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马比木提取物抑菌作用的初步探讨



全 文 :马比木提取物抑菌作用的初步探讨
张 丽,刘世彪,彭小列,郭爱环
(吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南 吉首 416000)
摘 要:为研究马比木提取物的抑菌作用,采用不同的溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮)对马比木根皮的醇提物进行成分提
取,将所得到的提取物用滤纸片法分别对大肠杆菌、藤黄八叠球菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、产气杆菌、青霉-1、黑
曲霉和青霉-2进行抑菌试验。结果表明,马比木提取液对霉菌-2具有极显著的抑制作用,对青霉-1、产气杆菌和大肠杆菌也具有
较强的抑菌效果。乙醇和丙酮提取物的抑菌效果优于其他溶剂。
关键词:马比木;提取物;抑菌作用
中图分类号:TS202.3 文献标识码:A 文章编号:1006-060X(2010)07-0094-03
Primary Study on the Bacteriostasis of Extracts from Nothapodytes pittosporoides
ZHANG Li, LIU Shi-biao, PENG Xiao-lie, GUO Ai-huan
(College of Biology and Environmental Sciences, Jishou University, Jishou 416000, PRC)
Abstract: The bacteriostasis of extracts from Nothapodytes pittosporoides was studied. Different solvents (petroleum
ether, chloroform, ethyl acetate and acetone) were used to extract the ethanol extract from the root bark of N.
pittosporoides. The inhibitory experiments of the extracts against Escherichia coli, Sarcina lutea, Proteus mirabilis,
Bacillus subtilis, Candida albicans, Bacillus aerogenes, penicillium sp-1, Aspergillus niger and penicillium sp-2 were
tested by filter paper method. The results indicated that the inhibitory effects of the extracts against penicillium sp-1
were significant, and the inhibitory effects of the extracts against penicillium sp-2, Bacillus aerogenes and Escherichia
coli were also good. The bacteriostasis of ethanol extract and acetone extract were superior to those of other solvents.
Key words: Nothapodytes pittosporoides; extraction; bacteriostasis
马 比 木 [Nothapodytes pittosporoides(Oliv.)
Sleum.]为茶茱萸科假柴龙树属植物,又名海桐假柴
龙树,海桐马比木, 南紫花树,公黄珠子,追风伞,湘
西苗族药物名“都溜咚”。根皮入药能祛风除湿,理气
散寒,主治风寒湿痹,浮肿疝气、关节疼痛等症[1-2]。有
报道马比木植物含有喜树碱及喜树碱的甲氧基衍
生物[2-3],具有抗肿瘤活性,在印度正作为抗肿瘤的
单味药来研发[4]。目前关于马比木的生药学[5]及药理
功能的研究很少,尚未见其根皮提取物的抑菌活性
的报道。笔者以多种食品污染菌和致病菌为对象,
对马比木根皮提取物的抑菌效果进行了研究,为更
好地开发和利用马比木植物资源提供依据。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 供试材料 野生的马比木于 2008年 11月
8日采自湖南省吉首市大兴庄,经吉首大学植物分
类专家张代贵教授鉴定为茶茱萸科马比木
Nothapodytes pittosporoides。采回后清洗主根,阴干,
室温保存。
1.1.2 供试菌株 大肠杆菌(Escherichia coli)、藤
黄八叠球菌(Sarcina lutea)、变形杆菌(Proteus vul-
garis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠
菌(Candida albicans)、产气杆菌(Bacillus aero-
genes);青霉-1(penicillium sp-1)、黑曲霉(As-
pergillus niger)和青霉-2(penicillium sp-2)。以上
菌物均由吉首大学微生物实验室提供。
1.1.3 溶 剂 供试试剂:95%的乙醇、丙酮、石油
醚、氯仿、乙酸乙酯(均为国产分析纯)。
1.1.4 仪 器 供试仪器:101-2电热鼓风干燥箱
(上海市实验仪器总厂)、KQ-250DB型数控超声波
清洗器(昆山市超声仪器有限公司),低速离心机
(北京医疗设备厂)、RE52-99旋转蒸发器(上海亚
荣生化仪器厂)、FDU-1200冷冻干燥机(上海优浦
科学仪器有限公司);LD5-2A立式压力蒸汽灭菌锅
(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)、GSP -
9080MBE隔水式恒温培养箱(上海博讯实业有限
收稿日期:2010-03-01
基金项目:植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室开放
基金(JSK200901)。
作者简介:张 丽(1968-),女,湖南邵阳市人,高级实验师,
主要从事微生物药理研究。
通讯作者:刘世彪
湖南农业科学 2010,(7):94~96 Hunan Agricultural Sciences
DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2010.07.013
公司医疗设备厂)、SW-CJ-1F超净工作台(上海阳
光实验仪器有限公司)。
1.2 方 法
1.2.1 马比木提取物的制备 将马比木主根的根
皮剥下,切成 5 mm大小颗粒,于 70℃电热鼓风干
燥箱中烘干 12 h。用植物粉碎机研成细末,过 80目
筛。称取粉末 90 g,加入质量分数为 95%的乙醇,定
容至 300 mL,放置过夜。用超声波清洗器在 60℃、
250 W条件下超声提取 30 min,以 3 000 r/min离
心 5 min,取其上清液。用旋转蒸发器对上清液进行
蒸发浓缩,真空冷冻干燥,得马比木根皮醇提物。
将该醇提物用 30 mL无菌水混匀,分成 5等
份。1号为乙醇提取液(原液),2至 5号乙醇提取液
分别用极性逐渐增加的、同体积的石油醚、氯仿、乙
酸乙酯和丙酮萃取 3次,合并各萃取液,蒸发浓缩
得到的残留物即为马比木根皮石油醚提取物(2
号)、氯仿提取物(3号)、乙酸乙酯提取物(4号)和
丙酮提取物(5号)。提取物用无菌水配成与 1号等
浓度的提取液。
1.2.2 培养基的配制 (1)细菌培养基牛肉膏蛋白
胨的配制。取 9.5 g营养肉汤和 9.0 g琼脂放入锥形
瓶中加水至 500 mL。将配制好的培养基移入 250
mL三角瓶中,在 0.1 MPa、121℃高压灭菌锅中灭菌
30 min,冷却至 45℃,备用。(2) 霉菌培养基
PDAPDA的配制。将马铃薯去皮,切成薄片,放入装
有 10 g琼脂的 1 000 mL烧杯中煮沸 30 min,纱布
过滤,取其滤液加入蔗糖 10 g,补足水至 500 mL。
将配制好的培养基移入 250 mL三角瓶中,在 0.1
MPa、121℃高压灭菌锅中灭菌 30 min,冷却至
45℃,备用。
1.2.3 抑菌实验 (1)供试菌株的活化。将所有供
试菌株接入斜面培养基,细菌置于 37℃恒温培养箱
内培养 24 h,霉菌于 30℃恒温培养箱内培养 48 h活
化后,置 0~4℃冷藏备用。(2)菌悬液的制备。用接种
环挑取试验菌种,放入装有玻璃球的 50 mL无菌生
理盐水中,振摇 10 min,使菌分布均匀,通过稀释,采
用比浊法分别制成浓度为 107个/mL的各种试验菌
悬液备用。(3)滤纸片法抑菌实验。参照张雁[6]等方法
并略作改变。在超净工作台上用无菌吸管吸取上述
各种菌悬液 0.2 mL于无菌平皿中,将灭菌后的两类
培养基倒入培养皿中,每皿 15 mL,轻微振荡混匀,
冷却,制成带菌平板。
1.2.4 试验设计 试验设为 6个处理,处理 1至 5
的提取物溶液分别为乙醇提取液、石油醚提取液、
氯仿提取液、乙酸乙酯提取液、丙酮提取液,对照为
无菌水。将已灭菌的滤纸圈(直径 5 mm)分别浸入不
同提取物溶液中 30 min。取出后按照从样品 1到 5
的顺序分别贴于平板上,每个纸片相隔一定间距,以
无菌水作为对照,在平板背面作好相应标记。平板放
入培养箱中,细菌于 37℃恒温培养 24 h,霉菌于
30℃恒温培养 48 h。按时取出,用游标卡尺测定抑菌
圈直径。以抑菌圈直径大于 6 mm 评价为有抑菌作
用,无菌水对照组应无抑制圈产生,所测直径为滤纸
片直径,否则实验无效。各提取液的每项抑菌实验平
行重复 3次,取其平均值作为测定结果。
2 结果与分析
马比木根皮的乙醇提取物的抑菌效果如表 1
所示。为了进一步弄清马比木醇提物中的抑菌成
分主要的富集部位,将醇提取液进行了由低极性
到高极性溶液的系统萃取,依次得到石油醚、氯
仿、乙酸乙酯和丙酮萃取物,并配成同浓度的提取
液进行抑菌试验,其对 9种指示菌的抑制情况如
表 1所示。
表 1显示,马比木提取物对产气杆菌和大肠杆
菌具有较好的抑菌作用。除乙醇提取物对产气杆菌
没有抑制作用外,其余溶剂提取物都有抑制作用;
在 5种提取物中,也只有氯仿提取物和乙酸乙酯提
取物对大肠杆菌没有抑制作用外。马比木提取物对
枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的抗性较弱,而对藤黄
八叠球菌和变形杆菌基本没有抑制作用。
马比木的五种提取物对青霉-2的抑菌效果均
很明显,尤以丙酮提取物最显著。马比木的乙醇提
取物和丙酮提取物对青霉-1 的抑制效果也很显
著,而其他溶剂提取物则无抑菌作用。但是,马比木
表 1 马比木提取物对不同菌种的抑菌作用
供试菌
大肠杆菌(Escherichia coli)
藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)
变形杆菌(Proteus vulgaris)
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
白色链球菌(Candida albicans)
产气杆菌(Bacillus aerogenes)
青霉-1( penicillium sp-1)
黑曲霉(Aspergillus niger)
青霉-2( penicillium sp-2)
抑菌效果
1
+
+
+
-
-
-
++
-
++
2
+
-
-
-
+
+
-
-
++
3
-
-
-
+
+
+
-
-
++
4
-
-
-
+
-
+
-
-
++
5
+
-
-
-
-
+
+++
-
+++
对照
-
-
-
-
-
-
-
-
-
注:“-”表示无抑菌圈;“+”表示抑菌圈直径在 6~10 mm之间;“++”
表示抑菌圈直径在 10~15 mm之间;“+++”表示抑菌圈直径在 15~
20 mm之间。
第 7期 张 丽等:马比木提取物抑菌作用的初步探讨 95
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(上接第 93页)
进行防治。如稻飞虱,可选用 25%噻嗪酮或 20%异
丙威或丁噻虱;防治二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟,
目前防治效果较好的有 20%氯虫苯甲酰胺(康宽)、
阿维·毒死蜱、阿维唑磷、阿维菌素、甲维盐等药剂;
防治纹枯病,选用 25%丙环唑或 20%井冈霉素可湿
性粉剂或纹枯净水剂;防治稻瘟病可选用 75%庄艳
粉剂或 40%富士一号(稻瘟灵)水剂。
采用生物防治,稻鸭生态共育。稻鸭生态共育
有利于减轻病虫发生,调查显示,稻田养鸭期间稻
飞虱密度早稻田可控制在 1.3头/m2,晚稻田可控制
在 1.8头/m2,分别比对照田减少 55.2%和 44.7%;纹
枯病丛发病率降低 14.7%,病情指数降低 4.1%。
参考文献:
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(责任编辑:石 君)
的 5种提取物对曲霉均无抑制作用。总体来说,马
比木提取物对青霉的抑菌效果要比对细菌的抑菌
效果明显。
3 结论与讨论
大肠杆菌常引起食物中毒,产气杆菌引起的气
性坏疽常导致创伤感染,青霉可使许多农副产品腐
烂变质。本实验表明,马比木根皮提取液对它们均
有明显的抑制效果,尤其对青霉-2的抑菌作用显
著。从马比木不同提取液的溶剂极性来看,极性较
强的丙酮和乙醇的提取物其抑菌效果相应增强,这
在对青霉-1的抑制作用中更加明显,推测马比木
的抑菌活性成分主要富集于较高极性溶剂的提取
物中。这类提取物中可能含有生物碱及其盐、有机
酸及其盐、苷类、氨基酸、鞣质和糖类等物质,因为
黄酮类、鞣质和木脂素对抗霉菌具有良好效果[7]。一
些研究表明,许多植物提取液对霉菌的抑制用用较
弱或没有抑制作用[6-8],但本实验的结果证明马比木
提取物对青霉-2具有显著的抑制效果。因此,马比
木在作为抗肿瘤药源植物开发的同时,也可以作为
食品防腐剂、饲料添加剂或动、植物抗传染病药物,
进行研发,以得用资源的综合利用和可持续发展。
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第 7期湖南农业科学96