全 文 ：［收稿日期］ 20130329(020)
［第一作者］ 谢明容，硕士，从事药物分析研究，Tel:020-
39352136，E-mail:tsemingyung@ 163. com
［通讯作者］ * 高晓霞，博士，副教授，硕士研究生导师，从事中
药制剂质量控制研究，Tel:020-39352136，E-mail:
gaoxxia91@ yahoo． com． cn
铁包金根、茎特征图谱的研究
谢明容1，周伟平1，徐煜纯1，董雷2，严寒静3，高晓霞1*
( 1. 广东药学院药科学院，广州 510006; 2. 北京汇诚瑞祥医药技术有限公司，北京 101111;
3. 广东药学院中药学院，广州 510006)
［摘要］ 目的:建立铁包金根、茎 HPLC特征图谱，为该药材质量评价研究提供参考。方法:采用 HPLC构建 24 批不同产
地不同种类铁包金根、茎的特征图谱，通过聚类分析和主成分分析对特征图谱进行化学模式识别。结果:以 11 个共有峰为特
征指纹信息构建 HPLC特征图谱，9 批细叶勾儿茶和多叶勾儿茶根为一类，12 个细叶勾儿茶和多叶勾儿茶的茎和 3 个多叶勾
儿茶的根聚为一类。结论:HPLC特征图谱的构建为铁包金根、茎的质量评价研究提供参考依据。
［关键词］ 铁包金根、茎;HPLC特征图谱;模式识别
［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)24-0160-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013240160
HPLC Characteristic Fingerprint for Ｒoots and
Stems of Berchem lineata
XIE Ming-rong1，ZHOU Wei-ping1，XU Yu-chun1，DONG Lei2，YAN Han-jing3，GAO Xiao-xia1*
(1. College of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China;
2. Beijing Novelpharm Consulting Co． Ltd．，Beijing 101111，China;
3. College of Traditional Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC characteristic fingerprints for the determination of the roots
and stems of Berchem lineata． Method:The characteristic fingerprints of 24 batches of roots and stems of B．
Lineata and B． floribunda，which were belong to different kinds and collected from different places，were
established by HPLC． A chemical pattern recognition method was constructed by using cluster analysis and
principal components analysis (PCA)method． Ｒesult:11 common peaks were found in the HPLC characteristic
fingerprints． 24 samples were divided into two branches． 9 batches of roots of B． Lineata and B． floribunda
clustered to a clade． 3 roots of B． floribunda，12 stems of B． Lineata and B． floribunda were first clustered
together as a sister clade to roots of B． Lineata and B． floribunda． Conclusion:The established method can be
used for quality control of the roots and stems of B． lineata．
［Key words］ roots and stems of Berchem lineata; HPLC characteristic fingerprint; chemical
pattern recognition
铁包金为广西壮族和西南少数民族常用的民族
药。《中国大辞典》和《中华本草》收载的铁包金为
鼠李科勾儿茶属细叶勾儿茶 Berchemia lineata (L．)
DC．和光枝勾儿茶 B． polyphylla Wall． ex Lawson 的
茎藤或根［1-2］，主要分布于我国广西、广东、西南及
陕西、福建、湖北、湖南等地区，具有止血止痛、化痰
镇咳、祛风湿、消肿毒等功效［1-4］。《广西中药材标
准》收载的铁包金为细叶勾儿茶干燥根［3］。由于细
叶勾儿茶资源越来越少，地下部分很难收集，民间出
现了多叶勾儿茶 B． polyphylla Wall． ex Laws、多花勾
儿茶 B． floribunda (Wall)Brongn根、茎替代细叶勾
·061·
第 19 卷第 24 期
2013 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 24
Dec．，2013
儿茶根、茎入药的现象［5］。
本文采用 HPLC 建立细叶勾儿茶、多叶勾儿茶
根、茎特征图谱，通过主成分分析(PCA)进行模式识
别，初步探讨细叶勾儿茶、多叶勾儿茶根、茎化学成
分比例上的差别，以阐述细叶勾儿茶根茎能否一起
入药，多叶勾儿茶能否替代细叶勾儿茶入药，以完善
铁包金的临床质量标准。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Shimadzu SCL-10AVP 高效液相色谱仪
AB204-N 型电子分析天平(Mettler Toledo) ，KQ-
500DE型超声波清洗器。
1. 2 试剂 槲皮素(批号 100081-200907)、大黄酚
(批号 110796-201017)对照品购自中国药品生物制
品鉴定所。乙腈为色谱纯(德国 Merck 公司) ，水为
超纯水，其余试剂均为国产分析纯。
24 批铁包金药材由广东药学院严寒静副教授
鉴定为鼠李科勾儿茶属植物细叶勾儿茶 B． lineata
和多叶勾儿茶 B． floribunda的干燥根或茎，见表 1。
表 1 细叶勾儿茶和多叶勾儿茶根、茎来源
No． 样品 采集地 采集时间 No． 样品 采集地 采集时间
S1 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S13 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
S2 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S14 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
S3 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S15 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
S4 细叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S16 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-11
S5 细叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S17 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-11
S6 细叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S18 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-11
S7 多叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S19 多叶勾儿茶茎 广东肇庆 2011-12
S8 多叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S20 多叶勾儿茶茎 广东肇庆 2011-12
S9 多叶勾儿茶根 广东番禺 2011-09 S21 多叶勾儿茶茎 广东肇庆 2011-12
S10 多叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S22 多叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
S11 多叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S23 多叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
S12 多叶勾儿茶根 广东肇庆 2011-01 S24 多叶勾儿茶茎 广东番禺 2011-09
2 方法
2. 1 色谱条件 色谱柱 Diamonsil C18柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)-0. 2%磷酸水溶
液(B)梯度洗脱(0 ～ 20 min，10% ～ 15% A;20 ～ 35
min，15%A;35 ～ 50 min，15% ～ 26% A;50 ～ 90 min，
26% ～60%A，;90 ～ 130 min，60% ～ 80% A，;130 ～
140 min，80%A。流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 280
nm，进样量 10 μL，柱温 25 ℃，运行时间 140 min。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品、
大黄酚对照品适量，加甲醇-盐酸溶液使溶解，制成
每 1 mL各含 15 μg的混合溶液，摇匀，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)
约 0. 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇-盐酸(4∶ 1)10 mL，密塞，称定质量，超声处理(功
率 250 W，频率 50 kHz)40 min，放冷，再称定质量，
用甲醇-盐酸(4 ∶ 1)溶液补足减失的质量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度实验 取 S1 批次样品供试品溶液，
按 2. 1 项下色谱条件连续进样 6 次，测定各共有峰
峰面积的 ＲSD ＜3%，说明仪器精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验 取 S1 批次样品 6 份，按 2. 2
项下方法制备，供试品溶液分别测得各共有峰峰面
积 ＲSD ＜3%，说明方法重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取 S1 批次样品制备供试品，
分别在 0，4，8，12，24，48 h测定，测得各峰峰面积的
ＲSD均 ＜ 3%，说明供试品溶液在 48 h，室温保存内
稳定。
2. 5 数据处理软件
2. 5. 1 相似度计算 按《中国药典》委员会《中药
色谱指纹图谱相似度评价系统》软件(2004A)进行
计算。
2. 5. 2 模式识别 使用 SIMCA-P + 12. 0 软件通过
聚类分析和主成分分析(PCA)对指纹图谱进行化学
模式识别。
3 结果
3. 1 铁包金特征图谱的测定及共有峰标记 精密
吸取对照品溶液适量，在 2. 1 项色谱条件下进行测
·161·
谢明容，等:铁包金根、茎特征图谱的研究
定，得槲皮素、大黄酚对照品图谱(图 1A)。精密吸
取各供试品溶液适量，在 2. 1 项色谱条件下进行测
定。共标定 11 个特征峰(图 1B) ，各特征峰相对百
分含量结果见表 2。
表 2 各共有峰的相对百分含量
样品 峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11
S1 0. 028 5 0. 023 9 0. 022 1 0. 008 5 0. 026 8 0. 031 8 0. 112 7 0. 018 8 0. 015 0 0. 032 8 0. 012 2
S2 0. 040 5 0. 020 5 0. 015 3 0. 007 2 0. 020 5 0. 029 9 0. 102 5 0. 019 7 0. 012 2 0. 028 6 0. 010 6
S3 0. 028 4 0. 018 1 0. 017 0 0. 008 2 0. 022 5 0. 033 2 0. 093 0 0. 022 9 0. 015 5 0. 031 9 0. 011 1
S4 0. 032 0 0. 016 4 0. 016 1 0. 009 7 0. 020 6 0. 028 3 0. 065 6 0. 025 8 0. 034 9 0. 030 1 0. 010 2
S5 0. 028 4 0. 018 2 0. 021 9 0. 008 6 0. 020 8 0. 048 5 0. 087 2 0. 028 9 0. 026 4 0. 056 0 0. 016 4
S6 0. 028 8 0. 020 2 0. 024 9 0. 008 1 0. 020 1 0. 042 3 0. 108 1 0. 025 4 0. 023 5 0. 051 0 0. 015 1
S7 0. 032 3 0. 011 5 0. 015 1 0. 013 4 0. 019 0 0. 025 9 0. 035 4 0. 017 5 0. 007 5 0. 019 6 0. 018 8
S8 0. 020 8 0. 017 2 0. 014 6 0. 008 4 0. 017 1 0. 044 0 0. 032 5 0. 025 0 0. 016 0 0. 035 7 0. 030 3
S9 0. 021 1 0. 018 0 0. 014 9 0. 008 8 0. 016 1 0. 044 1 0. 028 7 0. 025 4 0. 014 8 0. 036 1 0. 029 3
S10 0. 019 8 0. 018 7 0. 026 9 0. 015 8 0. 017 1 0. 000 5 0. 012 9 0. 000 2 0. 013 6 0. 000 2 0. 001 8
S11 0. 019 7 0. 017 3 0. 025 4 0. 015 6 0. 011 0 0. 000 7 0. 014 5 0. 000 1 0. 020 1 0. 000 8 0. 000 1
S12 0. 013 3 0. 022 0 0. 032 9 0. 017 4 0. 011 5 0. 000 7 0. 027 9 0. 000 2 0. 025 4 0. 000 1 0. 001 7
S13 0. 021 3 0. 014 9 0. 054 6 0. 007 8 0. 049 9 0. 002 0 0. 035 3 0. 000 8 0. 015 6 0. 002 6 0. 002 4
S14 0. 021 8 0. 015 0 0. 060 9 0. 012 2 0. 046 1 0. 001 6 0. 035 0 0. 000 8 0. 018 0 0. 001 8 0. 000 8
S15 0. 015 5 0. 015 6 0. 052 8 0. 011 4 0. 048 8 0. 001 0 0. 028 2 0. 000 3 0. 025 5 0. 001 7 0. 003 9
S16 0. 035 0 0. 016 9 0. 037 9 0. 010 3 0. 027 4 0. 000 2 0. 059 4 0. 000 1 0. 009 3 0. 000 5 0. 000 9
S17 0. 033 9 0. 025 3 0. 063 3 0. 011 5 0. 030 6 0. 000 5 0. 068 2 0. 000 1 0. 016 3 0. 000 5 0. 001 0
S18 0. 038 1 0. 023 9 0. 059 8 0. 010 6 0. 028 6 0. 000 4 0. 060 1 0. 000 1 0. 014 7 0. 000 4 0. 001 1
S19 0. 013 8 0. 013 4 0. 019 7 0. 027 9 0. 011 6 0. 000 3 0. 015 8 0. 000 1 0. 011 9 0. 000 3 0. 001 4
S20 0. 022 0 0. 009 7 0. 021 3 0. 032 8 0. 016 7 0. 000 6 0. 018 9 0. 000 2 0. 014 5 0. 000 8 0. 001 3
S21 0. 020 9 0. 006 4 0. 020 5 0. 031 9 0. 016 9 0. 000 6 0. 017 1 0. 000 2 0. 015 2 0. 000 8 0. 001 4
S22 0. 014 1 0. 019 5 0. 049 9 0. 006 9 0. 004 0 0. 008 6 0. 214 4 0. 000 6 0. 027 9 0. 000 4 0. 003 9
S23 0. 019 2 0. 024 3 0. 049 9 0. 009 6 0. 006 2 0. 009 0 0. 240 0 0. 001 0 0. 027 9 0. 000 7 0. 002 4
S24 0. 014 1 0. 019 5 0. 049 9 0. 006 4 0. 014 1 0. 001 7 0. 214 4 0. 004 2 0. 027 9 0. 000 4 0. 003 9
A. 对照品;B. 供试品;5. 槲皮素 9. 大黄酚
图 1 细叶勾儿茶根的 HPLC特征图谱
3. 2 特征图谱聚类分析 以 24 批不同产地的铁
包金根、茎为研究对象，进行特征图谱研究，获得 11
个共有色谱峰，以 11 个色谱峰的百分含量作为原始
数据矩阵，运用 SIMCA-P + 12. 0 统计学分析软件［6］
进行系统聚类分析。图 2 为聚类分析的分析图，图
2A中细叶勾儿茶和多叶勾儿茶根样品 S7，S8，S9，
S5，S6，S1，S4，S2，S3 聚为一支，剩下的 3 个多叶勾
儿茶根、6 个细叶勾儿茶根和 6 个多叶勾儿茶茎样
品聚为一支，这两个分支互为姐妹类群。把图 2A
结果中聚为一类的铁包金根样品再做聚类分析(图
2B) ，发现细叶勾儿茶根样品聚为一支，多叶勾儿茶
根样品聚为另一平行支。
3. 3 铁包金特征图谱主成分分析(PCA) 将 24 批
铁包金根茎采用非监督模式识别方法 PCA 来观察
样品的自然聚集，PCA 能够将分散在诸多变量中的
信息集中到主成分上，来定量描述数据内部结构，具
有相似化学组成特征的样本往往处于相似的位
置［6］。图 3 为 PCA两组样本的得分矩阵图，得分图
中每一个点代表了一批样本，可以直观地给出各样
本在空间上的位置。该模型中有 8 个主成分，用
PC1 对 PC2 作图，从得分图可见铁包金的根和铁包
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
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图 2 铁包金根、茎聚类分析图(A)、铁包金根聚类分析(B)
金的茎两组样本能较明显区分，由 PCA结果分析可
知，前 5 个主成分累计贡献率可达 91. 1%，其中前 3
个成分贡献较大 78. 0%。将提取的 8 个成分和对
应的特征值做散点图(图 4) ，观察散点图发现前 5
个成分的斜率非常陡，而剩余的其他成分之间的斜
率则较为平缓。斜率越陡贡献率越大，斜率越平缓，
贡献率越小。
图 3 主成分平面得分
3. 4 特征图谱相似度分析 将 24 批药材(多叶勾
儿茶和细叶勾儿茶的干燥根或茎)数据导入《中药
指纹图谱相似度评价系统》软件(2004A)进行色谱
峰的匹配，得到 24 批多叶勾儿茶和细叶勾儿茶的干
燥根或茎的 HPLC 特征图谱纵向叠加图(图 5) ，其
中在聚类分析中聚为一支的 9 批(多叶勾儿茶和细
叶勾儿茶的干燥根)样品:S1，S2，S3，S4，S5，S6，S7，
S8，S9 的相似度分别为 0. 964，0. 920，0. 949，0. 966，
图 4 铁包金根、茎特征值散点
0. 964，0. 878，0. 859，0. 853，0. 860。在聚类分析中
另一个分支的 15 批样品(多叶勾儿茶和细叶勾儿
茶茎 12 个、多叶勾儿茶根 3 个)S10，S11，S12，S13，
S14，S15，S16，S17，S18，S19，S20，S21，S22，S23，S24
相似度分别为 0. 675，0. 854，0. 726，0. 777，0. 812，
0. 758，0. 882，0. 872，0. 862，0. 693，0. 682，0. 670，
0. 726，0. 757，0. 757。把 S1 ～ S9 相似度作为一组，
S10 ～ S24 相似度作为另一组做显著性差异分析
(P ＜ 0. 05) ，从结果可以看出，不同种类不同产地的
铁包金根、茎在其成分比例上有差异很大，且相对铁
包金茎来说，根的化学成分比例较为稳定。
图 5 铁包金根或茎的 HPLC特征图谱纵向叠加
4 讨论
铁包金主要含黄酮、蒽醌类等成分［7-8］，曾采用
不同溶剂(甲醇、乙醇、50%甲醇、80%乙醇［9］、甲酸-
冰醋酸 4∶ 1、甲醇-盐酸 4∶ 1［10］)提取，发现甲醇-盐酸
4∶ 1溶剂所提取的溶液色谱峰较多且峰型更好，故加
入酸使黄酮，蒽醌等更好的游离，同时使黄酮苷和蒽
醌苷水解而峰强度增高。流动相的选择时，考察了
甲醇-0. 1%磷酸水溶液、甲醇-0. 2%磷酸［9］水溶液、
乙腈-0. 2% 磷酸水溶液等流动相系统，以乙腈-
0. 2%磷酸水溶液系统可使色谱峰较好分离，基线更
平滑，故选择该流动相系统。
张荣祥等［11］对铁包金茎、叶中槲皮素含量测定
研究结果表明:叶中槲皮素的含量高于茎，茎部位水
解前后槲皮素的含量变化较小而叶部位水解前后槲
皮素的含量变化明显，建议茎、叶分别入药。民间铁
包金用药通常根、茎不分，笔者发现即使同一品种
(细叶勾儿茶、多叶勾儿茶)同一产地铁包金根、茎
组织的化学组成差异也较大，考虑用药的安全性，建
·361·
谢明容，等:铁包金根、茎特征图谱的研究
议铁包金根、茎不能做同一药材使用，应分别入药。
同时不同种铁包金根的聚类分析结果(图 2B)和特
征图谱相似度结果(多叶勾儿茶相似度在 0. 853 ～
0. 860)表明，多叶勾儿茶根与细叶勾儿茶根成分比
例上存在一定的差异，故认为多叶勾儿茶根不能替
代细叶勾儿茶根。从细叶勾儿茶根、茎不能做同一
药材使用，多叶勾儿茶不能替代细叶勾儿茶的结果
来看，笔者比较认同《广西中药材标准》收载的铁包
金为细叶勾儿茶干燥根。
聚类分析(图 2A)中 3 个多叶勾儿茶根(S10，
S11，S12)与 12 个茎聚为一支，从各共有特征峰相
对百分含量分析(表 2) ，可能是因为峰 6，8，10，11
的面积百分含量与其他根差别很大，而与茎的面积
百分含量接近，故峰 6，8，10，11 可作为细叶勾儿茶
的化学标记物。
随着细叶勾儿茶资源日益稀少，应寻找更好的
细叶勾儿茶种植方法，或者寻找其他的药材作为替
代品，而对于细叶勾儿茶根、茎之间的疗效差异，应
做进一步的药理学研究。本实验建立的 HPLC 法分
析铁包金根、茎特征图谱，能够使铁包金根、茎的共
有成分在色谱图中体现，所建立的分析方法具有较
好的稳定性和可控性，可用于铁包金的质量控制。
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［责任编辑 邹晓翠
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《中国中药杂志》2014 年征订启事
《中国中药杂志》系中国科协主管，中国药学会主办，中国中医科学院中药研究所承办的综合性中药学术期刊。创刊于
1955 年 7 月，是创刊最早、发行量最大的中药学术刊物。《中国中药杂志》全面反映我国中医科研最高学术水平，主要报道该
领域新成果、新技术、新方法与新思路，内容包括栽培、资源与鉴定、炮制、药剂、化学、药理、不良反应、临床等。设有专论、综
述、研究论文、研究报告、临床、学术探讨、药事管理、经验交流、信息等栏目。主要读者对象为医药领域各级管理部门、研究院
所、大专院校、企业以及医院等从事医药科研、管理、生产、医院制剂及临床研究等方面的专业人员。
《中国中药杂志》现为半月刊，128 页，2014 年定价每期 30 元，全年 24 期定价为 720 元。国内刊号 11 － 2272 /Ｒ，国际刊号
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第 19 卷第 24 期
2013 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 24
Dec．，2013