全 文 ：左旋一叶 碱的代谢转化
李晓海＊ , 张金兰 , 周同惠
(中国医学科学院 、中国协和医科大学药物研究所 , 北京 100050)
摘要:目的　研究一叶 碱[ securinine ,(-)SE] 在大鼠体内外的代谢转化。 方法　采用大鼠肝微粒体体外温孵
法对(-)SE的代谢转化进行了研究 , 优化了代谢体系 , 建立了反相HPLC 法同时分离检测(-)SE 及其体外代谢产物
的分析方法。用液液萃取 ,制备 TLC 及半制备 HPLC 分离纯化了 4 个代谢产物并进行了光谱鉴定。 在此基础上 , 建
立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相 HPLC 分析方法 , 并用该法检测了 ip 给药后大鼠的胆汁 、尿样及其经 β-葡
糖醛酸苷酶水解后的样品。结果　代谢物分别鉴定为 6-位羟基 , 6-位羰基及 5-位α及 β 羟基取代的(-)SE , 还证实
了体内 6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论　基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。
关键词:左旋一叶 碱;肝微粒体体外温孵;药物代谢;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:0513-4870(2002)04-0288-06
　　左旋一叶 碱[(-)securinine , (-)SE] 是从大
戟科植物一叶 (Securinega suffruticosa Rehd.)叶中
提取的一种生物碱 ,为中枢神经兴奋剂 ,临床上主要
用于小儿麻痹后遗症 、面神经麻痹等疾病的治疗 。
现代药理研究表明 ,一叶 碱还具治疗再生障碍性
贫血[ 1] 、抗肿瘤[ 2] 、改善骨髓造血机能[ 3] 、诱导细胞
凋亡[ 4] 和体外抗 HSV-1病毒[ 5] 等活性 ,因此近年来
该药的药理及临床应用研究日益受到重视。本文作
者曾建立了左 、右旋 SE 毛细管电泳手性分离方法 ,
并对其在大鼠体内代谢过程进行了初步研究 ,结果
证实两者在大鼠体内代谢具有立体选择性差异[ 6] 。
姚佩佩等[ 7] 曾用紫外分光光度法测定了(-)SE 在
动物体内的吸收 、分布和排泄 ,并对其体内代谢途径
及代谢产物作了初步研究 ,利用紫外 、红外光谱及化
学衍生方法推测了两个代谢物的结构 ,但缺乏进一
步的光谱确证 ,且受方法限制 ,未能基本阐明代谢途
径。本文为了进一步阐明(-)SE代谢途径 ,用大鼠
肝微粒体温孵法 ,建立了(-)SE及其代谢物同时分
离分析的 RP-HPLC 法 ,并综合运用制备 TLC 、自装
ODS柱预分离及半制备 HPLC 分离纯化了 4个代谢
物 ,通过光谱分析鉴定其结构 ,确定了(-)SE 体外
代谢转化的主要途径 ,进一步考察其在大鼠体内代
谢情况 ,建立了给药后大鼠胆汁及尿液中原型药及
代谢物的分析方法 ,并结合 β-葡糖醛酸苷酶水解实
收稿日期:2001-09-24.
作者简介:李晓海(1970-),男 ,博士研究生.
＊Tel:(010)63165236, 63165309 , E-mail:bodalxh@sohu.com
验 ,证实了结合型代谢物的存在 ,初步比较了其在大
鼠体内外代谢异同 ,为进一步与右旋SE代谢差异比
较奠定了基础。
材 料 与 方 法
药品与试剂　(-)SE由本室周志华教授提供 ,
经HPLC分析含量大于 98.5%,熔点 、比旋度合格 ,
其结构经光谱鉴定 。NADP(氧化型辅酶 II)、NADH
(还原型辅酶 I)、6-磷酸葡萄糖(G-6-P)、6-磷酸葡糖
脱氢酶(G-6-PDH)和 β-葡糖醛酸苷酶均购自美国
Sigma公司;自装 ODS 反相填料(Chromstorex , 100 ～
200目 , Fuji Silysia Chemical Ltd.);其他化学品均为
市售分析纯(北京化学试剂厂);甲醇 、乙腈(色谱
纯),二次重蒸水。
仪器与材料　♂Wistar大鼠 ,体重 220 ～ 250 g ,
由中国医学科学院实验动物中心提供 。液相色谱系
统:Waters 510泵 , Gilson 112 紫外检测器 ,Maximum
820色谱工作站(分析型);兴达 LC-10C 恒流泵 ,SPD-
2A 岛津紫外检测器 , C-R3A 数据记录仪(半制备
型)。半制备色谱柱 Kovasil ODS (5 μm , 25 cm ×
1 cm ID ,北京分析仪器厂填装);1HNMR , 13CNMR在
Bruker AM-500核磁共振仪上测定 ,EI-MS 由VG-ZAB
2F质谱仪测定 。
1　大鼠肝微粒体体外代谢实验
1.1　大鼠肝微粒体的制备及蛋白含量测定 　♂
Wistar大鼠 , ip苯巴比妥生理盐水溶液 60 mg·kg-1 ,
·288· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293
DOI :10.16438/j.0513-4870.2002.04.012
每天 1次 ,连续 3 d。按文献[ 8] 报道的二次离心法制
备肝微粒体 ,混悬于适量 50 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲
液(pH 7.4), -70℃低温冰箱贮存 ,用 Lowry 法测其
蛋白含量[ 9] 。
1.2　肝微粒体体外代谢条件的优化　采用 NADPH
再生系统 ,安排多组实验 ,HPLC测定代谢情况(代谢
率),比较代谢效果 ,以选出较优的代谢体系。操作
步骤:在适量 50 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)
中(冰浴)加入定量的肝微粒体和 NADP ,NADH ,G-6-
P ,G-6-PDH 及MgCl2 后摇匀 ,37℃水浴中振摇 3 min ,
加入定量的(-)SE溶液 ,继续 37℃水浴温孵 ,每 20
min通氧 0.5 min , 1.5 h 后 ,加 10% CCl3COOH 液终
止反应 ,提取处理。对照组(7号)在加入肝微粒体
后 ,沸水浴灭活 ,然后加入其他组成物;对照组(8
号)仅加肝微粒体 ,不灭活;其他操作同样品组 。
1.3　样品制备及代谢物 HPLC 分析 　温孵物用
10%CCl3COOH 0.4 mL终止反应 ,加入适量 Na2SO4
和(NH4)2CO3 调至 pH 9左右 ,乙酸乙酯-异丙醇(95∶
5)混合溶剂 5 mL×3提取 ,合并有机层 ,无水Na2SO4
干燥 , 45℃减压蒸干 , 残留物溶于 1 mL 甲醇 , 供
HPLC分析 。
色谱条件:色谱柱 Hypersil BDS(5 μm , 25 cm ×
4.6 mm ID)(大连依利特公司);流动相为甲醇-乙酸
铵缓冲液(50 mmol·L-1乙酸铵 ,0.05%三乙胺 ,乙酸
调至 pH 6.0)(16∶84);流速 0.7 mL·min-1 ,检测波长
254 nm 。
1.4　代谢物纯品的制备及结构测定　根据 1.1实
验结果 ,选用代谢率较高的样品组 4号的组成条件 ,
扩大代谢规模至1 000 mL ,投入药量 100 mg ,进行体
外温孵实验 , 制备代谢物 。代谢温孵液 , 加适量
10%CCl3COOH终止反应 ,加适量 Na2SO4(约 60 g),
(NH4)2CO 3碱化至 pH 9.0 ,乙酸乙酯-异丙醇等体积
提取 3次 ,合并 ,无水 Na2SO4 干燥后 ,减压浓缩。采
用装填ODS填料的玻柱(1O cm×1 cm ID)预分离纯
化 ,用 10%CH3OH水溶液(0.2%Et3N , pH 6.0)100
mL 梯度减压洗脱 ,每 100 mL 增加 10%CH3OH ,每25
mL 分部收集 。收集液减压蒸除甲醇 ,冷冻干燥 ,甲
醇溶解后进行 HPLC分析 。第 4 ～ 10份含主要代谢
物 ,合并 ,进行半制备 HPLC纯化 。
半制备色谱条件:色谱柱 Kovasil ODS(5 μm ,25
cm×1 cm ID);流动相:乙腈-乙酸铵缓冲液(25
mmol·L-1 ,pH 6.5)(10∶90);流速 3.5 mL·min-1 ,分
别收集 tR 27.6 min(SE-M2), tR 34.1 min(SE-M3), tR
42.7 min(SE-M5), tR 47.2 min(SE-M4)各部分 ,减压
蒸除乙腈 ,冷冻干燥 ,再经 HPLC分离纯化 。代谢物
纯品(色谱纯度大于 96%)作1HNMR , 13CNMR ,EI-MS
及 ESI-MS鉴定结构。
2　大鼠体内代谢实验
2.1　生物样品的收集及处理　♂Wistar大鼠 ,体重
220～ 250 g ,禁食 12 h ,置代谢笼中 ,收集空白尿后 ,
ip(-)SE生理盐水溶液 ,剂量 12.5 mg·kg-1 ,连续 5
次给药 ,每次间隔 3 h ,收集 24 h尿液 , -20℃冰箱保
存 。另取禁食后大鼠 ,乙醚麻醉 ,作胆管插管手术 ,
收集适量空白胆汁后 , ip (-)SE , 剂量 12.5
mg·kg-1 ,给药方法同上 ,收集24 h胆汁 ,置-20℃冰
箱冷存。收集的给药尿 、胆汁及各自的空白样品处
理方法与体外温孵样品相同 。
2.2　生物样品酶水解实验及处理方法　给药尿 、胆
汁适量(尿 20 mL , 胆汁 6 mL), 加 NaAc(浓度 41
mg·mL-1 ,HAc 调至 pH 5.1)和以 pH 5.1 NaAc-HAc
缓冲液溶解的 β-葡糖醛酸苷酶 , 使含酶量达2 500
U·mL-1 ,37℃水浴温孵 24 h;同时取等量给药尿及
胆汁 ,不加酶 ,同样条件下温孵 24 h。样品处理方法
同前。
2.3　生物样品 HPLC 分析条件 　Waters 510 泵 ,
Gilson 112 紫外检测器 , 检测波长 254 nm , Hypersil
BDS柱(5μm ,25 cm×4.6 mm ID ,大连依利特公司),
流动相为乙腈-乙酸铵缓冲液(50 mmol·L-1 NH4Ac ,
0.05%Et3N , HAc 调至 pH 6.5)(12∶88),流速 0.7
mL·min-1 。
2.4　大鼠胆汁中主要代谢物(SE-M5)的纯化制备
　代谢物SE-M5在体外代谢中获得量较少 ,但在体
内代谢胆汁样品中为一主要代谢物 ,为了鉴定结构 ,
SE-M5主要从胆汁样品中纯化制备。胆汁收集及处
理方法同前 。用 TLC 展开 ,展开剂为石油醚-丙酮(5
∶3),SE-M5样品带呈蓝色荧光(254 nm),Dragendorff
试剂显色阴性 ,与原药 、内源杂质分离良好 ,故进行
TLC 分离制备。收集蓝色荧光区硅胶 ,乙酸乙酯提
取 ,减压蒸干 ,再经分析型 HPLC纯化 ,样品液蒸除
甲醇 ,冷冻干燥 ,与体外温孵所得该代谢物合并 ,用
1
HNMR , 13CNMR ,EI-MS及 ESI-MS鉴定结构。
结 果
1　温孵体系的选择
通过比较(-)SE在几种温孵体系的代谢率(表
·289·药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293
1),确定选择 4 号温孵体系组成:微粒体蛋白 4.0
mg·mL-1;G-6-P 10.0 mmol·L-1;G-6-PDH 1.0
U·mL-1;MgCl2 4.0 mmol·L-1;NADP 1.0 mmol·L-1;
NADH 1.5 mmol·L-1;(-)SE 0.1 mg·mL-1 。
Table 1　Incubation systems with rat liver microsomes and cofactors
Group
No.
Microsome
mg·mL-1
NADP
mmol·L -1
NADH
mmol·L-1
G-6-P
mmol·L-1
G-6-PDH
U·mL-1
Mg2+
mmol·L-1
(-)SE
mg·mL-1
1 3.0 1.0 1.5 20.0 2.0 8.0 0.10
2 3.0 1.0 1.5 10.0 1.0 4.0 0.10
3 3.0 1.0 1.5 10.0 1.0 4.0 0.05
4 4.0 1.0 1.5 10.0 1.0 4.0 0.10
5 3.0 2.0 1.5 10.0 1.0 4.0 0.10
6 3.0 1.0 2.0 10.0 1.0 4.0 0.10
7 3.0 1.0 1.5 10.0 1.0 4.0 0.10
8 3.0 - - - - - -
NADP:Oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADH:Reduced nicotinamide adenine dinucleotide;G-6-P:
Glucose-6-phosphate;G-6-PDH:Glucose-6-phosphate dehydrogenase;(-)SE:(-)securinine
2　大鼠肝微粒体温孵物中(-)SE 代谢产物的
HPLC分析
图1是(-)SE体外温孵提取物的 HPLC 图谱 ,
与对照组对比 ,根据 HPLC-DAD(HP 1100系统)检测
分析 ,可以判断图 1 中 tR 为 13.2 , 16.6 , 20.9 , 21.8
min(分别为 SE-M2 , SE-M3 , SE-M5 和 SE-M4)的色谱
峰与(-)SE有相似的紫外图谱 ,可初步判断为(-)
SE的代谢产物。由于原药代谢程度大且受萃取率
低的影响 ,在体外温孵制备代谢物的样品中未检测
到。
Figure 1 　HPLC profile of the metabolites of (-)
securinine in rat liver microsomal incubate.SE-M2 , SE-
M3 , SE-M4 and SE-M5 represent the metabolites
3　(-)SE代谢产物的光谱分析及结构确证
3.1　SE-M2 的光谱分析　SE-M2的 EI-MS 显示分
子离子峰 233(M +),但丰度较弱 , ESI-MS 则给出分
子离子峰 234(M ++1),说明其为(-)SE 的单羟基
化代谢物 , 1HNMR谱与(-)SE比较(表 2),6-H与5-H
位氢的化学位移及偶合类型发生明显变化;13CNMR
谱与(-)SE比较(表 3),原 C-6位信号(δ49.7)位移
至δ70.3 ,根据取代基化学位移规律 ,可判断δ70.3
为羟基取代所致[ (-)SE 1HNMR及13CNMR的信号
归属见文献[ 10] ] 。由于 C-6位羟基取代的影响 ,C-3 ,
C-4 ,C-5的化学位移明显变化 。C-6位氢因羟基取
代向低场位移至δ3.45 ,显多重峰;C-5位氢亦向低
场位移至δ2.37和δ2.98 ,且偶合类型亦明显变化 。
其余氢信号及偶合关系 ,碳信号与(-)SE基本一致
(表 2 ,表 3),可推断 SE-M2 的结构为 6位羟基取代
的一叶 碱 。
3.2　SE-M3的光谱分析 　SE-M3的 EI-MS 显示分
子离子峰为 233(M+),ESI-MS 则给出准分子离子峰
234(M ++1),比原药多质量数 16 ,故可推断其为单
羟基化代谢物 。1HNMR谱与(-)SE比较(表2),6-H
位 1个氢信号稍向低场位移 ,δ3.18 ,呈双二重峰 ,δ
3.64处出现氢信号 ,呈多重峰 ,两者存在偶合关系 ,
偶合常数为 5 Hz ,另外δ3.18处 6-H 位氢信号与δ
2.17处氢信号存在偶合关系 ,偶合常数为 10.2 Hz;
上述偶合关系得到1H-1H COSY谱的进一步证实 ,故
可推断δ3.64处氢信号为 5-H 位氢 ,该位存在羟基
取代;除 4-H 外 ,其他位的氢信号化学位移及偶合关
系无明显变化。一维NOE谱推断 5-H与 H6eq存在空
间接近关系 ,经分子模型推断为 β 位取代 。13CNMR
谱显示δ68.6处出现一连氧碳信号 ,C-3 ,C-4 ,C-6信
号均向低场位移 ,根据取代基位移规律 ,δ68.6处信
号可归属于 C-5 ,综上分析 ,可判断该代谢物为 5β-
羟基取代的(-)SE 。
·290· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293
Table 2　1HNMR data assignment and comparison of(-)securinine and its metabolites
(-)SE SE-M2 SE-M3 SE-M4 SE-M5
H14 6.65 ,d , J=9.2 6.63 , d , J=9.0 6.65, d , J=9.2 6.64 , d , J=9.0 6.72, d , J=8.7
H15 6.47 ,dd , J=5.2;9.2 6.47 , dd , J=5.2;9.0 6.47, dd , J=5.0;9.2 6.46 , dd , J=5.2;9.0 6.68, dd , J=5.5;8.7
H12 5.56 , s 5.58 , s 5.57, s 5.57 , s 5.82, s
H8 H8a:2.41 , dd , J=4.2;9.3 H8a:2.45 , dd , J=4.3;9.2 H8a:2.39 , dd, J=4.5;9.3 H8a:2.56 , dd , J=4.3;9.3 H8a:2.38, dd , J=5.3;10.2
H8b :1.72, d , J=9.3 H8b:1.77 , d , J=9.2 H8b :1.74, d , J=9.3 H8b:1.72 , d , J=9.3 H8b :1.90, d , J=10.2
H7 3.81 , t , J=4.2;5.2 3.82 , t , J=4.3;5.2 3.79, t , J=5.0;4.5 3.78 , t , J=5.0;4.3 5.16, t , J=5.3;5.5
H6 H6eq:2.96 ,dt , J=4.2;10.7 3.45 , m , J=5.0;10.5 H6eq:3.18 ,dd , J=5.0;10.2 H6eq:2.94 ,dq , J=1.5,3.0 ,11.2
H6ax :2.38 ,ddd , J=4.1 , 10.7 H6ax :2.17 , t , J=10.2 H6ax:2.61 , dd , J=2.2;11.2
H5 1.51 ,m H5a:2.98 , ddd, J=5.4;2.8;11 3.64, m , J.5.0 3.73 , t or dd 2.31, m , J=4.0;8.0
H5eq :2.37, dt , J=2.8;11.0;10.5
H4 H4a:1.81 , m H4a:1.83 ,m 1.52, m 1.43 ,m H4a:1.74 , m
H4b :1.21, m H4b:1.48 ,m , J=5.4;11.5 1.81 ,m H4b :1.55, m
H3 1.51 ,m H3ax:1.43 , dd , J=11.4 1.52, m 1.43 ,m 1.91, m
H3eq:1.85 , m , J=2.1;4.2 1.81 ,m
H2 2.10 ,dd , J=3.2;10.9 2.08 , dd , J=2.1;11.8 2.05, dd , J=2.5;11.3 2.15 , dd , J=2.4;11.6 3.49, dd , J=3.4;11.9
Table 3　13CNMR data assignment and comparison
of(-)securinine and its metabolites
Carbon
position
(-)SE SE-M2 SE-M3 SE-M4 SE-M5
C11 175.9 175.9 ND ND 174.2
C13 172.7 172.4 ND 172.6 170.2
C15 142.0 141.9 141.9 142.3 141.4
C14 122.5 122.5 122.5 122.4 123.7
C12 105.7 105.9 105.8 105.8 109.4
C9 91.3 90.8 90.8 91.3 90.7
C2 64.3 61.3 63.6 63.9 60.0
C7 60.2 59.6 59.4 60.1 54.2
C6 49.7 70.3 56.6 56.0 170.8
C8 42.9 43.4 43.5 42.8 40.5
C5 28.1 46.5 68.6 66.4 31.2
C3 26.7 36.2 27.0 23.8 26.1
C4 25.3 37.2 35.1 32.7 20.4
ND:The chemical shift signals of carbon 11 and carbon 13 were
not detected due to their low quantity
3.3　SE-M4 的光谱分析　SE-M4的 EI-MS 显示分
子离子峰 233(M +), ESI-MS 则给出准分子离子峰
234(M ++1),说明其为(-)SE的单羟基化代谢物 ,
1
HNMR谱与(-)SE比较(表2),出现δ3.73处信号 ,
呈多重峰 , 1H-1H COSY 谱显示该位氢与 δ:2.94 ,
2.61处氢相关 ,而δ2.94氢与 δ2.61 氢呈相关关
系 ,归属为 6-H , 故 δ3.73 氢信号可归属为 5-H;
13
CNMR谱显示δ66.4处出现一连氧碳信号 , C-3 ,C-
4 ,C-6 化学位移亦产生相应变化 ,根据取代基位移
规律 ,δ66.4处信号可归属为 C-5。综上分析 ,该代
谢物为 SE-M3的异构体 ,即 5α-位羟基取代的(-)
SE 。
3.4　SE-M5 的光谱分析　SE-M5的 EI-MS 显示分
子离子峰 231(M+),但丰度极低 , ESI-MS 则给出准
分子离子峰 232(M ++1),比原药多质量数 14 ,故可
推断其为羰基化代谢物 。1HNMR谱与(-)SE比较
(表 2),12-H ,14-H ,15-H 均向低场位移 , 7-H化学位
移明显移至低场δ5.16 , 6-H 的信号消失 ,2-H 化学
位移向低场移至δ3.49;13CNMR谱与(-)SE 比较
(表 3),C-6的信号消失 ,δ170.8处出现一季碳吸收
信号 ,其他碳信号均发生不同程度的变化 ,但差异
小 。综合以上分析 ,可推断该代谢物为 6-羰基取代
(-)SE。
　　综上所述 ,(-)SE通过体外代谢 ,主要转化为
6-羟基一叶 碱 , 6-羰基一叶 碱 , 5α-羟基及 5β-羟
基一叶 碱 。上述代谢物及(-)SE的 EI-MS 数据
见表4 。
Table 4 　EI-MS data for (-)securinine and its
metabalites
(-)SE
Peak(m z)
SE-M2
Peak(m z)
SE-M3
Peak(m z)
SE-M4
Peak(m z)
SE-M5
Peak(m z)
217 233 233 233 231
84 100 100 100 98
82 82 82
134 134 134 134 134
106 106 106 106 106
78 78 78 78 78
3.5　体内结合型代谢物实验确证　用 HPLC 法对
比分析测定经 β-葡糖醛酸苷酶(有硫酸酯酶活性)水
解的胆汁样品及未水解的对照样品 ,由图 2可见 ,水
解后的胆汁样品中代谢物 SE-M2的量明显增加 ,证
实体内代谢物SE-M2可进一步形成葡糖醛酸或硫
·291·药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293
Figure 2　Comparative chromatograms of enzymatic hydrolyzed bile (A)and unhydrolyzed bile samples(B)
酸型结合物。
3.6　(-)SE大鼠体内外代谢的比较　通过对比给
药后尿样(图 3)、空白尿样以及体外温孵样品的
HPLC图 ,并与获得的代谢物纯品的色谱图对比 ,可
知(-)SE在大鼠体内外代谢的差别:(-)SE 在大
鼠体内亦可形成 SE-M2 ,M3 ,M4 ,M5等代谢物 ,其中
SE-M2可进一步形成结合型代谢物(见 3.5)。体内
代谢形成的代谢物以 SE-M5为主 ,而在体外代谢则
以SE-M2为主(从峰面积百分比可知)。
　　综上所述 ,(-)SE在大鼠体内外代谢基本途径
如图 4所示 。 Figure 3 　 Chromatogram of urine sample from ip
administrated rats
Figure 4　The proposed metabolic pathway of(-)securinine in vitro and in vivo
讨 论
本实验通过对(-)SE体外代谢转化的研究 ,阐
明了其主要代谢物的结构 ,并在此基础上进行了体
内代谢转化的研究 ,证实了体内 SE-M2进一步形成
结合型代谢物 ,比较了体内外代谢的异同 ,为深入研
究(-)SE 大鼠体内代谢 ,掌握其代谢规律奠定了基
础 ,这将有益于(-)SE药理活性及其毒性机制的阐
明 。通过对(-)SE的代谢研究 ,表明这种由体外代
谢研究为基础进而进行体内代谢研究的途径较合
理 、简捷 ,可适于解决较复杂的药物代谢问题 ,尤其
在中草药有效成分代谢研究中其合理性 、优越性更
·292· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293
为显著 。在体内代谢研究中 ,(-)SE可形成 2 ～ 3
个极性较大 、保留时间短的微量代谢物 ,其结构有待
进一步确证 ,从而获得(-)SE更为详尽的代谢转化
全貌 。
致谢:原药及代谢物的光谱测定由本所仪器分析室代
测;ESI-MS 由中国军事医学科学院代测。
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THE METABOLIC TRANSFORMATION OF (-)-SECURININE
LI Xiao-hai , ZHANG Jin-lin , ZHOU Tong-hui
(Institute of Materia Medica , Chinese Academy of Medical Sciences and
Peking Union Medical College , Beijing 100050 , China)
ABSTRACT:AIM　To study the in vitro and in vivo metabolism of (-)-securinine.METHODS 　The
metabolic transformation of (-)-securinine was studied by using phenobarbital-induced rat liver microsomal incubate
containing the NADPH-generating system in vitro and the constitution of the system was optimized.A reversed phase
HPLC method was established to analyze the parent drug and its metabolites.The major metabolites were isolated and
purified by liquid-liquid extraction , preparative TLC and HPLC , and their structures were elucidated as 6-hydroxyl
securinine, 6-carbonyl securinine , 5β-hydroxyl securinine and 5α-hydroxyl securinine by 1HNMR , 13CNMR and MS
spectral analysis.An HPLC method was developed to analyze securinine and its metabolites in biofluids(bile , urine)of
rat.The bile , urine and their enzymatic hydrolyzed samples of the rat ip administrated with (-)-securinine were
determined by using this method.RESULTS 　Four main metabolites of (-)-securinine in rat hepatic microsome
incubation were obtained and their structures were elucidated.Metabolites from in vitro study were confirmed in biofluids
(bile , urine)which were collected from rats given securinine ip.It was suggested that 6-hydroxyl securininewas excreted
in conjugated form as well by analyzing enzymatic hydrolyzed bile.CONCLUSION　The main metabolic pathway of
(-)-securinine in vitro and in vivo is basically elucidated.
KEYWORDS:(-)-securinine;liver microsome incubation;drug metabolism;HPLC
·293·药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2002 , 37(4):288-293