全 文 ：第16卷 第11期
Vol.16 No.11
2010年 11月
November.2010Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
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（收稿日期：2010-06-18 编辑：李海洋）
HPLC法测定地锦草灌肠液中苦参碱的含量
佘永红1，李 璞1，周 顺2
（1.湘西自治州药品检验所，湖南 吉首 416000；2.湘西自治州民族中医院，湖南 吉首 416000）
[摘要] 目的：建立地锦草灌肠液中苦参碱的含量测定。方法：采用HPLC法，色谱柱为BDS Hypersil C18柱，流动相为甲
醇-乙腈-三乙胺-磷酸盐缓冲液，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为220 nm，柱温为室温，进样量为20 μL。结果：苦参碱在
0.3616-4.338 μg范围内呈良好的线形关系（r=0.9996），平均回收率为97.7%，RSD%为0.77%（n=6）。结论：该方法简便，准确，重
现性好，可用于地锦草灌肠液的质量控制。
[关键词] 地锦草灌肠液；HPLC；苦参碱；含量测定
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2010）11-0090-02
Determination of grass enema Verbena matrine in by HPLC
She Yonghong, Li Pu, Zhou Shun
(1.Xiangxi Drug Inspection Jishou,, Hunan 416000；
2.Xiangxi National Traditional Chinese Medicine Hospital, Jishou ,Hunan 416000)
[Abstract] Objective: To establish a creeper grass enema Determination of matrine. Methods: HPLC, column was BDS
Hypersil C18 column with a mobile phase of methanol-acetonitrile-triethylamine-phosphate buffer, flow rate of 1.0 mL·min-1,
the detection wavelength was 220 nm, column temperature was room temperature, The injection volume was 20 μL. Results:
matrine in the range 0.3616-4.338 μg showed a good linear relationship (r=0.9996), the average recovery was 97.7%, RSD%
was 0.77% (n=6). Conclusion: The method is simple, accurate, reproducible, and can be used for Euphorbia humifusa enema
quality control.
[Key words] creeper grass enema; HPLC; matrine content
地锦草灌肠液为湘西自治州民族中医院的医院制剂，由
地锦草、苦参、地榆、三棵针等6味药材组成。具有消肿止痛、
通便的功效，用于治疗慢性结肠炎。经多年临床验证，疗效确
切。为了有效的控制药品质量，笔者采用HPLC法测定苦参中
苦参碱的含量，现报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10ATvp 液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测
器，20 μL定样环，WDL-95色谱工作站，AB135-S电子天平。
1.2 试药 苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所提供）；
甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试药均为分析纯。
1.3 样品 地锦草灌肠液（湘西州民族中医院提供，批号：
20100301、20100305、20100316）；阴性对照药材自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-三乙胺-磷酸盐缓冲液(pH=6.8，
10:17:0.1:73)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：220 nm[1]；柱温：
室温，进样量：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥12 h
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2010.11.041
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2010年 11月
November.2010
2.6 线形关系考察 分别精密吸取浓度为0.723 mg·mL-1苦
参碱对照品溶液0.25、0.5、0.8、1、2、3 mL，至10 mL量瓶中，加
流动相稀释至刻度，制成0.01808、0.03615、0.05784、0.07230、
0.1446、0.2169 mg·mL-1的溶液，进样量20 μL，按上述色谱条
件注入液相色谱仪中，以峰面积Y对进样量X做线形回归，回
归方程为Y=15943.370+587369.507X，r=0.9996。结果表明：苦
参碱在0.3616-4.338 μg范围内呈良好的线形关系。
2.7 精密度实验 取同一浓度苦参碱对照品溶液，连续进样
6次，峰面积的RSD%为0.81%。
2.8 重复性实验 取同一批号样品5份（批号：20100301），分
别按样品测定法测定。测定含量分别为 0.4082、0.4129、
0.4056、0.4108、0.4035 mg·mL-1，平均含量为0.4082 mg·mL-1，
RSD%为0.94%。
2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、1、2、4、8、12 h，共
进样6次，峰面积积分值RSD%=1.1%，表明供试品溶液在12 h
内基本稳定。
2.10 加样回收率实验 另精密称取苦参碱对照品10.00 mg，
置50 mL量瓶中，加氯仿适量使溶解并稀释至刻度，制成
0.20 mg·mL-1的对照品溶液。分别精密吸取供试品溶液
（0.4082 mg·mL-1）1 mL置分液漏斗中，精密加入对照品溶液
2 mL，按供试品溶液的方法制备，残渣加少量甲醇溶解，置
10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，用微孔滤膜滤过，即得。
以上述色谱条件测定，得苦参碱平均回收率为97.7%，RSD%
为0.77%（n=6）。（见表1）
表1 加样回收率试验结果 （n=6）
序号 取样量 样品含量 加入对照 测得量 回收率 平均回收 RSD
(mL) (mg) 品量(mg) (mg) (%) 率(%) (%)
1 1 0.4082 0.4000 0.8009 98.2
2 1 0.4082 0.4000 0.7973 97.3
3 1 0.4082 0.4000 0.7955 96.8
4 1 0.4082 0.4000 0.7997 97.9
5 1 0.4082 0.4000 0.7966 97.1
6 1 0.4082 0.4000 0.8025 98.8
2.11 样品含量测定 分别精密吸取对照溶液、供试品溶液各
20 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算含量，结果见表2。
表2 样品的含量测定结果
苦参碱含量
1 2 3 4 5
20100301 0.4082 0.4129 0.4056 0.4108 0.4035 0.4082±0.004 0.94
20100305 0.4259 0.4277 0.4184 0.4178 0.4233 0.4226±0.004 1.1
20100316 0.4022 0.4030 0.3987 0.4009 0.3976 0.4005±0.002 0.58
3 讨 论
苦参为本制剂的君药，苦参碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、变
形杆菌、乙型链球菌及金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作
用[2]，故采用HPLC法测定该制剂中苦参碱的含量。
含量测定溶剂的选择，比较甲醇和流动相，由于甲醇的
截止波长为205 nm，基线溶剂峰比较大，因此用加流动相稀
释至刻度。
按制备工艺方法制备苦参单味水提取液和本制剂提取
液，发现本制剂中苦参碱含量比单味制剂要高，说明药材在
合并提取过程中苦参碱和氧化苦参碱发生了氧化还原反应,
苦参碱和氧化苦参碱的含量存在动态变化 [3]。中药复方制剂
在提取过程中所含的化学成分发生相互作用，产生了一系列
变化，这些变化后的成分直接影响中药复方制剂的疗效[4]。
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（收稿日期：2010-07-15 编辑：李海洋）
A-对照品 B-供试品 C-阴性对照品
图 1 地锦草灌肠液 HPLC 色谱图
批号 x±s(mg) RSD(%)
97.7 0.77
的苦参碱对照品14.46 mg，置20 mL量瓶中，加甲醇适量使溶
解并稀释至刻度（0.723mg·mL-1），摇匀，精密吸取2 mL，至25 mL
量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含57.84 μg
的溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品5 mL，置分液漏斗
中，加氨试液1 mL，加三氯甲烷振摇提取3次，每次20 mL，提
取液蒸干，残渣加少量甲醇溶解，置25 mL量瓶中，加流动相
稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备 取除苦参外的其他处方量药
材，按制备工艺方法制备阴性样品，按上述供试品溶液制备
制成阴性对照品溶液。
2.5 系统实用性试验 按上述色谱条件测定，苦参碱峰与其
他峰分离度大于1.5，理论板数均在12000以上。供试品色谱
中，在与对照品色谱峰相应的位置上检出色谱峰，阴性对照
品在与对照品色谱峰相应的位置上无色谱峰，说明阴性对照
品无干扰。（见图1）
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