全 文 ：收稿日期:2015 － 11 － 18;修回日期:2016 － 07 － 18
基金项目:海南大学中西部计划学科重点领域建设项目(ZXB-
JH － XK002)
作者简介:姜亚磊(1990 － )，男，硕士研究生，研究方向为动
物药理，462726238@ qq． com．
通信作者:王金花(1979 － )，女，副教授，博士，研究方向为
动物医学，505448533@ qq． com．
九里香不同溶剂提取物对白纹伊蚊幼虫
的毒杀活性研究
姜亚磊，李欣雨，陈小军，杨雨辉，王学梅，王金花
(海南大学 农学院，海口 570228)
中图分类号:S853． 9 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2016)10 － 0170 － 03
关键词:九里香;不同溶剂提取物;白纹伊蚊幼虫;毒杀活性;浸液法
摘 要:为了研究九里香不同溶剂提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀作用，试验采用浸液法测定了九里香
乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水煎煮提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀活性。结果表明:九里香的乙酸
乙酯提取物、乙醇提取物和水煎煮提取物对白纹伊蚊幼虫处理 24 h 的半数致死浓度(LC50)分别为
5． 079 mg /mL、6． 531 mg /mL、17． 445 mg /mL。说明九里香不同溶剂提取物对白纹伊蚊幼虫均具有一
定的杀灭作用，且以乙酸乙酯提取物效果最佳，乙醇提取物次之，水煎煮提取物效果相对较差。
九里香(Murraya exotica L．)属芸香科 (Ｒutace-
ae)九里香属植物，因其散发着浓烈的香气，远距离
可嗅其芳香，故名为九里香，是一种常用的民间中药，
具有抗菌、消炎镇痛的作用。F． S． El － Sakhawy 等对
九里香挥发油的抗菌能力进行研究发现，九里香挥发
油对白色念珠菌表现出很强的抗菌活性，对大肠杆
菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及藤黄八叠球
菌也有一定的抗菌作用。L． H． Wu 等［1］以小鼠为模
型动物，研究了九里香乙醇提取物的消炎镇痛作用，
结果表明其 70%乙醇提取物能有效地抑制二甲苯致
耳肿胀和角叉菜胶致脚肿胀。现代药理学研究结果
表明该植物亦具有较强的杀虫作用，W． Q． Li 等［2］研
究发现九里香地上部分具有杀虫活性，能够杀死玉米
象虫(Sitophilus zeamais)和赤拟谷盗虫(Tribolium cas-
taneum)。卢远倩［3］采用生物活性追踪和化学分离相
结合的方法研究发现，九里香氯仿萃取物对家蝇
(Musca domestica)成虫、斜纹夜蛾(Predenia litura)、
萝卜蚜(Kaltenbach)、椰心叶甲(Brontispa longissima)
均有不同程度的杀灭作用。但目前有关九里香提取
物对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒杀作用却鲜有报
道。为进一步完善九里香的杀虫作用，本试验研究了
九里香不同溶剂提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀活性，
旨在为开发海南九里香植物资源，研制新型植物源型
杀虫剂提供理论基础。
1 材料
1． 1 供试植物
九里香果期(9—12 月)枝叶，采自海南省儋州
市，经海南大学植物学教授杨小波鉴定后确认。
1． 2 供试蚊
白纹伊蚊受精卵，由海南大学农学院热带动物医
学与媒介生物学实验室提供，经室内饲养，试验选取
大小一致，健康状况良好的 3 日龄幼虫。
2 方法
2． 1 药物样品提取方法
2． 1． 1 水煎煮提取法 在 60℃的烘干箱中，将剪碎
的九里香茎、叶烘干;固液比为 1∶10(即九里香 100 g、
纯化水 1 000 mL)于砂锅中，文火煮沸 30 min，抽滤
收集滤液;回收滤渣，加入纯化水 1 000 mL，重复上述
操作，提取抽滤 3 次，合并滤液;加热，蒸发浓缩至
100 mL，即得到的母液浓度为 1 g /mL。
2． 1． 2 有机溶剂提取法 将烘干后的九里香粉碎，
过 80 目筛;固液比为 1∶10(即九里香粉末 100 g、无水
乙醇或乙酸乙酯 1 000 mL)于锥形瓶中，密封，60 ℃
水浴加热 30 min，抽滤收集滤液;回收滤渣，加入无水
乙醇或乙酸乙酯 1 000 mL。重复上述操作，提取抽滤
3 次，合并滤液;用旋转蒸发仪在 60℃下减压浓缩至
浸膏重量不再变化，加入 100 mL的二甲基亚砜，稀释
成 1 g /mL的母液。
2． 2 药物样品配制
采用倍比稀释法，用去氯水将九里香提取物母液
(1 g /mL)稀释 20 倍、40 倍、80 倍、160 倍、320 倍、
·071·
2016(10 下):170 － 172
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.1909
640 倍，即浓度梯度分别为:50． 00 mg/mL、25． 00 mg/mL、
12． 50 mg /mL、6． 25 mg /mL、3． 13 mg /mL、1． 56 mg /mL
进行蚊幼毒杀试验。
2． 3 浸液法
采用世界卫生组织(WHO)推荐的浸液法测定九
里香提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀活性［4］。毒杀过
程在培养皿中进行，每个培养皿加入待测液 50 mL，
每个样品各浓度分别加入白纹伊蚊 3 日龄幼虫
30 只，重复 3 次，放入温度为(24 ± 1)℃的蚊虫饲养
室。水煎煮提取组以纯化水为对照;有机溶剂提取组
每个浓度以相应体积分数二甲基亚砜为对照。分别
于接虫后第 24 小时检查并记录死亡数，计算死亡率、
校正死亡率。死亡率(%)=(死亡虫数 /总虫数)×
100%;校正死亡率(%)=(处理组死亡率 －对照组
死亡率)/(1 －对照组死亡率)× 100%。
2． 4 数据的统计分析
所得试验结果用 SPSS 17． 0 软件进行分析，对毒
杀结果进行配对 t 检验，试验结果以“平均数 ±标准
差”表示;计算得出毒力回归方程、半致死浓度
(LC50)和相关系数。
3 结果与分析
3． 1 九里香不同提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀作用
见表 1。
表 1 九里香不同提取物对白纹伊蚊幼虫的毒杀作用 %
浓度 /
(mg·mL －1)
校正死亡率
乙醇提取物 乙酸乙酯提取物 水煎煮提取物
50． 00 100． 0Aa ± 0． 0 100． 0Aa ± 0． 0 100． 0Aa ± 0． 0
25． 00 98． 8Aa ± 1． 9 100． 0Aa ± 0． 0 58． 9Bb ± 5． 1
12． 50 84． 4Aa ± 5． 1 94． 4Ab ± 3． 9 32． 2Ac ± 10． 2
6． 25 46． 7Aa ± 10． 0 58． 9Ab ± 13． 9 12． 2Ac ± 3． 9
3． 13 16． 7Aa ± 8． 8 22． 2Ab ± 6． 9 1． 1Ac ± 1． 9
1． 56 1． 1Aa ± 1． 9 1． 1Aa ± 1． 9 0． 0Aa ± 0． 0
注:同行数据肩标大小写字母均不同表示差异极显著(P ＜
0． 01)，大写字母相同小写字母不同表示差异显著(P ＜ 0． 05)，字母完
全相同表示差异不显著(P ＞ 0． 05)。
从表 1 可知:3 日龄白纹伊蚊幼虫在药物样品中
处理 24 h后，乙醇提取物、乙酸乙酯提取物及水煎煮
提取物对白纹伊蚊幼虫的校正死亡率均随着药物浓
度的降低而逐渐减小。从三者校正死亡率两两进行
配对 t检验的结果可以看出:乙醇提取物和乙酸乙酯
提取物在高浓度 50． 00 mg /mL、25． 00 mg /mL以及低
浓度 1． 56 mg /mL 时差异不显著(P ＞ 0． 05)，在
12． 50 mg /mL、6． 25mg /mL、3． 13 mg /mL 时差异显著
(P ＜ 0． 05)。乙醇提取物、乙酸乙酯提取物分别与水
煎煮提取物相比，在高浓度 50． 00 mg /mL 及低浓度
1． 56 mg /mL 时均差异不显著 (P ＞ 0． 05)，在
25． 00 mg /mL 时 差 异 极 显 著 (P ＜ 0． 01)，在
12． 50 mg /mL、6． 25mg /mL、3． 13 mg /mL 时均差异显
著(P ＜ 0． 05)。
3． 2 九里香提取物对白纹伊蚊幼虫处理 24 h 的毒
力回归方程、LC50和相关系数
见表 2。
表 2 九里香提取物对白纹伊蚊幼虫处理 24 h的
毒力回归方程、LC50值和相关系数
提取方法 毒力回归方程
LC50 /
(mg·mL －1)
相关
系数
乙醇提取法 Y =3． 891X － 3． 171 6． 531 0． 796
乙酸乙酯提取法 Y =4． 601X － 3． 247 5． 079 0． 719
水煎煮提取法 Y =3． 494X － 4． 338 17． 445 0． 991
由表 2 可知:九里香枝叶乙醇提取物、乙酸乙酯
提取物和水煎煮提取物对 3 日龄埃及伊蚊幼虫均具
有一定的毒杀作用。其中水煎煮提取物对白纹伊蚊
3 日龄幼虫处理 24 h的 LC50为 17． 445 mg /mL;乙醇、
乙酸 乙 酯 提 取 物 处 理 24 h 的 LC50 分 别 为
6． 531 mg /mL、5． 079 mg /mL，毒杀效果相对较好。
4 讨论
白纹伊蚊起源于亚洲，故又名为“亚洲虎蚊”，与
埃及伊蚊(Aedes aegypti)同为登革热的主要传播媒
介。后者主要分布于热带、亚热带地区;而与之相比，
白纹伊蚊则纵跨热带、亚热带及温带，分布广泛，是
ISSG(Invasive Species Specialist Group)列出的全球
100 种恶性扩散的物种之一［5］。同时其具有活动季
节长的特性，大大增加了其传播登革热等疾病的风险
性［6］。目前对于白纹伊蚊的防治仍以化学农药为
主，但由于长期大量不合理的使用，一方面导致其抗
药性显著增加。有关调查结果表明，2002 年广东省
几个城市的白纹伊蚊幼虫对敌敌畏产生了 5 ～ 10 倍
抗性;中国疾病预防控制中心(CDC)传染病预防控
制所 2009 年研究结果表明，北京、青岛、郑州、海口等
城市白纹伊蚊对溴氰菊酯产生了 3 ～ 12 倍的抗性［7］。
另一方面残留农药造成了严重的环境污染。因此，寻
求有效防治蚊虫且环境污染小的新型杀虫剂已迫在
眉睫。植物源性提取物和植物精油因含有丰富的对
蚊虫具有驱灭作用的生物活性物质，且对环境污染
小、对人体相对安全［8］，从而备受国内外药物科研工
作者的关注。
九里香作为植物源性药物的典型代表，其低危害
性天然杀虫剂的地位日益突出。除 W． Q． Li等［2］、卢
远倩［3］研究发现的杀虫活性外，O． P． Tiwari 等将 3%
的九里香丙酮提取液局部作用于致倦库蚊(Culex
quinquefasciatus)3 日龄幼虫，会导致其 100%的死亡
率，随着丙酮提取液浓度的降低，幼虫死亡率减小。
S． Kishnamoorthy 等［9］研究结果表明，九里香叶挥发
油对埃及伊蚊、斯氏按蚊(Anopheles stephensi)、致倦
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№． 10，2016
库蚊均表现出不同程度的杀灭能力。本研究则测定
了九里香不同溶剂提取物对白纹伊蚊 3 日龄幼虫的
毒杀活性，其校正死亡率、LC50结果表明:在中、高浓
度时，乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、水煎煮提取物对
白纹伊蚊 3 日龄幼虫均具有一定的杀灭作用，其中乙
酸乙酯提取物毒杀效果最佳，24 h 的 LC50 为
5． 079 mg /mL;乙 醇 提 取 物 效 果 次 之，LC50 为
6． 531 mg /mL;水煎煮提取物效果最差，LC50 为
17． 445 mg /mL。
九里香枝叶的乙醇、乙酸乙酯、水煎煮提取物对
白纹伊蚊幼虫均具有杀灭作用，其杀灭效果的差异应
归因于在不同提取条件下所得提取物毒杀成分含量
的不同，故需要进一步探究。
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(021
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大肠杆菌和乙型伤寒沙门氏菌均表现为中敏，并且随
着浓度增高，抑菌圈有所增大。
4 讨论
艾草是药食同源的中药材，历史悠久。《本草纲
目》记载:艾以叶入药，性温、味苦、无毒、纯阳之性，
通十二经，具回阳、理气血、逐湿寒、止血安胎等功效，
亦常用于针灸，有通经活络，祛除阴寒，消肿散结，回
阳救逆等作用。现代药理发现，艾叶挥发油含量多，
其中 1，8 －桉叶素占 50%以上，同时含有 α －侧柏
酮、倍半萜烯醇及其酯。风干叶含矿物质 10． 13%、
脂肪 2． 59%、蛋白质 25． 85%，以及维生素 A、
维生素 B1、维生素 B2、维生素 C 等。因此，艾叶既可
作为畜禽饲料又可作为饲料添加剂，减少疾病的发
生，增强畜禽体质，提高畜产品质量。
艾叶水提液对 3 种细菌均有不同程度的抑制作
用。3 种细菌比较，艾叶水提液对金黄色葡萄球菌的
抑菌效果略优于大肠杆菌和乙型伤寒沙门氏菌，且均
随药物浓度的升高而有所增强。3 种细菌的 MIC 均
为 0． 125 g /mL。体外抑菌试验所观察到的仅是中草
药中某些抑菌成分对细菌的直接抑制作用［8］，一些
抗菌活性在体外抑菌试验中显示不出或不强，但在体
内却有较好的抗感染效果，有待于进一步研究。
中草药抑菌活性成分有多种提取方法。在本试
验中艾叶采用的提取方法为水提，此法制作简单，易
操作，药液容易保存，较适合用于养殖生产实践中。
以水作溶剂提取有效成分，可能会损失某些非水溶性
有效成分。另外，加热浓缩时间过长也会损失某些挥
发性有效成分，从而影响到其抑菌效果，故需要进一
步探索和比较不同提取及浓缩方法对其抑菌效果的
影响，以期最大限度发挥中草药的抑菌作用。长期使
用抗生素带来的药物残留、毒副作用、环境污染、耐药
性的产生及破坏机体的微生态平衡等一系列的问题，
是当前亟需解决的。中草药多系天然物品，富含多种
营养成分和天然化学成分，例如维生素、矿物质、微量
元素等，具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫调节、补充营
养、提高生产性能等作用，取材方便、经济，具有西药
所无法比拟的优势。因此，开发中草药并用于养殖生
产实践中是今后发展的方向。
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总第 512 期