全 文 ：第二军医大学学报 1 9 0年第 1卷第 3期 2 1 0
抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋 白异质体单克隆抗体 的
研制和初步应用
张柏和 吴孟超 张晓华 陈 汉 (肝胆外科研究所 )
吴存忠 (病理解剖学教研室 )
提要 采用细胞融合技术制备抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体 , 建立单克隆抗体 “ 双
位点夹心 ” E L ISA血清学检测方法 。 通过对 69 例原发性肝细胞癌 、 67 例良性肝病 、 30 例妊娠妇女和 30
例健康成人血清检测结果分析 , 表明该方法操作简便 , 结果准确 , 重复性好 , 不仅假阳性率低 , 并适用于低浓
度甲胎蛋白原发性肝细胞癌的早期诊断 , 使良 、 恶性肝病的答别诊断率明显提高 , 具有较高的临床实用价值 .
关键词 小扁豆凝集素 ; 甲胎蛋白 ; 异质体 ; 单克隆抗体 ; 肝细胞癌
为了进一步提高原发性肝细胞癌 ( P H C )
的早期检出率和检测方 法的特异性 , 提 高
低浓度 A F P 的 P H C 与良性肝病鉴别诊 断
的准确性 , 我们建成分泌抗人小扁豆凝集素
结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体 ( A F P一
R一 L C A M c Ab ) 的杂 交瘤 细胞 株 , 建 立
M c A b
“ 双位点夹心 ” E LI S A 血清学检测 方
法 , 在临床应用于 P H C 的诊断和鉴别诊断 ,
获得 比较理想的效果 。
采 用离子交换层析的方法从带瘤小 鼠腹水
中提纯 M c A b 。 用 改 良过碘 酸钠 法 制备
M c A b 的 辣根 过氧 化物 酶标记物 (V G S一
H R P )
, 其工作浓度为 l : 2 0 0 0 。
1
.
4
1气一 A F P一 R一L C A相对结合率试验
参考文献 团 的方法 , 测定放射免疫沉淀物
的 cP m 值戈B ) , 按下式计算抗原结合率 。
抗原结合率 ( % ) = ( B / T ) 只 10 0
1 材料和方法
1
.
1 A F P一 R一 L C A 抗原 采 用分步亲和
层析的方法 L日 , 从 P H C 病人血 清 中提纯
A F P一 R 一 L C A, 其纯度为 9 4 . 4% 。
1
.
2 杂交瘤细胞的建株 ( 1) 细胞融合二选
用 F O 骨髓瘤细胞 与 A F P一 R一 L C A 免疫
的 B AL B /c 小鼠脾细胞按常规细胞融合技
术进行融合 。 ( 2) 培养 上清 中 M c Ab 的检
测和杂交瘤的克隆化 : 杂交瘤细胞培养上
清采用正 向间接血凝法初筛 , 并用 血凝抑
制试验和 E L sI A 复测 。 挑选生长快 、 形态
好 、 分泌高效价抗体的瘤细胞以有限稀释
法连续克隆化 5 次 , 直至细胞建株 .
1
.
3 M c A b 的纯化及其酶标记物的制备
M c Ab 相对结合率 ( % ) = S B 一 N B
M B一 N B
(式中 S B 表示样品的抗原结合率 ; M B
表示抗体最大阳性结合率 ; N B 表示非特异
叶结合率 )
】. 5 M c A b 与 ’怂 I一 A F P 一R 一 L C A 的亲和 、
解离动力学测定
1
.
5
.
1 亲和动力学测定 参照刘呆等阎 介
绍的方法 , 检测不同时相的抗体与抗原 的
结合率, 按下列公式进行计算 。
t ( P e 一 P x ) / P e〕又 10 0 %
(式中 eP 表示间隔 2 0 h 后标记抗原的
最大结合率 , P x 表示各个不同时间 x 的抗
原结合率 )
1
.
.5 2 解离动力学测定 按 照前文团 的方
20 2 第二军医大学学报 19 90 年第 n 卷第 3期
法 , 将抗体和标记抗原混匀后 4℃放置过夜 ,
第 Z d 在各测定管中加人非标记抗原 , 温浴
后于不同时相 测定 CP m 值 , 计算各管的抗
原结合率 .
(入 / P 。 ) x 10 %
(式中 P 。表示未加非标记抗原时的结
合率 , xP 表示加人非标记抗原后不 同时间
x 的结合率 )
将以上两个试验的计算结果取作纵座
标 , 时间 x 取作横座标作图 。
1
.
6 固相抗原竞争抑制试验 A F P 一R一
L C A ( 5拜g / m l ) 0
.
2 m l/ 孔包 被 聚苯 乙烯酶
标板 , 4 ℃过夜 , P B S 洗 涤 4 次后每 孔 加
V G
S一H R P O . 1 m l , 同时再分别加人各M cA b
腹水 ( 1 : 10 稀释 ) .0 0 2 m l/ 孔 。 3 7 ℃温 育
Zh
。 底物显色 30 m i n 后 中止反应 , 以 49 0
mn 测各孔 O D 值
.
1
.
7 双位点夹心 E L IS A试验 参照 U o t i la 冈
和 P o sr tm a n n [习方法进行 。 包被用的 M cA b
与酶标 M cA b 应不产生交叉反应 。
1
.
8 检测对象 P H C 6 9例 , 其中 AF P 阳性
51 例 , 经放射火箭电泳 自显影 (R I )E 测 定
40 0
n g /m l 以上者 5 例 , 1 00一 4 0 n g /m l 1 3
例 , 100 n g /m l 以下者 33 例 , A F P 阴性 18例
( < 3 1 n g,l m l)
. 诊断均经病理组织学证实 .
良性肝病 6 7例 , 包括肝炎后肝硬变 30 例 ,
急性肝炎 or 例 , 慢性活动性肝炎 2 7 例 . 妊
娠妇 女 30 例 . 健康成年献血员 30 例作为
对照 。
.2 2 A F P 一 R 一 L C A M c A b 效价 采用正
向问接血凝法和间接 E LI S A 检测建株细胞
培养上清和腹水 中 M c A b 的效价 , 结果见
表 1 , 以 V G S效价最高 。
2
.
3 M
c A b 的稳定性和小鼠 gI 亚类属型
腹水中以及纯化的 M c A b 在 4℃和 一 30 ℃
条件下保存均稳定 , 存放 6 个月的抗体活性
基本不变 。 M e A b V D 、和 V A。属小鼠 I g G : a ,
V B S
、
V D
。 和 V G 。属 Ig G 、型 。
表 1 单克隆抗体效价分析
T a b
.
I A皿 Iy s is o f M c A b ti t r e
H y b ir do am
elC 1
5
P H A it t er E L I SA
七t er
S u p亡 r n a 坛 A s d 坛s
护丁口XX冰火l,ó1二唱.孟110好sJXXX42,`44 x 10
4 x 10
4 x 10
8 x 10
8 义 10
A s d t cs
2 x l护
于护X1,ó乃怜J峙
,孟
DBAV G
2
.
4 M e A b 与 `乃 I 一 A F P 一 R 一 L C A 的相对
结合率 M c A b 与同位素标记抗原的相 对
结合率可用作对 M c A b 亲和力的粗略估计。
在结合等量抗原的情况下 , M c A b 的稀释度
越高 , 它的亲和力相对也强 。 表 2 中示 5 种
M cA b 的亲和力 , 以 M e A b V G , 最强 。
表 2 几种单克隆抗体与 ’ 2扭一 A F P 一 R 一 L C A
相对结合率
1恤 b . 2 h j e A b r e la t iv e r ca e it v e r a沈 初 t h
, z ,
I一 A F P 一 R 一 L C A
2 结 果
H y b ir d o
am巴! 15
R e那 it v e r at e of M e A b s w ith
, 2 5 x 一 ^ F P 一 R 一 I c A ( o/ )
1 x 10 1
x
10
一 5
1 x 10 l
x 扣 ’
-6
rJ0飞一加乃30,弧犯40 . 2
月 2 . 9
4526
考Jlj胜. 1,661257724”98马玩戈玖qV
2
.
1 融合率及杂交瘤抗体分泌阳性率 先
后共进行4 次细胞融合并接种 2 400 孔 , 其
中 1 29 6孔有杂交瘤细胞克隆生长 , 融合率
为 54% . 经检测分泌抗体的杂交瘤细胞共
67 2 孔 , 阳性克隆率为 51 % 。 选取 5 株分泌
抗 A F P 一 R 一 L C A M cA b 杂交瘤细胞 株 ,
经 5次克隆化后扩大培养并冻存 (一 17 叱 )。
2
.
5 M c A b 的亲和 、 解 离动力学 曲线 测
定 M cA b 的亲和 、 解 离 曲线 , 有助 于 了解
M c A b 亲和力的高低以及与一定量的抗原
第二军医大学学报 19 90 年第 1 卷第 3期 2 0 3
结合需要 的时间 。 如图 1、 2 所示 , M c A b
V G
, 、
V D
: 2和 V G 、 3 种抗体 的亲和 力都 比
较高 , 表现在与抗原结合较快 、 解 离较慢 。
其中以 V G S 的亲和力最强 。
L C A 标准品 , 以设 立标准曲线 。 标准品含
量在 200 n g了m l 以下时与其 O D 值呈线性
关系 , 可检 出最低浓度为 Z n g /m l 。 以临床
收集 36 例 A F P 阳性 P H C 病人血清标本 ,
分别用 E L sI A 、 R IE 和交叉亲和免疫电泳
(C A IE )进行检测 。 E L ISA 与 R I E x C A IE
的测定结果呈正相关 (图 4) 。 相关系数 r 二
0
.
8 4 0 I P < 0
.
0 1
卯 18 0 12 0 0
Tn t e r 、 a l tim
e ( m in )
ù一户八U
叹鱿父ù八曰
的806420Slx公d\x(dl己à一
图 1 单克隆抗体亲和曲线
F ig
.
1 C o r、 5 o f M c Ab a v i山 t y v q
v D
,: · V sB
△
L C A V G S
12 V D I P e A b
k 图 3 固相抗原竞争抑制试验
F ig
.
3 oS li d
a n it gc
n e
om CP it it
v e E l
·
IS A
1060842
Slx(od\xdà
联15050山工国x目1记口ǎ一舀ù叻uàVU闷ldó30 t 20 24 0 120 0
In 忱 r v a l t仰 e (m in )
图 2 单克隆抗体离解曲线
iF g
.
2 C u到 cs of 入k A b 击路砧浦。 n v乓 `
v D 1 2
·
v 几△
2
.
6 M
c A b 的抗原表位特异性 竞 争抑制
试验结果 (图 3) 显示 , 抗 A F P M c A b A ,
A
? 、
M c A b V B
。和 V D t Z所结合 的 抗原位点
与 VD , 和 V G S不同 , 而 V D t与 V G S可能是
作用于抗原的同一位点 , 或者说两种抗体所
识别的抗原表位相距很近 , 以 至形成空间位
阻 . 马抗人 A F P P cA b 和 LC A 亦能抑制酶
标 M e A b V G S 与 A F P 一 R 一 L C A 结合 。
2
.
7
“ 双位点夹心 ” E L is A 与 R IE 和 C A IE
检测结 果 的相关 性 在用 “ 双 位点 夹 心 ”
E IL S A 检测人血清样品 A F P 一 R 一 L C A 含
量时 , 需要同时测定倍 比稀释的 A F P 一 R 一
50 10 15 0 20()
图 4 E L I S A和 R I E x C A I E 相关分析
F i g
.
4 I i n ca r r e 『cs s io n o f tw o s i t e s a n d雨 e h
E I IS A a n d Rl五 t e s t A F P 一 R 一 L C A
( n g 间 ) M c Ab E l l S A n = 36
2
.
8 血清学检测结果 抗人 A F P 一 R 一 LC A
M
c A b E L I S A 方 法 检测 结 果 提 示 , P H C
病人 A F P 阳性率山 73 . 9% ( 5 1 / 69) 提高到
8 1
.
2% ( 56 / 6 9 )
, 良性肝病的 A F P 阳性率山
20 4第 二军医大学学报 1 90 9年第 n卷第 3期
1 9
.
3% (1 3/ 67 ) 降低至 2 .% 9(2/ 7 6) ( P <
0. 05)
。 就诊 断 PC H而 言 , R I E 的 假 阳性
率为 21 . 6% (21 / 9 7) , E IL S A检测假阳性率
仅为 2 . 1% (2/ 97 ) 。 因此 , 我们制备的 A F P 一
R 一 L C A M cA b 以及建立的 E L sI A 在诊 断
和鉴别诊断 P H C 和良性肝病等 , 其准确性
明显优于常规的 R I E (表 3 ) 。
在低浓度 A F P P H C 病人 中 , A F P 簇
100 n g / m l 3 3 例 , A F P 一 R 一 L C A 浓 度 为
19
.
1 3 士 10 . 4 n g / m l ; A F P 哭 40 n g / m l 4 6
例, A F P一 R 一 L C A 浓度 为 49 . 7士 19 . 5 n g /
m l
。
5 9 例 良性肝病和 30 例妊娠妇女 ( A F P
延 4 00 n g /m l) 的 AF P 一 R 一 LC A 浓度分别
为 2 . 1 士 0 . 9 n g / m l 和 1 . 2 7 士 0 . 6 n g /m l .
P H C 病人与 良性肝病血清 A F P 一 R 一 L C A
浓度差异显著 ( P < 0 . 0 0 1 ) (表 4 ) 。
表 3 R IE 和 E L I S A 阳性率比较
T a b
.
3 P o s iit v e ar te of R IE 即d E I J S A t es t
N um be
r R I E ( oD/ )
P H C
B H D
P 认 I
N A
7 3 9 ( 5 1 / 69 )
19 4 ( 13 / 67 )
筋 . 7 ( 8/ 30 )
0
E L I S A (% )
8 1
.
2 ( 5 6 / 6 9 )
2 9 ( 2 / 6 9 )
0
0
69730
B H D
一
b e in助 h e P a it e d is e as e P W : P r eg n a t e w
osen
n
N A
: n o n l、 a l ad
u l t P < 0刀 5
表 4 AF P 一 R 一 L CA 浓度分析
aT `. 4 A an l移 15 o f A F P 一 R 一 L C A e o n e e n t r a r io n
A FP 《 lX() n g /m l A F P 《 4田 n g /m l A F P 一 R 一 CL A 簇 1X() n g z m l
N u r nbe r 又士 SD N U r n be r 又士 SD N u m b e r 又士 SD
P H C
B H D
P W
N A
19
.
10 士 10 4
1 9 1士 0 ,9
1
.
27 + 0
.
6
0
4 .9 7 0 士 19 . 5
2 10 士 0夕
1
.
27 士 0
.
6
0
4 3
6 7
3 4 8 0 士 10 2
4
.
4 0 士 2
.
3
30
30
1
.
2 7 + 0
.
6 < 0
.
0 1
0 < 0
.
0 1
4659303570
3 讨 论
糖作为 “ 功能密码 ” 日益受到重视 , 由
于植物凝集素 ( L￡ e t in) 对糖有专一结 合的
特性 , 应用 1戊 it n 对 A F P 糖链结构不均一
性的研究得到迅速发 展 〔司 。 青柳丰等 叨 从
P H C 病人腹人中纯化 出 L C A 结合型和非
结合型 A F P 异质体 , 对其糖链结构进行分
析 , 发现与 L C A 结合的 A F P 糖链 中具有与
天门冬酞胺 (A sn ) 连接的 N 一乙酞基葡萄
糖残基 , 在此残基上结 合有一个岩藻糖残
基 。 他们采用 C A I E 法分别检测 良性肝病 、
P H C 和转移性肝癌病人血 清 , 发现 P H C
病人血清中 L C A 结合型 A F P 异质体 比率
明显增加 。 D c u g in er 8[] 认为产生这一现象
可能与 P H C 病人血 清中岩藻糖 昔酶活性
明显升高有关 。 这种酶能催化岩藻糖残基
加接到 G l c N A c 上 , 恰好这种结构是 L C A
识别并与之结合所必需的 。 近几年来 , 研究
发现 M c A b 具有从免疫学上区分不同脏器
来源 A F P 的特异性 。 目前已见报道的抗人
A F P M
c A b 不下数十种 , 在 临床运用 中虽
可提高检测的灵敏度和相对特异性 , 但仍
无助于 P H C 与 良性肝病的鉴别 诊 断 . 因
此 , 特异性地识别 P H C 中转化细胞分泌的
相对特异的反分化蛋白 A F P 一 R 一 IC A , 使其
识别具体化 、 实践化和表型化 , 则更有 益于
P H C 的早期诊断和鉴别 。
我们研制的抗人 A F P 一 R 一 L C A M cA b,
具有较强 的特异性和专一性 , 亲和力亦 较
高 。 其中两种 M c A b (V G S 、 V D , )可识别不
同于 已经发现的 A F P 抗原位点 (a 、 b) 的一
种新的结合位点 。 建立 的 “ 双 位点夹心 ”
E IL S A 可定量检测 A F P 一 R 一 L C A 的浓度 。
有关 A F P 和 A F P 异质体检测临界 值 , 文
献报道大致相似 。 梁国栋 「刃 和周鸣等 lm[ 将
第二军医大学学报 190 年第 n卷第 3期 20 5
应用 M cb A E U S A检测 临界 值分别 定 为
6 n g / ml 和 0 1n g / ml , P H C 的阳性 率约为
70 %
. 根据检测结 果 , 我们将 A F P 一 R 一 I C A
临界值定为 or n g /m l , P H C的阳性检出率
为 81 . 2% ; 良性肝病中仅 2 例大于此临界值 ,
30 例妊妇和 30 例对照无 1 例大于 10 n g /
m l
, 假阳性率仅为 2 . 1% 。 与 R I E 和 C A I E
检测结果成正相关 , E IL S A 诊断正 确率为
10 0%
. 在 A F P ( 100 n g / m l 的 33 例 P H C
病人中 , 其 A F P 一 R 一 L C A 平均浓度为 19 1
士 10
.
4 n g/ m l
, 而 57 例良性肝病和 3 0例妊
妇 中 , A F P 一 R 一 L C A平均浓度仅为 1 . 9 士 0 . 9
和 1 . 2 7士 0 . 6 n g / m l , 差异显著 . 此外 , R IE
的假 阳性率达 21 . 6% ( 2 1 / 97) , 阳性 率 为
7 3
.
9%
,
E L sI A 可明显提高 P H C 病人的 阳
性检出率 , 减少假阳性率的产生 。
总之 , 直 接 测定血清 中 A F P 一R 一 IC A
的含量 , 不仅可以提高低浓度 A F P P H C病
人的早期诊断的准确性 , 更有利于 P H C 与
良性 肝病和其他血清 A F P 阳性疾 病 的鉴
别诊断 。 M cA b 制备方便 , 来源稳定 , 特异
性比常规抗体高 。 E L is A 操作简便 , 灵敏 , 快
速 , 具有较高的临床实用价值 . 抗人 A F P -
R 一L C A M cA b 作 为载体 , 在体内定位诊断
和导 向治疗中的应用价值有待进一步深人
研究 。
参 考 文 献
1
.
A o y a ge Y
, e t a l F u co s y l a t l o n o f s e r u r n al Ph a
一化ot -
Por t
e l n i n P a it e n ts w i ht P ir n扭 r y h e P a ot elC l ul a r ca -r
iC
n o呱 B io e ih m B io Ph y s A e at 19 8 5 , 8 3 0: 2 17、
2 T s u n g Y K e r a l
、
eD ir 份it o n 幼 d e h ar ac et ir az it on o f
a m o n o cl o n al hy b ir do nar an it bo d y
s伴a 阮 fo r h协
nat
n al P h a
一
fe Ot Por et in
.
J Im m u n o l M d ho ds 198众
39 : 363
`
3
. 刘 呆等 。 抗人 甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用 .
1 海免疫杂志 19 8 6 ; 6 ( 6 ) : 3 12 。
4
.
U o it l a M
, e t al T w o 一 5 1忱 s an dw ihc 饥 z ym c 姗 n r。价
n o as s a y w iht mo
n o d o n al an 6 bod i
e s ot h让比以 n a l-
P h a
一
fet o Por t d
n
.
J l“ u n u n o l M e th o d s 19 8 1; 4 2 : 1 1
.
5
、
P o sr it n a
n n T
, e t a l
.
C
o rn aP ir
s o n o f om
n
ocl
o n ia 即 d
OP ly cl o
n a
l an 妞ob id e s x n a t w o 一 s ite ib n id n g en Z y m e
im m u n o as
s a y of
r al p h a 一 fe ot Por te i n C li
n
C ih m A e at
t 9 8 3; 135
: 1 3
.
6
` 远藤康史 。 A F P 。 亚型 。 肝胆脾 198 7 ; 14 (5 ) : 7 6 7 ,
7 青柳 丰等 . A F P 异 质体检测在早期诊断 原发性肝细
胞癌中的意义 。 肝胆脾 198 5; 1 1 (7 ) : 7 3 。
8
. 氏 u即 一c r y , e t al . A lp h a 一 L 一 fu cos ld as e : A n e w ma r -
k e r fo r ht e id a g刀 05 15 o f P~
r y h e P at io
car
o n o m a ?
H
c
Pat ol og y 198 4
,
4 (5 )
: 8 89
9
. 梁国栋等 。 应用单克隆抗体 “ 两位点夹心法 ” 恻定甲胎
蛋 自 。 单克隆抗体通讯 19 8 5; 1 2: 1 6 。
or 周 鸣等 。 用单克隆抗沐 EL sI A 一 步法 检测 人血清
甲胎蛋自 . 上海免疫学杂志 19 8嗽 1: 52 。
( 198 9年 10 月 4 日收稿 , 1 9 0 年 3月 1 5 日修回 )
· 消息 ·
《 中国军事医学史》 临床医学和药物学初审会议在我校召开
总后卫生部主编的《 中国军事医学史》 第 4篇中的临床医学和药物学的初审会议于 19 9 0年 5 月 8 日
至 19 日在我校召开 , 初审我校部分教授所撰写的稿件 . 出席会议的有 : 中国军事医学史编委会副主任涂通
今 、 吴之理 、 张国治 , 副主编朱克文 , 编委徐波 (为编辑部主任 ) 、 胡叔光 、 沈 纪宗 、 吴质 以 及撰稿人和 邀请
参加审稿的庄家和主任 . 由吴质代表编辑部主持了会议 。 到会同志以认真负责的态度 , 对初审稿从文字到
内容 , 进行逐段逐节的审查 、 推敲 , 直率地提出意见 , 撰稿人也虚心 听取 , 弥补 了初 审稿 不尽妥 贴之处 。 会
议在热烈而和谐的气氛中进行 , 按计划 圆满地完成初审 。
会上 , 涂通今 、 吴之理副主任都讲了话 , 语重心 长地指出 (大意 ) : 撰写 《 中国军事 民学史》是 一项大工
程 , 过去没有人写过 , 把这本书写好 , 意义十分重大 . 书成以后 , 不仅中国人妥看 , 外国 人也要看 , 影响也很
广 。 这本书对我们有启发、 有教育 , 不仅是留给后人看 的问题 。 要以负责到底 的精神 , 根据初审中提出的好
意见 , 把稿子改好。 (顾锡仁 )
·
29 2
· 第二军医大学学报 19 90年第 n 卷第 3期
T h e E xPer imn et al St ud i e sn oR e cst a bl i sh m en t of M i
cr
oc i
r e ul at in o
in V n e o u s Fl a Ps at E arl y St a g e aft r e op er at in o
S on g Ji
an xin g, e r a l (D印 a r t阴 e n r of P l a s ri c S。飞陷协, , C h a咖 a i H o SP i r a l )
I n t h i s e x P e r im e n t w e i n v e s t iga t e d t h e r e e s at b li s h m e n t o f im
e r o e i r e u l at i o n a n d P e fur is
o n w a y s i n
ve n o u s fl a p s b y m e胡 5 o f r a b b i t e a r e h arn be sr , im a ge p or ce s s i n g s y s et m , a n d e o m即 s i n g vi de o 户ct u er
et c h n iq u e s
,
iw ht in 7 d a y s afl
e r t h e o pe r at i o n
.
hT
e r e s ul t s s h o w e d t h at ht e im
e r o c i r e ul iat
o n o f v卧
o u s fl a p s
,
iw t h in t w o d a y s aft
e r o pe r at i o n
,
w as er e s at b l i s h e d b y t w o k i n d s o f P e fur
s i o n w ay s : ( 1 ) D i v e r
-
s i o n o f b l o o d fl o w pe r fu se d t h e ca P il la ir e s t h r o u hg th e
’ `
t o 一 an d一fr o
’ `
m o v e m e n t o f v e n o u s b lo o d
.
(2 )
hT
e vc n o 璐 bl o o d fl o w ed i n t o a rt e ir al ve s s el s t h r o u hg a r te r i o v e n o u s a n as t o m o s e s an d P e fur s e d th e
ca 户l la ir e s 、 L a t e r ht e s e e o n d w a y r e PI 朗 e d th e if r s t o n e w i t hi n t h e 4 8 h o u r s , s i n e e i t e o ul d n o rm al ly
沐 r f u s e 七5 5朗 5 a n d gaur a n t e e ht e ve n o u s fl a P b l o o d s u P Pl y of r t h e r e s t o f it m e
.
K e y w o r ds v e n o u s fl a P ; m i c r o e i r c u la t i o n
(伽挤耐咧 ie le o n 脚俨 1夕7 )
T h e P r e P a r a t i o n a n d A PP l ie a t i o n o f A n t i 一h u m a n H e t e r o g e n e o u s
L e n s e u lin a r i s A g g l u t i n i n R e a e t i v e A F P M
o n o e l o n a l nA t ib od i
e s
Z h a叩 B a i人e , e t a l ( D eP a r r爪 e n r of H eP a t o b i l i a粉 S u掣珍 , C h a hgn a i H o SP i t a l )
I n t h is aP ep
r ,
we er P
o r t th e s tud y e o n ce m ing th e P r e aP ar ti
o n a n d a PlP ic a t io n o f a n t i
一 hum
a n h。
t e r o g e n e o us A F p
一R 一 L C A m o n oc l o n al an ti b o id e s (V G
: V D I , V B , V A。 V D 12 )
.
T h e s e M e A b s h a d h ihg e r
抓 n i ty 翻 d s沐d if d ty t o A F p 一 R 一 L C A ht an t h e r o ut in e l y u se d an t i一 A F p p o l ycl o n al an it b o d y ·
C o m pe t i石ve as s ay s in id ca et d ht at ht e y e o lu d b in d t o n e w an t i罗 n ie d e te r加 n a n t s w hi e h a r e id fe r e n t
fr o m t h e P er 访 o u s ly er OP r加d a a n d b is ot s
.
I n a n as sa y o f t h e M c A b s, w
e if r s t s e t uP a t w o s i t
e s a n d
-
w i c h E L ISA m e t h o d an d th e n t e s tde
, u is n g ht i s m e t h o氏 s e r urn s a m lP e s fr o m 69 P at ie n t s w i t h P H C ,
6 7 琳 t ie n t s iw t h b e in g n li v e r id s e as e s , 30 P er g n a n t w o m e n a n d 30 n o r m a l e o n t r o l s . T h e 比 s ul t s s h o w e d
t h a t t h i s t w o s it e s an d iw c h E L ISA m Ct h do h a d l
o w P s e u d o
一 P o s i ti v e r a t e
.
T h e de t e c ti o n r an ge aw
s
5 1创叉) n g /m l, w i th t h e p r o钾 r it e s o f s i m P li e iyt, ac u ar c y a n d er p r o d u d b ili ty
.
I t e o lu d b e u sde n o t o n l,
fo
r th e ae r ly id ag n o s i s o f P H C i n aP it e n t s iw ht A F P l e ve l s l e s s ht a n 40 0 n g /m l
,
b u t al s o f o r ht e
id fe r e n t i al id a gn o s i s o f p l l C fr o m be i gn li ve r id s ca s e s
.
K e y ow
r ds L e琳 亡u li~
5 a g g l u t i n l n : A F P ; m o n o e l o n a l a n t i b o d y ; h e t e r o g e n e e i t y
(O找纽an l a rt i e le o n Pa俨 20 ]