全 文 ：Central South Pharmacy. March 2014, Vol. 12 No.3　中南药学 2014 年 3 月 第 12 卷 第 3 期
278
药品质量的研究 [J].药物分析杂志，2011，31（3）：603-
607.
[10] 刘伟，范可青，包艳春，等 . 运用近红外光谱法对青霉素 V
钾片一致性检验的研究 [J]. 药物分析杂志，2010，29（1）：
125-127.
[11] 王跃卿，杨威 . 利用近红外（NIR）一致性检验模型及图谱
比对法初筛复方氨酚烷胺片假药的情况分析 [J].中国医药
导报，2010，7（13）：56-57.
（收稿日期：2013-09-22；修回日期：2013-11-08）

基金项目：湖南省中医药科研计划项目（No. 2013136）；湖南中医药大学药物分析学“十二五”校级重点学科建设项目。
作者简介：李小军，男，在读硕士研究生，主要从事中药及天然药物活性成分研究，E-mail：lxq0001@163.com * 通讯作者：刘向前，
男，教授，硕士研究生导师，主要从事中药及天然药物活性成分研究，E-mail：lxq0001cn@163.com
苗药冠盖藤不同部位总香豆素含量测定
李小军，杨丹丹，李芝，刘向前 * （湖南中医药大学药学院，长沙 410208）
摘要：目的　建立冠盖藤药材中不同部位总香豆素含量测定方法。方法　采用UV法，以伞形花内酯为对照品，
检测波长为 325 nm。 结果　在 2.78～ 8.34 μg·mL－ 1 质量浓度内，对照品伞形花内酯的吸光度和浓度线性
关系良好，r＝ 0.999 0；冠盖藤藤茎和叶的总香豆素含量分别为 0.094%和 0.009 61%。结论　冠盖藤藤茎和
叶的总香豆素含量差别较大；该法简便、可靠，为合理利用冠盖藤资源提供了参考和实验依据。
关键词：冠盖藤；总香豆素；紫外分光光度法；含量测定
中图分类号：R917　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2014)03-0278-03
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2014.03.023
Determination of total coumarins in different parts of
Pileostegia viburnoides Hook.f.et Thoms
LI Xiao-jun, YANG Dan-dan, LI Zhi, LIU Xiang-qian* (School of Pharmacy, Hunan University of Traditional Chinese
Medicine, Changsha 410208)
Abstract: Objective To establish a method to determine the total coumarins in different parts of Pileostegia vi-
burnoides Hook.f.et Thoms. Methods With umbelliferone as the reference substance, the coumarin was detected at
325 nm by UV. Results The absorbency and concentration of umbelliferone had a good linear relationship at 2.78－
8.34 μg • mL － 1, r ＝ 0.999 0. The total coumarins of stem and leaf of Pileostegia viburnoides were 0.094% and
0.009 61%. Conclusion The total coumarins of stem and leaf of Pileostegia viburnoides have major differences. The
content determination method is simple and repeatable, which provides useful reference and foundation for reasonable
utilization Pileostegia viburnoides resources.
Key words: Pileostegia viburnoides Hook.f.et Thoms; total coumarin; UV; content determination
冠盖藤 Pileostegia viburnoides Hook.f.et Thorns为虎
耳草科冠盖藤属植物，主要分布于长江以南各地。生于
溪边、山谷林下，常沿山岩和其他植物上升。全株入药，
味辛、微苦，性温 [1]。具有祛风除湿、散瘀止痛、舒筋活络、
消肿解毒的功效，用于治疗风湿麻木、跌打损伤、骨伤、
肾虚腰痛、外伤出血、多发性脓肿、多年烂疮，为苗族
常用药材 [2-3]。本课题组首次对其进行了成分研究，已从
其藤茎中分离鉴定出了 8个化合物，分别为木栓烷型三
萜类木栓酮、3-氧代木栓烷 -28-醛；甾醇类豆甾醇、胡
萝卜苷、（24R）-5A-豆甾烷 -3，6-二酮、4-豆甾烯 -3-酮；
香豆素类有伞形花内酯、臭矢菜素 A[4-5]；同时也对其不
同部位挥发性成分进行 GC-MS分析，结果发现冠盖藤藤
茎中化合物类型主要为烷烃、有机酸、酯、醇；叶中主
要为酯、醇、有机酸、酰胺、异丁基异硫氰酸盐、甲基 -2-氧 -
苯甲酰 -d-呋喃糖苷及酮 [6-7]。伞形花内酯（umbelliferone）
是冠盖藤植物中新发现的有效成分之一，为香豆素类化
合物。现代研究表明，香豆素类化合物具有广泛的药理
活性，具有抗肿瘤、抗 HIV、抗凝血、抗氧化、抗高血
压作用、光敏作用、抗骨质疏松等作用 [8-10]。本实验以冠
盖藤药材中分得的单体化合物伞形花内酯为对照，采用
UV法建立了冠盖藤药材中不同部位总香豆素含量测定的
方法 [11-12]。该方法简便、可靠，为合理利用冠盖藤资源
中南药学 2014 年 3 月 第 12 卷 第 3 期　Central South Pharmacy. March 2014, Vol. 12 No. 3
279
提供了依据。
1 材料
1.1 仪器
UV-1750紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；
R2-201型旋转蒸发仪（上海申胜生物技术有限公司）；
AUW-120D精密电子天平（日本岛津公司，精度：0.01
mg）；DZF-6020型真空干燥箱（上海金鹏分析仪器有限
公司）。
1.2 试药
冠盖藤于 2010年 8月采自湖南沅陵，经湖南中医
药大学刘向前教授鉴定为虎耳草科冠盖藤属植物冠盖
藤 Pileostegia viburnoides Hook.f.et Thoms的全株。标本
保存于湖南省重点实验室中药新药研究与开发实验室，
标本号为 100812。对照品从冠盖藤藤茎中分离得到，
经 UV、IR、MS、NMR鉴定确定为伞形花内酯，纯度
≥ 99%；其余试剂均为市售分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称定伞形花内酯 6.95 mg，用甲醇溶解、超声并
定容至 100 mL，摇匀，即得 69.5 μg·mL－ 1的对照品溶液。
2.2 不同部位供试品溶液的制备
2.2.1 冠盖藤藤茎供试品溶液的制备 取冠盖藤藤茎样
品（过 24目筛）约 5.0 g，精密称定，加 50 mL甲醇回
流提取 3次，每次 40 min，滤过，合并 3次滤液，用
甲醇定容于 250 mL量瓶中，摇匀，精密吸取上述溶液
5 mL，用甲醇定容于 25 mL量瓶中，摇匀，即得。
2.2.2 冠盖藤叶供试品溶液的制备 取冠盖藤叶粉末
750 g，精密称定，加适量甲醇回流提取 3次，滤过，合
并 3次滤液后浓缩成浸膏，再加适量蒸馏水溶散，依次
用石油醚、乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取部位浸膏 3 g，
将其干燥，研成粉末，取 10 mg，精密称定，用甲醇定容
于 25 mL量瓶中，摇匀，精密吸取上述溶液 4 mL，用甲
醇定容于 10 mL量瓶中，摇匀，即得。
2.3 检测波长的选择
取对照品和供试品溶液，于 200～ 400 nm扫描，对
照品和供试品溶液均在 325 nm处有最大吸收，峰形变化
平缓，且空白试剂无干扰，便于定量测定，故选择检测
波长为 325 nm。UV光谱扫描结果见图 1。
图 1 冠盖藤 UV光谱扫描图
Fig 1 UV chromatogram of Pileostegia viburnoides Hook.f.et Thoms
A.甲醇（methanol）；B.伞形花内酯（umbelliferone）；C.藤茎（stem）；D.叶（leaf）
200 250 300 350 400200 250 300 350 400
nm
2.7
2.0
1.0
A B
3
2吸
光
度
吸
光
度 1
0
nm
200 250 300 350 400
D
0
1
2
3
4
nm
吸
光
度
200 250 300 350 400
C
0
1
2
3
4
nm
吸
光
度
2.4 线性关系考察
精密吸取 69.5 μg·mL－ 1的对照品溶液 1.0、1.5、2.0、
2.5、3.0 mL，用甲醇定容至 25 mL，摇匀，以甲醇为空白，
于 325 nm处测定吸光度。以对照品溶液的质量浓度（C，
μg·mL－ 1）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，得回归
方程 A＝ 0.102 7C－ 0.006 1，r＝ 0.999 0（n＝ 5）。
结果表明香豆素对照品在 2.78～ 8.34 μg·mL－ 1，吸光
度与浓度呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取同一浓度的香豆素对照品溶液，重复测定 5次，
RSD为 0.21%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
分别取“2.2.1”和“2.2.2”项下供试品溶液于室温
下放置 0、2、4、8、12 h，于 325 nm处测定吸光度，结
果表明供试品溶液在 12 h内稳定，RSD分别为 1.8%和
1.2%。
2.7 重复性试验
各取 5份冠盖藤藤茎样品和叶乙酸乙酯萃取部位粉
末 5.0 g和 10 mg（相当于叶约 2.5 g），分别按照“2.2.1”
和“2.2.2”项下的方法分别制备样品溶液，在 325 nm处
测定吸光度并计算其含量，结果冠盖藤藤茎 RSD为 2.1%，
冠盖藤叶 RSD为 2.0%。
2.8 加样回收试验
各取 6份冠盖藤藤茎样品和叶乙酸乙酯萃取部位粉末
5.0 g和 10 mg（相当于叶约 2.5 g），精密称定。置圆底
烧瓶中，在藤茎样品中各精密加入对照品伞形花内酯约
4.50 mg，叶样品中各精密加入伞形花内酯约 0.25 mg，制
备样品溶液，在 325 nm处测定吸光度，计算含量和回收
率，结果见表 1。
2.9 样品含量测定
各取 3份冠盖藤藤茎样品和叶乙酸乙酯萃取部位粉
末 5.0 g和 10 mg（相当于叶约 2.5 g），精密称定，分别
按照“2.2.1”和“2.2.2”项下的方法分别制备样品溶液，
在 325 nm处测定吸光度并根据标准曲线计算出样品中总
香豆素的含量。冠盖藤藤茎和叶中总香豆素含量分别为
0.094 0%和 0.009 6%（n＝ 3）。
3 讨论
伞形花内酯对照品为本实验室从冠盖藤藤茎中所分
离得到，纯度≥ 99%（通过 NMR、MS、HPLC确认）。
取冠盖藤叶甲醇提取液与伞形花内酯对照品共薄层，在
与对照品色谱相应的位置上显相同的亮蓝色荧光斑点，
TLC检测说明冠盖藤叶中也含有香豆素类成分。对冠盖
藤叶甲醇提取液进行石油醚、乙酸乙酯萃取，石油醚萃
取可进行脱脂，除色素，排除对测定时的干扰；将石油醚、
乙酸乙酯萃取部位与伞形花内酯对照品共薄层，结果只
有乙酸乙酯萃取部位与对照品色谱相应的位置上显相同
的亮蓝色荧光斑点，TLC检测说明只有乙酸乙酯萃取部
位含有香豆素类成分，用乙酸乙酯萃取部位浸膏制备冠
Central South Pharmacy. March 2014, Vol. 12 No.3　中南药学 2014 年 3 月 第 12 卷 第 3 期
280
盖藤叶供试品溶液可行。
UV法结果表明，冠盖藤藤茎中总香豆素含量较高，
叶中含量低，两者的香豆素含量相差较大。在临床使用
时建议藤茎和叶分开使用，其成分分析在进一步研究中。
该法测定香豆素灵敏度高，重复性好，可作为冠盖
藤质量控制方法，也为合理利用冠盖藤资源提供了参考
和科学依据。

参考文献
[1] 中国药材公司 .中国中药资源志要 [M].北京：科学出版社，
1994：485．
[2] 蔡光先 .湖南药物志 [M].长沙：湖南科学技术出版社，
2004：3360-3361．
[3] 金建东．三藤药散在骨伤科的应用 [J].中国民间疗法，
2001，9（7）：41．
[4] 袁燕．冠盖藤抗肿瘤活性成分研究 [D].长沙：湖南中医药
大学，2013．
[5] 袁燕，刘向前，刘祖贞，等 .闪式提取法研究苗药冠盖藤不
同部位脂溶性成分 [J].中药材，2011，34（12）：1894-1897.
[6] 杨丹丹．冠盖藤叶化学成分研究 [D].长沙：湖南中医药大
学，2013．
[7] 杨丹丹，刘向前，刘祖贞，等 .苗药冠盖藤不同部位挥发
性成分的 GC-MS分析 [J]．西北药学杂志，2012，27（3）：
189-192．
[8] Reutrakul V，Leewanich P，Tuchinda P，et al. Cytotoxic
coumarins from Mammea harmandii [J]. Planta Medica，
2003，69（11）：1048-1051.
[9] Shikishima Y，Takaishi Y，Honda G，et al. Chemical consti-
tuents of Prangost schiniganica：structure elucidation and abso-
lute confi guration of coumarin and furanocoumarin derivatives
with anti-HIV activity [J]. Chem Pharmaceut Bull，2001， 49
（7）：877-880.
[10] Murat Bilgin H，Atmaca M，Deniz Obay B，et al. Protective
effects of coumarin and coumarin derivatives against Carbon
tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats [J]. Exp Toxi-
col Pathol，2011，63（4）：325-330.
[11] 李丽丽，刘向前，高敬铭，等 .中、日、韩当归中挥发油
成分研究和总香豆素含量测定 [J].中国药师，2009，12（10）：
1344-1347．
[12] 宣志红 .紫外分光光度法测定前胡药材中总香豆素 [J].中草
药，2008，39（11）：1741-1742．
（收稿日期： 2013-09-17； 修回日期： 2013-10-30）
表 1 加样回收试验结果 (n＝ 6)
Tab 1 Recovery (n＝ 6)
部位
（part）
取样量
（sample
weight）/g
样品中含量
（sample content）
/mg
加入量
（added amount）
/mg
测得量
（detected amount）
/mg
回收率
（recovery）
/%
平均回收率
（average
recovery）/%
RSD
/%
藤茎 5.000 4 4.742 4.506 9.222 99.4 99.4 1.3
5.002 1 4.720 4.507 9.137 98.0
5.001 2 4.679 4.498 9.087 98.0
5.000 9 4.762 4.502 9.315 101.1
5.001 4 4.693 4.505 9.224 100.6
5.001 7 4.685 4.496 9.156 99.5
叶 2.572 5 0.259 0.255 0.519 102.0 99.6 1.6
2.537 5 0.258 0.252 0.508 99.2
2.515 0 0.247 0.257 0.499 98.1
2.530 0 0.251 0.253 0.506 100.8
2.507 5 0.250 0.254 0.499 98.0
2.551 3 0.253 0.258 0.510 99.6
[6] 付霞．双黄连粉针治疗带状疱疹合并老年糖尿病 22例疗效
分析 [J]．中国医学创新，2012，9（29）：22．
[7] Saleh MR，Muneshiige H，Ikuta Y. Effects of neu-rotropin on
hypera lgesia and all odynia in mononeu-ropathic rats [J]. Life
Sci，1998，63：1931-1938.
[8] 黄东祥．治疗带状疱疹后顽固性神经痛安全有效 [J]．四川
医学，2011，32（2）：222-223．
[9] Lzumi Y，Kaji R. Clinical trials of ultra-high-dose methyl-
cobalamin in ALS [J]. Brain and Nerve，2007，59（10）：
1141-1147.
[10] 赵宏，孙艺丹，郑宏．皮内注射和神经阻滞疗法治疗老年
带状疱疹后神经痛的比较 [J]．新疆医科大学学报，2007，
29（9）：1020-1021．
[11] 谭宪湖，谭冠先，何睿林，等．神经阻滞联合药物治疗老
年胸背部带状疱疹后神经痛的临床观察 [J]．临床麻醉学杂
志，2005，21（1）：33-35．
（收稿日期： 2013-10-07； 修回日期： 2013-11-18）
（上接第 261页）