全 文 :书 [收稿日期] 2015-01-05;2015-03-30修回
[作者简介] 吕海涛(1972-),男,主管药师,从事中药调剂和制剂工作。E-mail:oceanwave2002@163.com
*通讯作者:麻秀萍(1971-),女,教授,从事中药分析教学和科研工作。E-mail:mxp001130@sina.com.cn
[文章编号]1001-3601(2015)05-0269-0187-04
黔产飞龙掌血茎皮部白屈菜红碱的含量测定
吕海涛1,韩惟芳2,麻秀萍2*,李 江2,邵进明2
(1.贵阳中医学院 一附院,贵州 贵阳550002;2.贵阳中医学院,贵州 贵阳550002)
[摘 要]为黔产飞龙掌血药材资源的开发利用和保护提供参考依据,采用高效液相色谱(HPLC)法,
以phenomenex Cemini C18(250mm×4.6mm×5μm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗
脱,在320nm波长下建立黔产飞龙掌血茎皮部的指纹图谱,并用相似度评价软件进行数据处理。结果表
明:黔产飞龙掌血茎皮部药材的 HPLC指纹图谱共有13个峰,与根皮部药材图谱的相似度高于0.9,初步认
为飞龙掌血茎皮部的化学成分与根皮部相似,茎皮部白屈菜红碱的含量为0.06%~0.20%。
[关键词]黔产飞龙掌血;指纹图谱;茎皮部;高效液相色谱法
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A
Determination of Chelerythrine Content of Stem
Bark of Toddalia asiaticain Guizhou
LU Haitao1,HAN Weifang2,MA Xiuping2*,LI Jiang2,SHAO Jinming2
(1.The First Affilated Hospital,Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,Guizhou
550002;2.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,Guizhou550002,China)
Abstract:The fingerprint spectrum of stem bark of T.asiatica was established by HPLC gradient
elution method under the conditions of chromatogram columiniation phenomenex cemini C18 (250mm
4.6mm,5μm),methanol-0.1% phosphoric acid solution and 320nm wavelength,and the data were
analyzed by similarity evaluation software to provide a reference for development,utilization and protection
of T.asiatica resources in Guizhou.The results showed that there are 13peaks in HPLC fingerprint
spectrum of stem bark of T.asiatica.The similarity between fingerprint spectrum of stem bark of
T.asiaticaand fingerprint spectrum of root bark of T.asiaticais above 0.9.In conclusion,The chemical
components of stem bark of T.asiaticais similar to chemical components of root bark of T.asiatica and
the chelerythrine content of stem bark of T.asiaticais 0.06%~0.20%.
Key words:Toddalia asiatica;fingerprint spectrum;stem bark;HPLC
飞龙掌血[Toddalia asiatica (Linn.)Lam.]
系芸香科飞龙掌血属的唯一植物[1],我国多地均有
分布,收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量
标准》,是贵州苗族常用药材之一,其入药部位为干
燥根或根皮及叶,药性辛、微苦、温,归脾、胃经。根
及根皮有小毒,具有散瘀止血、祛风止痛、消肿解毒
功能;叶具有散瘀止血、祛风除湿、消肿解毒功能[2],
可治疗风湿性关节炎、跌打损伤、闭经等。飞龙掌血
主要含有香豆素类、生物碱类、三萜类等[3-5]。近年
来,关于其指纹图谱研究及有效成分含量测定的研
究已有报道[6-9]。但到目前为此,未见对飞龙掌血茎
皮部化学成分的研究报道。为飞龙掌血药材的全面
质量评价提供依据,拟用茎皮部药材代替根皮入药,
以期达到对资源的保护和可持续利用,并为其进一
步开发和研究奠定基础,为指导合理用药、完善质量
标准制定等提供参考,笔者对飞龙掌血的茎皮进行
高效液相色谱(HPLC)指纹图谱构建,并对飞龙掌
血茎皮部和根皮部的有效成分白屈菜红碱含量进行
测定。
1 材料与方法
1.1 药材
供试药材于2013年8月采自贵州贵阳市云岩
区(1)、龙里县(2)、贵阳市花溪区(3)、兴义市马岭镇
(4)、兴仁县(5)、贵阳市白云区(6)、贵阳市乌当区
(7)、关岭县(8)、都匀市平浪镇(9)、贵阳市南明区
(10),经贵阳中医学院生药学教研室孙庆文老师鉴
定为芸香科植物飞龙掌血的干燥茎皮。同时还采集
了贵州不同地区和云南省红河州产飞龙掌血的根皮
部作对照。
1.2 试剂与仪器
试剂:白屈菜红碱(纯度97.5%,天津马克生物
技术有限公司),甲醇(色谱纯),磷酸(分析纯)等。
仪器:日本岛津 LC-20AT高效液相色谱仪(二元
泵,SPD-20A 紫外可见检测器,手动进样器,柱温
箱,Shimadzu LC solution Lite色谱工作站),《中药
贵州农业科学 2015,43(5):187~190
Guizhou Agricultural Sciences
色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版、2004B
版)》(国家药典委员会发行),电子分析天平
(AB265S,上海奥豪斯有限公司),超声清洗仪
(HS10260D,天津市恒奥科技有限公司),中草药粉
碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)等。
1.3 色谱条件
色谱柱:phenomenex Cemini C18柱(250mm×
4.6mm×5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,
梯度洗脱程序见表1;流速1.0mL/min,检测波长
320nm,进样体积10μL,柱温30℃。
表1 色谱流动相梯度程序
Table 1 The gradient of chromatographic mobile phase
时间/min
Time
甲醇/%
Methyl
alcohol
0.1%磷酸水溶液/%
0.1%phosphoric
acid solution
0 15 85
30 30 70
45 45 55
55 45 55
85 50 50
90 100 0
105 100 0
1.4 溶液制备
对照品溶液:精密称取适量白屈菜红碱,加甲醇
制成浓度为0.041 6mg/mL的溶液。供试品溶液:
精密称取飞龙掌血茎皮部药材粉末 1g,置于
100mL具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50mL,
称量,超声提取30min,放冷至室温,用70%甲醇补
足减失的重量,过滤,取续滤液即得。
1.5 指纹图谱的构建
在图谱的构建前进行方法学考察,精密度试验、
稳定性试验、重复性试验均符合构建指纹图谱的要
求。分别取1~10号黔产飞龙掌血茎皮部药材制备
供试品溶液,在确定色谱条件下分别进样并记录图
谱,采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统(2004A版)》的操作规范软件分析后,建立
飞龙掌血茎皮部药材的色谱指纹图谱共有模式。采
用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004B版)》
对飞龙掌血茎皮部药材的 HPLC图谱进行相似度
评价。
1.6 白屈菜红碱的含量测定
参考文献[5]的条件,对黔产10批飞龙掌血茎
皮、根皮部药材样品的白屈菜红碱含量进行测定。
2 结果与分析
2.1 指纹图谱及技术参数
从图1看出,黔产飞龙掌血茎皮部药材指纹图
谱有13个共有峰,与白屈菜红碱对照品图谱比较,
确定8号峰为白屈菜红碱峰。以8号峰为参照峰,
分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积
(表2、表3)。
173.33
115.37
57.40
-0.57
47.222
61
0.00%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%15.22%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%30.44%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%45.66%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%60.88%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%76.10%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%91.32%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%106.54
时间 /min
429.92
286.56
145.21
-0.14
0.00%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%15.22%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%30.44%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%45.66%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%60.88%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%76.10%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%91.32%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%106.54
1
2
3
4
5 6
7
8(s)
9
10
11 12
13
R
白屈菜红碱
飞龙掌血
电
压
/m
V
电
压
/m
V
时间 /min
图1 白屈菜红碱对照品及黔产飞龙掌血茎皮部药材的指纹图谱
Fig.1 The fingerprint spectrum of Chelerythrine sample and T.asiaticastem bark
·881·
贵 州 农 业 科 学
Guizhou Agricultural Sciences
表2 黔产飞龙掌血茎皮部药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对保留时间
Table 2 Relative retention time of common peak of HPLC fingerprint spectrum of Toddalia asiatica stem bark
峰号
Peaks
样品编号Sample number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0.28 0.28 0.28 0.28 0,28 0.28 0.29 0.29 0.29 0.29
2 0.36 0.36 0.36 0.36 0.36 0.36 0.36 0.37 0.37 0.37
3 0.46 0.46 0.46 0.47 0.47 0.47 0.47 0.48 0.48 0.48
4 0.49 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50 0.51 0.52 0.51
5 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55
6 0.68 0.68 0.69 0.69 0.69 0.70 0.70 0.70 0.71 0.71
7 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0.76 0.76 0.77 0.77 0.77
8 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
9 1.05 1.05 1.05 1.05 1.06 1.06 1.06 1.06 1.06 1.06
10 1.11 1.12 1.12 1.12 1.12 1.12 1.13 1.13 1.13 1.13
11 1.21 1.22 1.22 1.22 1.23 1.23 1.23 1.23 1.24 1.24
12 1.41 1.41 1.41 1.41 1.42 1.42 1.42 1.43 1.44 1.43
13 1.60 1.60 1.61 1.61 1.61 1.62 1.62 1.63 1.64 1.63
表3 黔产飞龙掌血茎皮部药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对峰面积
Table 3 The relative peak area of common peak of HPLC fingerprint spectrum of T.asiaticastem bark
峰号
Peaks
样品编号Sample number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0.26 0.32 1.29 0.49 0.39 1.12 0.33 0.22 0.60 0.45
2 1.55 1.37 2.07 3.63 2.77 3.01 1.93 1.66 2.84 2.14
3 0.21 0.32 1.15 0.53 0.52 0.92 0.32 0.21 0.55 0.36
4 2.73 2.41 8.26 5.88 3.97 7.86 3.31 4.21 6.50 5.98
5 0.29 0.35 1.36 0.54 0.52 1.37 0.37 0.33 0.74 0.58
6 0.22 0.22 0.51 0.52 0.57 0.46 0.38 0.42 0.67 0.55
7 4.04 4.62 10.94 11.64 10.69 10.98 5.37 6.31 8.61 6.85
8 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
9 0.55 0.58 1.03 1.20 0.97 1.40 0.53 0.50 0.79 0.70
10 0.25 0.09 0.79 0.57 0.39 0.68 0.14 0.36 0.52 0.34
11 0.95 0.79 3.54 4.49 2.53 2.06 1.42 2.30 1.74 1.54
12 0.95 1.15 3.93 3.75 2.36 4.69 1.57 1.54 1.91 1.54
13 3.48 3.56 9.62 10.83 8.28 10.49 3.41 5.53 5.78 4.01
573.27
429.92
286.56
-0.14
143.21
0.00%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%15.22%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%30.44%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%45.66%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%60.88%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%76.10%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%91.32%%%%%%%%%%%%%%%%%%%106.54
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
电
压
/m
V
时间 /min
注:S1~S10对应不同来源黔产飞龙掌血茎皮部药材样品,R为对照指纹图谱。
Note:S1~S10,Samples of T.asiaticastem bark from different sources.R,Fingerprint spectrum of CK.
图2 10批黔产飞龙掌血茎皮部药材的叠加指纹图谱
Fig.2 Superposition fingerprint spectrum of T.asiaticastem bark samples from different sources
2.2 指纹图谱的相似度
以共有模式参照谱计算1~10号样品的相似
度,分别为0.992、0.993、0.988、0.988、0.985、
0.991、0.990、0.994、0.989和0.973。从相似度数
据和黔产飞龙掌血茎皮部药材的叠加指纹图谱(图
2)可以看出,各批次药材具有良好的一致性。
从图3可知,黔产飞龙掌血根皮部图谱与茎皮
部图谱相似,其共有模式相似度高于0.97,初步判
断茎皮部与根皮部的化学成分相似。云南产飞龙掌
血根皮部与黔产飞龙掌血根皮部的图谱差异较大,
也不同于黔产飞龙掌血茎皮部指纹图谱,表明两产
地药材所含化学成分有较大差异,且化学成分的含
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吕海涛 等 黔产飞龙掌血茎皮部白屈菜红碱的含量测定
LU Haitao et al Determination of Chelerythrine Content of Stem Bark of Toddalia asiaticain Guizhou
茎皮部 贵州产
根皮部
云南产
电压 /
电压 /
电压 /
电压 /
时间时间
图3 飞龙掌血茎皮部与根皮部的HPLC指纹图谱
Fig.3 HPLC fingerprint spectrum of stem bark and root bark of T.asiatica
量差异也较大,由此判断黔产飞龙掌血茎皮部指纹
图谱可区别于云南产飞龙掌血根皮部药材。
2.3 白屈菜红碱含量
经测定,1~10号黔产飞龙掌血茎皮部白屈菜
红碱 的 含 量 分 别 为 0.18%、0.20%、0.09%、
0.06%、0.10%、0.06%、0.15%、0.13%、0.10%和
0.12%;贵州飞龙掌血根皮部的白屈菜红碱平均含
量为0.20%,云南产为0.27%,比黔产飞龙掌血茎
皮部高。
3 结论
采用高效液相色谱(HPLC)法,构建黔产飞龙
掌血茎皮部的指纹图谱。结果表明,黔产飞龙掌血
根皮部与茎皮部色谱图共有模式的相似度高于0.9,
表明根皮部与茎皮部的化学成分相似,茎皮部白屈
菜红碱的含量为0.06%~0.20%,根皮部的部分化
学成分含量高于茎皮部,但贵阳市云岩区、龙里县产
飞龙掌血茎皮部的白屈菜红碱含量分别为0.18%
和0.20%,与贵州飞龙掌血根皮部的白屈菜红碱平
均含量(0.20%)相当。从资源可持续开发利用角度
看,可进一步对飞龙掌血根皮部与茎皮部药材进行
药理学、毒理学等相关研究,以探明飞龙掌血茎皮部
相关有效成分含量的差异,从而决定能否用飞龙掌
血茎皮部代替其根皮部入药,以保护该药材资源及
其可持续利用。
[参 考 文 献]
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(责任编辑:冯 卫)
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