全 文 ：• 169 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年1月第27卷第1期 CJTCMP , January 2012, Vol . 27 , No. 1
医的症候，首次使用舌部光谱数据对中医证型进行了区分。在
舌诊的客观化研究中展开一个新的篇章，同时为中医证型的客
观化研究提供了一种新的思路。
参 考 文 献
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of dynamic spectrum and partial least-squares in noninvasive
measurement of human erythrocyte content.Journal of Infrared and
Millimeter Waves,2010,29(2):132-135
（收稿日期：2011年1月26日）
通讯作者：姜平川，广西南宁市东葛路20-1号广西壮族自治区中医药研究院化学室，邮编：530022，电话：0771-5868986
E-mail：gxyat@126.com
·研究报告·
HPLC法同时测定九里香中橙皮内酯和脱水长叶
九里香内酯的含量
姜平川1，李嘉2，杨海船1，张赟赟1，李红1
（1广西壮族自治区中医药研究院化学室，南宁 530022；2广西中药质量标准研究重点实验室，南宁 530022）
摘要：目的：建立九里香中橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯含量测定方法，并测定其在广西不同产地及
药材中不同部位的含量。方法：采用高效液相色谱法，使用Agilent Esclipe XDB-C18色谱柱（150mm×4.6mm，
5μm），流动相为甲醇-水（57:43），流速0.7mL/min，检测波长332nm，柱温25℃。结果：橙皮内酯进样量在
0.092-1.104μg，脱水长叶九里香内酯进样量在0.14-1.68μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，相关系数r均为
0.9999（n=5）；橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯的平均回收率（n=6）分别为98.25%和98.30%，RSD分别为0.76%
和1.19% 。结论：本法结果准确，操作简便，重现性好，可为九里香药材的质量控制提供方法。
关键词：九里香； 橙皮内酯；脱水长叶九里香内酯；高效液相色谱
基金资助：广西科技厅科技攻关项目（No.桂科攻0815005-1-22）
HPLC determination of meranzin and phebalosin in Murraya exotica L.
JIANG Ping-chuan1, LI Jia2, YANG Hai-chuan1, ZHANG Yun-yun1, LI Hong1
( 1Department of Chemistry, Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical Science of Guangxi, Nanning 530022, China;
2Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards of Guangxi, Nanning 530022, China )
• 170 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年1月第27卷第1期 CJTCMP , January 2012, Vol . 27 , No. 1
九里香（Murraya exotica L.）是芸香科（Rutaceae）九里香
属植物，为2010年版《中国药典》收载的品种，主要分布于我国
云南、广东 、广西、海南 、湖南 、福建等省区[1], 具有行气止
痛，活血散瘀的功能，用于胃痛，风湿痹痛；外治牙痛，跌扑肿
痛，虫蛇咬伤。九里香主要含有黄酮、香豆素和挥发油等成分，
现代药理研究表明，九里香具有抗生育和终止妊娠、抗菌消
炎、降血糖、抗痉挛及局部麻醉等作用[2]。
2010年版《中国药典》中九里香项下只有显微鉴别和理化
鉴别，尚无含量测定的方法。经高通量分子筛选，目前尚未筛选
出九里香的有效成分，故选择具有代表性的成分作为含量测定
的指标性成分。而橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯是不同产地、
不同采收季节的九里香中共有并且含量较高的化合物，对于其含
量测定，笔者未见文献报道。本实验建立了HPLC法同时测定这
两种香豆素成分的含量，并测定了其在广西不同产地及药材不
同部位中的含量，为九里香药材质量标准的建立提供依据。
仪器与试药
1. 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪，包括二元泵、柱温
箱、二极管阵列检测器及Agilent化学工作站；XS205电子天平
（METTLER TOLEDO）；B2200s超声波清洗器（必能信超声有
限公司）。
2. 试药 甲醇为色谱纯（Fisher公司），水为娃哈哈纯净
水，其它试剂均为分析纯。九里香均采自广西壮族自治区内
各地区，经本院中药资源所严克俭助理研究员鉴定为九里香
（Murraya exotica L.）。橙皮内酯（Meranzin）和脱水长叶九里香
内酯（Phebalosin）均为自制，纯度>98%，一维核磁共振谱（one-
dimensional nuclear magnetic resonance，1D-NMR）、二维核磁共
振谱（two-dimensional nuclear magnetic resonance，2D-NMR）、质
谱（mass spectrum，MS）、红外光谱（infrared spectrum，IR）和紫
外光谱（ultraviolet spectrum，UV）等数据与文献报道一致[3]。
方法与结果
1. 色谱条件 Agilent Esclipe XDB-C18色谱柱（150mm×
4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（57:43），流速0.7mL/min，检
测波长332nm，柱温25℃。在上述色谱条件下，将橙皮内酯和脱
水长叶九里香内酯混合对照品溶液和九里香药材供试品溶液分
别进样10μL，HPLC色谱图见图1。
2 . 对照品溶 液的制备 精密 称 取橙 皮内酯对照品约
0.60mg和脱水长叶九里香内酯对照品约0.80mg，置于同一10mL
量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得，避光保存。
3. 供试品溶液的制备 取九里香药材粉末（过60目筛）
0.125g, 精密测定，精密加甲醇25mL称重，超声（80W，50kHz）
提取30min，用甲醇补足失重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，
取续滤液，即得，避光保存。
4. 线性关系考察 精密称取橙皮内酯与脱水长叶九里香内
酯对照品适量，置10mL量瓶中，加甲醇配成橙皮内酯与脱水长
叶九里香内酯浓度分别为92、140μg/mL的混合对照品溶液，避
光放置。分别精密吸取1、2、4、8、12μL上述对照品溶液，注入
液相色谱仪。以对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵
坐标，进行回归计算，得橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯的回
归方程分别为：Y=2661.9X-30.785，r=0.9999；Y=2608X-51.525，
r=0.9999。结果表明，橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯进样量分
别在0.092-1.104μg和0.14-1.68μg范围内，呈良好的线性关系。
5. 精密度试验 取橙皮内酯（51μg/mL）和脱水长叶九里
香内酯（78μg/mL）的对照品混合溶液，避光放置，按“1.”项色
谱条件连续进样6次，测定峰面积，分别计算橙皮内酯与脱水长
叶九里香内酯的峰面积的RSD（n=6）分别为1.21%和1.03%，表
明方法精密度良好。
6. 稳定性试验 取同一份供试品溶液，避光放置，分别于
第0、2、4、6、8、24h进样测定，计算橙皮内酯与脱水长叶九里
香内酯峰面积的RSD（n=6）分别为0.90%和1.37%，结果表明供
试品溶液中橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯在室温避光条件下
24h内基本稳定。
7. 重复性试验 取九里香药材（南宁产，过60目筛）粉末
Abstract: Objective: To develop a method for the determination of meranzin and phebalosin for analyzing the content
in Murraya exotica L. in different origins and different medicinal portions. Methods: The separation was performed on Agilent
Esclipe XDB-C18 column (150mm×4.6mm, 5µm), using a mixture of 57% methanol and 43% water as the mobile phase at a
fl ow rate of 0.7mL/min at 25℃, the wavelength for measurement was 332nm. Results: The calibration curves were linear in the
range of 0.092-1.104µg for meranzin and 0.14-1.68µg for phebalosin, and the both correlation coeffi cients (n=5) were 0.9999; the
average recovery (n=6) for meranzin and phebalosin were 98.25% (RSD=0.76%) and 98.30% (RSD=1.19%). Conclusion: The
method is accurate, reliable and reproducible to determine meranzin and phebalosin in Murraya exotica L..
Key words: Murraya exotica L.; Meranzin; Phebalosin; HPLC
Fund assistance: Scientifi c and Technological Project of Guangxi Science and Technology Agency (No.GKG0815005-1-22)
图1 橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯对照品溶液（A）和九里
香样品溶液（B）的HPLC图
注：Ⅰ.橙皮内酯；Ⅱ. 脱水长叶九里香内酯。
ᯊ䯈/min 5 10 15
ᯊ䯈/min 5 10 15
A
B ĉ
Ċ
ĉ Ċ
100
50
100
50
Ⅰ Ⅱ
Ⅰ
Ⅱ
• 171 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年1月第27卷第1期 CJTCMP , January 2012, Vol . 27 , No. 1
加入量
（mg）
0.6954
取样量
（g）
0.0652
0.0639
0.0648
0.0662
0.0644
0.0643
样品含量
（mg）
0.6911
0.6773
0.6869
0.7017
0.6826
0.6816
测得量
（mg）
1.3702
1.3588
1.3774
1.3795
1.3645
1.3703
回收率
（%）
97.65
98.00
99.30
97.46
98.06
99.04
平均回收率
（%）
98.25
RSD
（%）
0.76
表1 橙皮内酯加样回收率试验
取样量
（g）
0.0652
0.0639
0.0648
0.0662
0.0644
0.0643
样品含量
（mg）
1.2127
1.1885
1.2053
1.2313
1.1978
1.1960
加入量
（mg）
1.2360
测得量
（mg）
2.4153
2.3899
2.4272
2.4344
2.4230
2.4322
回收率
（%）
97.29
97.20
98.86
97.33
99.12
100.01
平均回收
率（%）
98.30
RSD
（%）
1.19
表2 脱水长叶九里香内酯加样回收率试验
6份，按“3.”项下方法操作，制得6份供试品溶液，避光放置，
注入色谱仪测定含量。结果样品中橙皮内酯与脱水长叶九里香
内酯的含量平均值（n=6）分别为1.06%和1.86%，RSD分别为
1.42%和1.47%。
8. 加样回收率试验 取已知含量的九里香（橙皮内酯与
脱水长叶九里香内酯的含量分别为1.06%和1.86%）粉末6份，
每份约0.0625g，分别精密加入对照品混合溶液（含橙皮内酯
231.8μg/mL，脱水长叶九里香内酯412μg/mL）3mL, 按“3.”项
下方法操作，制得6份供试品溶液，避光放置，注入色谱仪测定
含量，计算回收率。结果见表1-表2。
9. 样品测定 见表3。取采集自广西不同产地和广西九里
香示范基地不同药材部位的的九里香药材，晾干，打粉，过60
目筛，按“3.”项下方法操作，在上述色谱条件下对样品进行测
定，计算含量。
讨论
1. 检测波长的选择 本实验对橙皮内酯和脱水长叶九里
香内酯进行了全波长扫描，结果显示两者均在332nm附近有最
大吸收，故选332nm为检测波长。
2. 流动相与流速的选择 本实验考察了不同比例的甲醇-
水为流动相与不同流速对分离效果的影响。结果表明，选用甲
醇-水（57:43）作为流动相，流速为0.7mL/min时可使样品中对
照品峰与杂质峰的分离度达到1.5以上。
3. 供试品溶液制备方法的确定 本实验考察了甲醇和乙
醇的提取效果，结果甲醇的提取效率较高；通过对超声提取
30min, 回流提取1h的提取率的比较，发现超声提取率较高；
另对超声提取20、30、40min的提取率的比较，20min提取率最
低，30、40min的提取率基本一致；故最终确定加入甲醇25mL
超声提取30min。
4. 实验发现脱水长叶九里香内酯对照品在光照和含水溶
液条件下极不稳定，故制备好的对照品溶液和供试品溶液应避
光保存。
5. 本实验建立了九里香中橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯
的含量测定方法，操作简单，结果可靠，重现性好。分析了不同
产地的九里香样品，结果表明不同产地的九里香，其橙皮内酯
和脱水长叶九里香内酯的含量有明显的差异。而在药用部位的
比较中，橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯在叶子中的含量要比
在茎中高得多。在2010版中国药典中，九里香尚未有含量测定
项，本实验建立的含量测定方法可为九里香质量标准研究提供
科学的依据。
参 考 文 献
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（收稿日期：2011年3月2日）
产地
药用部位 茎
叶
样品
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
1
2
3
1
2
3
来源
广西来宾
广西崇左
广西武鸣
广西南宁
广西九里香示范基地
广西南丹
广西环江
广西罗城
广西九里香示范基地
广西九里香示范基地
广西九里香示范基地
广西九里香示范基地
广西九里香示范基地
广西九里香示范基地
采集
日期
2009-03
2009-04
2009-06
2009-07
2009-07
2009-11
2009-11
2009-11
2009-05
2009-06
2009-07
2009-05
2009-06
2009-07
橙皮
内酯
0.17
0.42
0.50
0.70
0.89
1.77
1.40
1.16
0.21
0.31
0.44
0.43
1.15
1.45
脱水长叶
九里香内酯
0.56
0.29
1.26
1.29
1.59
1.33
1.54
1.46
0.11
0.13
0.27
0.75
1.33
1.90
表3 九里香中橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯含量测定（%）