
Ⅲ组为试验药物低、中、高剂量组，分别以 3、5、7
g /kg的剂量连续灌胃给药 4 周，每日 1 次，并按
体重变化调整给药量，停药后继续观察 2 周。Ⅳ
组为不用药对照组。雌雄分笼，每笼 10 只，各组
均自由采食饮水。给药前禁食 6 ～ 8 h，用温开水
将药品溶解，以 10 mL /kg b． w．一次灌胃给药。
②评价指标:一般健康状况观察:整个试验期
间，仔细观察大鼠的行为、饮水、采食等方面有无
异常变化，记录死亡情况，并与对照组相比较。
计算增重和饲料利用率:以组为单位每周称
量大鼠体重和采食量，4 周后计算各组动物平均
增重，称取每周所消耗的饲料，计算每周各组动物
的饲料利用率(每消耗 100 g 饲料所增长的体重
克数)。
脏器系数:动物处死后，取心、肝、脾、肺、肾，
观察并称重，计算脏器系数(脏器重与体重的比
值)。
血液学指标:于末次给药后 24 h每组各取 10
只大鼠(雌雄各半)，断颈处死后，进行血清生化
指标测定:谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶
(GOT)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、肌酐
(Cr)、血糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB);
血液生理指标测定:红细胞(ＲBC)、白细胞
(WBC)、血红蛋白(Hb)。
病理组织学检查:将大鼠的肝、肾、脾等脏器
固定于 10%甲醛液中，一定时间后水洗、石蜡包
埋、切片、HE染色，进行病理组织学检查。
1． 3 数据处理
数据以 x ± SD 表示，用 SPSS 应用软件进行
组间数据的显著性检验。采用 t检验比较试验组
与对照组间增重、饲料利用率、血液生理指标和血
清生化指标等各项指标的差异显著性。
2 结果与分析
2． 1 急性毒性试验
2． 1． 1 预试验 受试组小鼠刚灌胃后活动有所
减少，呼吸稍加快，2 h 后恢复正常，其它状态无
异常。此后，未观察到小鼠出现任何中毒症状，全
部小鼠精神，行为、运动等各方面正常，采食量和
饮水量没有异常变化，在观察期内没有死亡，未能
测出 LD50值。观察期结束后，小鼠脱颈椎处死，
解剖观察未见内脏器官有异常变化。
2． 1． 2 正式试验 受试组小鼠给药后的 2 h 内，
小鼠自由活动行为有所减少，2 h 后恢复正常，与
对照组小鼠的变化一致。未见小鼠口、鼻、眼有异
常分泌物，5 h 后粪便略显湿润，呈棕黄色，18 h
后恢复正常。给药后 1 周内，均未见小鼠毛色及
行为活动异常，也没有小鼠死亡。观察期结束后，
小鼠脱颈椎处死，解剖观察未见内脏器官有异常
变化。
2． 2 亚急性毒性试验
2． 2． 1 地锦草颗料对大鼠一般状况的影响 试
验期间，各组试验动物均没有出现任何异常现象，
精神、行为、饮食、粪便正常，没有出现病理状态，
921第 6 期 张传津，等:地锦草颗粒的急性亚急性毒性试验
无大鼠死亡。
2． 2． 2 地锦草颗料对大鼠体重的影响 试验期
间，每周对各组大鼠逐只称量体重 1 次，结果见表
1、表 2。可以看出，地锦草颗料对试验各组的大
鼠体重变化均无明显影响。雌鼠的增重及饲料利
用率较雄鼠低，可能为性别差异所造成。
2． 2． 3 血液生理指标及血清生化指标 连续给
药 4 周后，对各组大鼠血液生理指标和血清生化
表 1 地锦草颗粒对雄性大鼠体重的影响(g，x ± SD)
组别 给药前 第 1周 第 2周 第 3周 第 4周 第 6周 耗料 饲料利
用率(%)
高剂量组 161． 6 ± 4． 7 196． 5 ± 4． 8 218． 9 ± 6． 8 247． 5 ± 7． 8 269． 3 ± 6． 8 301． 2 ± 8． 5 5103 2． 61
中剂量组 159． 8 ± 5． 7 191． 4 ± 6． 8 217． 5 ± 5． 3 238． 6 ± 5． 1 269． 4 ± 6． 2 293． 4 ± 9． 1 5014 2． 59
低剂量组 156． 5 ± 5． 3 222． 7 ± 5． 8 271． 1 ± 6． 7 320． 3 ± 4． 9 366． 4 ± 6． 7 286． 2 ± 8． 7 4608 2． 78
对照组 162． 4 ± 6． 8 205． 8 ± 3． 7 222． 8 ± 7． 5 256． 8 ± 6． 5 275． 2 ± 8． 3 303． 0 ± 9． 7 4723 2． 88
注:表中同列数据经 t 检验差异不显著，P ＞ 0． 05，从而未进
行标注，下同。
指标测定结果分别见表 3、表 4。统计学分析显
示，地锦草颗料各剂量组的血液和血清生化参数
与对照组相比差异不显著(P ＞ 0． 05)。
表 2 地锦草颗粒对雌性大鼠体重的影响(g，x ± SD)
组别 给药前 第 1周 第 2周 第 3周 第 4周 第 6周 耗料 饲料利
用率(%)
高剂量组 157． 1 ± 8． 9 178． 1 ± 7． 7 189． 6 ± 7． 6 205． 7 ± 7． 9 223． 6 ± 6． 8 232． 4 ± 8． 6 4807 1． 56
中剂量组 159． 2 ± 4． 7 179． 3 ± 6． 8 195． 7 ± 6． 8 207． 6 ± 6． 8 216． 8 ± 6． 2 230． 2 ± 7． 1 4382 1． 62
低剂量组 155． 3 ± 5． 3 180． 6 ± 5． 9 187． 5 ± 6． 7 208． 5 ± 6． 0 218． 6 ± 6． 3 227． 0 ± 6． 9 4864 1． 48
对照组 160． 6 ± 3． 4 181． 7 ± 9． 5 178． 7 ± 5． 0 203． 1 ± 4． 5 220． 6 ± 7． 8 231． 0 ± 7． 3 4493 1． 58
表 3 地锦草颗粒给药 4 周
各组大鼠血液生理指标的变化(x ± SD)
组 别 WBC(× 109 /L) ＲBC(× 1012 /L) Hb(g /L)
高剂量组 7． 50 ± 1． 20 6． 89 ± 0． 85 135． 00 ± 3． 00
中剂量组 7． 90 ± 0． 90 7． 80 ± 1． 34 133． 00 ± 5． 00
低剂量组 8． 20 ± 0． 70 6． 73 ± 1． 53 139． 00 ± 3． 00
对照组 8． 00 ± 1． 20 7． 06 ± 0． 87 140． 00 ± 1． 00
表 4 地锦草颗粒给药 4 周对大鼠血清生化指标的影响(x ± SD)
组别 GPT(U /L) GOT(U /L) BUN(mmol /L) Cr(μmol /L) GLU(mmol /L) TC(mmol /L) TP(g /L) ALB(g /L)
高剂量组 50． 32 ± 3． 51 175． 40 ± 32． 11 6． 89 ± 0． 65 29． 67 ± 2． 59 5． 30 ± 0． 56 1． 53 ± 0． 26 65． 37 ± 2． 04 28． 78 ± 0． 31
中剂量组 50． 45 ± 4． 16 238． 83 ± 66． 49 6． 67 ± 0． 53 30． 54 ± 2． 35 5． 14 ± 0． 28 1． 56 ± 0． 30 61． 25 ± 2． 56 28． 32 ± 0． 23
低剂量组 47． 12 ± 4． 30 215． 00 ± 50． 43 6． 72 ± 0． 37 29． 28 ± 4． 61 5． 12 ± 0． 56 1． 60 ± 0． 21 60． 24 ± 2． 40 28． 14 ± 0． 36
对照组 57． 04 ± 5． 06 199． 60 ± 20． 15 6． 73 ± 0． 36 30． 02 ± 2． 58 5． 20 ± 0． 26 1． 79 ± 0． 26 63． 17 ± 3． 21 29． 22 ± 0． 89
2． 2． 4 脏器系数 连续服用地锦草颗粒 4 周后，
脏器系数指标测定结果见表 5。统计学分析显
示，地锦草颗料各剂量组脏器系数与对照组相比
差异不显著(P ＞ 0． 05)。
表 5 地锦草颗粒给药 4 周
对大鼠脏器系数的影响(x ± SD)
组别 心 肝 脾 肺 肾
高剂量组 0． 32 ± 0． 01 3． 28 ± 0． 25 0． 22 ± 0． 05 0． 49 ± 0． 11 0． 66 ± 0． 05
中剂量组 0． 32 ± 0． 02 3． 45 ± 0． 12 0． 22 ± 0． 04 0． 47 ± 0． 06 0． 65 ± 0． 08
低剂量组 0． 34 ± 0． 03 3． 30 ± 0． 31 0． 21 ± 0． 03 0． 44 ± 0． 05 0． 68 ± 0． 04
对照组 0． 31 ± 0． 04 3． 29 ± 0． 29 0． 22 ± 0． 05 0． 45 ± 0． 06 0． 69 ± 0． 07
2． 2． 5 病理学变化 试验结束各组大鼠处死后，
取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器进行观察，各剂量组
脏器的大小、色泽均无异常，也无肿胀、出血或坏死
等病变。计算脏器系数后，分别进行组织病理学切
片检查，结果均未发现异常显微病理学变化。
3 结论与讨论
3． 1 急性毒性试验结果表明，地锦草颗粒液按
10 g /kg b． w．给小鼠灌胃，不能引起小鼠死亡，未
能测出其 LD50。地锦草颗粒单次给药量 1． 0 ～
6． 7 g /kg，未出现明显的毒性反应，表明该制剂对
小鼠经口服给药 LD50 ＞ 5 000 mg /kg b． w．，其毒
副作用很小或无毒副作用。
3． 2 亚急性毒性试验结果表明，将地锦草颗料分
别以 3、5、7 g /kg b． w． 剂量给大鼠灌胃，每日 1
次，连用 4 周，各剂量组大鼠的增重、摄食、血常规
及血清生化值与对照组相比均未发生显著性变化
(P ＞ 0． 05)，剖检和组织学观察主要内脏器官的
形态、组织结构和脏器系数均未发现异常变化。
综上所述，地锦草颗粒安全范围大，具有较高
的临床用药安全性。
参 考 文 献:
［1］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海人民出版社，
1997．
［2］ 高迎春，魏秀丽，张传津，等．地锦草等中药提取物对大肠杆
菌耐药消除作用的初步研究［J］． 中国兽药杂志，2010，44
(11):12 － 16．
［3］ 中华人民共和国农业部． 新兽药一般毒性试验技术要求
［S］． 1991．
031 山 东 农 业 科 学 第 46 卷