全 文 ：第二军 医大学学 报 1 9 8 7年第 8卷第 1 期
小扁豆凝集素的制备和鉴定
周卓轮 洪 永福 吴丽 霞 江 贞仪 宋文萍 (药学系中两药研究宁 )
提要 从国产小扁豆 (eL n s 。 ul i an r i : )中分得了小扁豆凝集素 , 并用多种方法进行了质量鉴定 包括 聚 丙
烯乱胺凝胶电泳 、 亲和免疫电泳自显影 、 红细胞凝集试验 、糖的专特性试验 , 并用 s D s聚丙烯酞胺凝胶电泳
法测定了其半数分子垦 。 此外还测 之了制品的蛋白质 、 糖及钙 、 锰离子含量 。 本制品已用于甲哈于自 异质
休分型检测以早期诊断原发性肝细胞癌 , 效果良好 。
关键词 小扁豆凝集素 ; 肝癌早期诊断
小扁豆凝集 素 ( L e nt il L ec it n ; L c A ) 是 以往国内所用 cL A 依靠进 口 , 价 格 昂
从豆科 ( eL g u m in os ae )植物小扁豆 (兵豆 eL sn 贵 , 影响 了对它的应用和研究 。
c u l i n a r i s M e d i e
. 或 L . e s e u l e n t a M o e n e h . ) 我们用国产小扁豆制得 L e A , 经理化禁
的种子中提得的一种植物 糖 蛋 白 , 1 9 0 .8 年 定并与国外产品对比 ,证明性质稳定 ,质量符
首次发现此凝集素的存在 , 对它的提纯及基 合要求 。 . 我校长海医院肝胆外科 , , · 8] 用本声
本性质的研究则集中于 70 年代 1 一 4] 。 研究 表 品 , 采用 cL A 亲和交叉免疫自显影法 , 检溅
明 L o A 实为两个性质相似 的 is ol ec it (n 称为 原发性肝癌和良性肝病患者之甲胎蛋 白异质
cL H
一
A 和 L c H 一 B )的混合物 , 二者分子量相 体 , 并建立了诊断指标 , 证明其灵敏性和准
近 (钓 。0 士 1 0 0。 , 另一说为 42 0 0 0 ) , 氨基 确性均明显优于单纯检测甲胎蛋白浓度的方
酸组成亦相似 , 仅有若干数量上的小差别 。 法 。
cL H
一
A 和 L c H 一 B 均 由两条相同的多 肤 现将制备 cL A 的简要流程及产 品 的 质
链结合而成 , 在 一定条件下可分解和复聚 , 量鉴定结果报告于下 :
在某些条件下则可进一步分解为大小不等的 一 、 制备流程 : 小扁豆用 。 . 8 % N a CI 液
两个亚基 , 同时失去所结合的锰离子 ,此反应 浸泡 , 高速搅切呈浆状物 ,取高速离心后之上
是不可逆的 。 上述两个亚基的结构与单链型 清液 ,用硫酸馁分级沉淀 ,取 始 ~ 2 / 3饱 和 度
的 C o n A 有一定的相似性 。 这也可说明 L c A 时的沉淀物 , 用 T ir s 缓冲液 (P H S , 3) 滚 解 ,
与 C o n A 二者在与糖结合的专特性方 面 基 经透析后 , 用 D E A E 52 纤维素柱 层析 , T ir s
本一致 。 液眯脱 , 紫外检测 , 洗脱液反复超滤水洗 ,
凝集素类一般有多方面的活性 , 它们在 其浓缩液经冰冻干燥即为成品 。
细胞生物学和免疫学研究 中是一类有用的工 二 、 质量鉴定 :
具 。 据文献报告 , cL A 在小鼠异体植皮与心脏 (一 ) 醋酸纤维素薄膜 电泳 : 丽春 红 染
移植实验中均显示较好的抗排斥作用 .s[ “ 〕, 近 色呈单一色带 , 与 P h ar m ac ia 产品相 同。
年文献还指出 , cL A 能有选择地与部分 甲胎 (二 ) 聚丙烯酞胺凝胶 电泳 : 分离 胶 浓
蛋白异质体 ( a 一 f e t o p r o t e i n V a r i a n t s )结合 , 度 7 . 5% , p l l s . 3 T r i s 甘氨酸缓冲液 。 上 样
故能用于 甲胎蛋白异质体的分型检测 , 从而 量 10 。一 15 。昭 , 以电流 s m A /管 , 电泳 劝 。
有助于对原发性肝细胞癌进行早期诊断 。 用考马斯亮蓝 R 一 2 50 染色 , 结果呈现 一条 l丁
2 7
要色带 〔应为 H c LB )和 一条次要 色带 (应 为 L“ A,与对 照品Bo ehr,ng r产品一致 n n
比Sig m产品 之清晰度 好 1 1 1 1另 用含琉 基乙醇的 SD聚丙 烯酞胺凝 胶 了 ! 了 l电泳 分离胶 浓75 %02M pH7 4的 2 犷 I
降酸盐 缓冲液 上样量 10林g 以电流4 mA 1 1 12 1 1/管 电泳17h 3用法 显色出 现一条 主 。 / l 八少 、
要色带 与Si gm产品 相同后 者弱色带 稍 一 、一多鄂一井{卜严 少2扮 几然护 ’钾丫邑沙 于份黑 让法 试验 结果甘露 糖甲贰和 甘露糖 分别在1~5竹 为同一次 电泳的结果 8~1。为另 一次电泳 的结 自价秘 曰 叼~ 一1几 312咚/m 和能印g /叫时即 能抑制血 凝,葡
三` ,亲和 免疫电泳 本品经 甲胎蛋 白萄 糖与蔗 糖在250 09/m毛时 能抑制 血凝而异质体 抗胰蛋 白酶表 型`AT Phen`y 半 乳岩 藻御 。阔 ml时仍 砂`钊eS)亲和 免咸 (双thJ) 实验与 Bori g血 凝作用 此与Si g产品 之规格删
er产品 对照结 果一致 (图23) (六) 钙锰离 子的含 量测定用 原子吸收 光谱法测 定结果 C“ 为。1 %Mn
八 八 含 量为07 一0昭 %此与 sigm产 品的规/ } /} 格 (ea 8,n 09 基本一致
{ ! 了 } (匕) 蛋白质含 量测定 用双缩 睬法测Z } ! 宁 以牛血 清 白为标准 结果 本品的了 认 / l 蛋 白质含 量为牛 血清 蛋白的 10一
/ 、 / \ 10 85% 用半微量 凯氏定 氮法测定 按氮一 \ 了 含 量16 川折算 本品的 蛋白质含 量为9 02一9 80% 3批样 的结 果见
!: 2甲胎蛋自 异质体与 LA的亲和 交叉免疫: 泳衷 1显影( ,自制品 2Boehring 产品) ()劝 含糖量的 测定采 用苯酚一 硫酸
(四 )红细 胞凝集试 验将人 的A型 新法 [91用葡 萄糖为参 照物作 标准曲线 (图4)鲜红细 胞洗净 用o01M pH68 磷酸盐 缓测 得本品的 含量 (葡萄糖相 当量)为 172~
冲液配 JjR4%浓 度分别 与等量倍 比稀释 的1 80%3 批样品的 测定结 果见表2Lc州0 01MpH 68磷酸 盐缓冲液 在v形 孔 (九) 分子量测 用 SD聚丙 烯酞胺
2 8
-
表 1 Lc A的蛋 白质含纽测定未
方 法 批 号 含量 (% ) ’ 标准差 (% ) 变异系 数
双缩脉法 : X1 1 0 . 0士 0 .7 8 0 . 86
X1 1 0 8
.
5 土 0 .7 么 o .c 6
X l1 0 2
.
4士 0 .3 8` 。 .3 7
别 L氏定氮法 : X9 6 . 2士 0 .31 0 .1 4
X1 9 8
.
8 0土 0 .1 0 0, 1 1
`
X ! 9 6
.
9 9 士 0 . 1 6 0 . 16
. 双缩脉法为共 次平均值 , 定氮法为 四 次平均值。
0
.
9
0
.
5
我们的 L c A 样品经测 试 3 个批 号 ( X , x l ,
X 亚 )迁移率完全相同 ,按图 5 折算其分 子量
约为 2 30 0 0 ,应是 cL A的半数分子量 。 此结果
与 H o w a r d [` ]的报告相符 。
凸ù吸收度
ǎ! .O工xà芝/
/
~ 曰卜 . - - -~ ~ 山~~ ~ - - - -` ~ ~ ~ ~ ~~ 响 j ~中~ ~~ ~ 话 - - 汕 一I U 6 0 一 0 1! 0浓度 ( r )
图 4 D 一苟萄精的标准曲线 ( 直线回 归方程
Y 二 0
.
0 1 O5 x + 0
.
0 2 6
, r = 0
.
9 9 8 9 )
表 2 . L c A 中的糖含最测定 .
批号 样 品液 浓度
( m g /m l )
吸 收度含 录
r u g )
制品中含最 ( % )
X
X I
X I
2
.
4 8
2
.
3 1
1
。
8 0
口. 4 6 1
0
.
4 4 7
0
.
3 2 7
4 3
。
6 0
4 2
。
3 2
3 0
。
9 0
1
。
7 n
1
。 吕2
1
。
7 2
I L
_ _ : _ _ , _
_ _
」 _ _ _ 、 , _ _
下
_
_
0 0
.
2 0
.
4 0
.
6 0
.
8 1
.
0
. 每批样品同时做 3 份 。
凝胶 (含琉基 乙醇 ) 电泳法 , 以牛 血 清 白蛋
白 , 卵清蛋 白 , 猪胰蛋白酶和细胞色素 c 等
标准品为参照物 。 上样量 30 卜`g , 分离胶浓度
1 0 %
, o
.
I M磷酸盐缓 冲 液 (含 s n s o 一 % ,
p H 7
.
2)
。 以电流 s m A /管 , 电泳 4 h , 考马斯
蓝 R 一 2 50 染色 。 实验表明 , 各标准蛋 白质的
分子量对数与其迁移率呈线性关 系 ( 图 5 ) ,
迁移率
标准品
牛血清 白蛋自
卵清蛋 白
猪胰蛋白酶
细胞色素 C
分子是
6 7 0 0 0
4弓0 0 0
2 4 0 0 0
1 3 3 7 0
图 5 . 在 S D S 聚丙烯酞胺凝胶 电泳中蛋 自
质分子量与迁移率的关系 ( A 二 L c A 、
·
9 2
。
(上海市肿瘤研究所 、 本校生化教 研 室
任建新同志和本系朝晖 药厂 王秀钧同志协助
进行部分工作 , 谨表谢忱 )
参 考 文 献
2
.
H o w
a r d I K
, e t a l
.
S 亡u d i e s o n a p h y 建o h e m -
a g g i u t i n in f r o m t h e l e n t i l
.
J B i o l C h e m 1 9 7 1
2 4 6 : 6 )
:
1 9 5 0
-
2 ; F o r ie r s A
, e t a l
.
T h e s tr u e t u r e o f t h e l e
-
n t i l ( L e n s e u l i n a r i s )吸e e t in . J B i o e h e m 1 9 8 1 -
2 5以 1 1 ) 5 5 5 0 .
3
.
T i e h a M
, e t a l
.
I s o la t i o n a n d e h a r a e t e r i z a t
-
i o n o f a h e m a g g l u t in i n t r o m l e n t i l ( L e n s
e s e u l e n t a 一 B i o c h e m B i o P h y s A e ta 1 9 7 0 ,
2 3 1
告
2吕2 。
4
.
F l i e g e r o v a o
, e t a l
.
S u b u n i t ` t r u e tu r e o f
Ic n t i l i s o P h y t o h e m a g g l u t in i n B i o e b e m B i o
J
、
.
p h y s A
c t a 1 9 7生 , 3弓 l : 4 T(、 .
污. H i l g e r t l , e t a l . L e n t i l l e e t i n e f f e e t i v e又y
In d u e e s a l l o 扮a n s P l a n 忿a 廷i o n 亡。盈e f a n e c i n
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N a灿 r e 1 9 8 0 , 2 8 4 : 2 7 3 .
6
.
1川 g e r t l , e t a l . I n d u e t l o n o f s k 立n a 一l d h e -
a r t a 一l o g r a f t t o l e : a n e e in a d u l t m i e e b y
le n t i l I e e t i n 亡r e a 亡m e n t T r a n s P l a n t P r o e
1 9 8 3 ; 1 5 ( 1
,
B o o k l )
:
5 7 8
.
7
. 青柳丰 , 他原发性肝癌由来 扫止邵 良性肝疾 忠 由
米 7 沙 7 了 7 于 卜了 口 于 汀 夕 。 糖锁特异 ’比 l乙关
寸石研究临床病理 1 9 8 3 ; 叙 : 1 2肠 .
8
. 屠振兴 , 等 。 A F P异质体对原 发性肝细胞痛的早
期诊断 价值 , 中华 内科学杂 志 1 9 8 6 , 2以 5 ) : 2 72 .
0
.
D u b
o i s M
, e t a l
.
C o ! o r i m e t r i e m
e t h o d f o r
d e t e r m i n
a t i o n o f s u g a r s a n d r e la t e d s u b 3 亡a -
n e e s A n a l y t C h e m 1 9 5 6
; 2 8 ( 3 )
,
35 0
.
( 1 0 8 6年 4月 2 5 日收 搞 , 1 9 8 6绪二1 1月 1生日修 回 )
、 心、 作 . ` 、 . ` 内` 内、 、 、 、 , 产妇阳 , 、 沪 、 , 、 , 、 产、 . `产、 产` 八` 、 产、 月叼、 、 , 护、 闷如产` 、 气“ 、 产、 , 曰、 产、产“ 、沪、 , 创、 产 、 , ` 月 , 尸甲、 内` 、 气“ 、护 、 、 、 . 、 , ` 月` 产、 r 、 户. . 沪`内 . 八` 、了、 、 了叼 、 户 、 月 沪 抽、 棍产 副、 、 喃 、 、 沁 、曰`砰侧如 、 `
脑卒中、 高血压及健康成人结膜微循环变化的研究
(史荫绵 , 等 。 上海医学 1 9 8 6 ; 9 (一。 ) : 5 8 7一 5 5 9 )
本文报道脑卒中 、 高血压及健康成人球结膜微循环的变化 。 研究发现 : 脑卒中 8 7例 , 封:结膜微 循 环 异
常率为 9 4 . 3 % , 高血压 189 例的异常率为 8 9 . 9 % , 而健康成人 8 例的异常率为 25 % , 经统计 J飞处理 , 球钾膜
微循环异常在脑卒中与高血压组之间无明显差异 (P > 0 . 0 5) , 脑卒中、 高血压和健丧人 立释: 有显一离差异 (P (
0
.
0 1 )
。 作者认为球结膜生物显微镜检查可作为脑血管变性的诊察手段之一 。
二尖瓣替换术后左心室破裂 (附二例报告 )
(郝家骆 , 等 。 胸心血管外科杂志 , 1 9 5 6 , 2 ( 1 ) : 1 2一 1 3 )
左心室破裂是二尖瓣替换木后较少见的严重并发症之 ~ 。 作者进行 4 06 例瓣膜替换术中发生 2例 (占于木
人数。 . ,l9 % ) 。 二例均为 32 岁女性 , 一例于术毕心脏复跳后发现心包腔溢皿 , 检查发现左心室后壁穿孔 , 在
重新转流下用垫片褥式缝台止血 . , 痊愈出院。 另一例 士术后 6小时因剧烈咳嗽发生左心室破裂大出血 , 急救
少、 衡衍死 ; 一 。 二例均系 I 型破裂 , 一例可能为切除乳头过多引起 , 另一例可能与器械直接损伤有 关 , 本 文
对二尖瓣替换术后芡 生左心室破裂的原因 、 诊断和预防进行了讨论 。
· 吕Q .
ISOLA T10 N AND ID任NT IFICA T10 N O F LE N TIL LE C T !N
Z h o u Z h o lu n
, e t a l ( D i v i s i o n f o r T r a d i t i o n a l C h i n e s e a n d W
e s t e r n M e d i e i n e
, F a e u l t y
o f P h a r m a e y )
L e n t i l l e e t i n ( L e A ) 15 i s o l a t e d f r o m C h i n e s e L e n s e u l i n a r i s a n d i d e n t i f i e d b y
P o l y a e r y l a m i d e g e l e l e e t r o P h o r e s i S
, a f f i n o 一 i m m u n o
一 e l e e t r o P h o r e s i s a u t o r a d i o g r a P h y
,
e r y t h r o e y t e a g g l u t i n a t i o n t e s t a n d s u g a r s P e e i f i e i t y t e s t
.
l t s h a l f m o l e e u l a r w e i g h t 15
e s t im a t e d b y SD S
一 P o l y a e r y l a m i d e g e l e l e e t r o P h o r e s i s
, a n d i t s e o n t e n t s o f e a l e i u m
,
m a n g a n a s e
一 P r o t e i n a n d s u g a r a r e d e t e e t e d
.
T h e P r o d u e t h a s b e e n u s e d f o r d e t e r m i n a t i o n 0 f a
一士e t o P r o t e i n v a r i a n t s 5 0 a s t o
e a r l y d i a g n o s e h e P a t o e e l l u l a r e a r e i n o m a
.
K e y w o r d s
:
l e n t i l l e e t i n ; h e P a t o e e l l u l a r e a r e i n o m a
( O r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 2 6 )
双下肢八字石膏治疗儿童股骨头无菌性坏死 14例报告
(韩平良、 徐印坎 。 上海医学 1 9 8 6 , g ( 3 ) : 1 5 5 )
本文报道用双侧下肢八字石膏固定治疗儿童股骨头无菌性坏死 14 例 (其中2例双侧 ) 。 经治疗后 , 疗效属
优者。个 (5 6% ) , 良5个 ( 31 % ) , 差 z个 ( 13 % ) , 优良率达 8 % 。此法优点是操作简便 ,股骨头进人缆臼深部能
均匀地承受重力 , 有利于坏死股骨头的生长修复 , 术后可持拐负重行走 ; 缺点是治疗时 间较 长 , 需 1 . 5一
2年。
坐骨神经盆腔出口狭窄症的诊断和治疗 (附 4 8例报告 )
( 赵定麟 , 等 。 上海医学 1 9 8 5 ; 8 ( 1 1 ) : 6 2 6 )
通过对坐骨神经盆腔出口部的正常解剖学 、 组织学和组织液压测定的研究 , 并结合腰腿痛患者的 临 床
观察 , 提出了 “ 坐骨神经盆庄出 口狭窄症 ” 。 文中对该病的诊断 、 鉴别诊断和治疗作 了探讨 , 并介绍了 坐骨
神经盆腔出口扩大减压术的方法 。 在施术的 5 6例中 , 随访半年以上者有 4 3例 , 其优良率为 84 % 。
肌皮瓣在慢性骨髓炎治疗中的应用 (附 1 5例报告 )
(侯春林 , 等 。 中华显微外科杂志 1 9 8 6 ; 9( 1 ) : 2 3一 2妇
目 1 9 8 3年 1月一 1 9 8落年 7月 , 作者应用 6种不同类型肌皮瓣 , 通过局部转移或游离移植治疗 `漫性 骨 髓 炎
16例 , 全部治愈 , 干均治愈时间仅 1 3天 , 随访时元 1例复发 。 作君认为肌反瓣皿运早省 、 抗感 染力 强 , 能
一期消灭死注 . 闭 全刽面 , 具万厅侄短 , 活忿毕离辱优 抓 : 不又汀矶反希运行 、 贡二淮 合 、 沉茵索应用 等
}丙题走行丁讨之 .