全 文 ：山东科学
SHANDONG SCIENCE
第 29 卷 第 2 期 2016 年 4 月出版
Vol． 29 No． 2 Apr． 2016
DOI:10． 3976 / j． issn． 1002 － 4026． 2016． 02． 003 【中药与天然活性产物】
收稿日期:2015-08-24
作者简介:吕海花(1988 －)，女，硕士，研究方向为生药学。Email:15589907463@ 163． com
* 通讯作者，徐凌川，教授。Email:xulingchuan518@ sina． com
叶底珠各部位中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定
吕海花，李雪晴，王冉冉，徐凌川*
(山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)
摘要:采用高效液相色谱法测定叶底珠中一叶萩碱和别一叶萩碱在各部位中的含量。结果表明，一叶萩碱在各部位的质
量分数 w根皮 ＞ w细根 ＞ w枝干皮 ＞ w木部 ＞ w嫩叶芽(济南)＞ w枝叶 ＞ w根 ＞ w嫩叶芽(临沂)。别一叶萩碱在各部位的质量分数 w根皮 ＞ w细根 ＞
w木部 ＞ w枝干皮 ＞ w根 ＞ w嫩叶芽(临沂)＞ w嫩叶芽(济南)＞ w枝叶。本实验为叶底珠生药成分中一叶萩碱和别一叶萩碱的定性和定量测
定提供了科学依据。
关键词:叶底珠;一叶萩碱;别一叶萩碱;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002-4026(2016)02-0009-05
Content determination of securinine and allosecurinine from every
section of Securinega suffruticosa(Pall．)Ｒehd．
L Hai-hua，LI Xue-qing，WANG Ｒan-ran，XU Ling-chuan *
(School of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
Abstract ∶ We employed HPLC to determine the content of securinine and allosecurinine from every section of Securinega
suffruticosa． Ｒesults show that securinine content is wroot bark ＞ wfine root ＞ w limb skin ＞ wxylem ＞ wbud (jinan) ＞ wbranches and leaves ＞ wroot ＞
wbud (linyi)． Allosecurinine content is wroot bark ＞ wfine root ＞ wxylem ＞ w limb skin ＞ wroot ＞ wbud (linyi) ＞ wbud (jinan) ＞ wbranches and leaves ． The
experiments provide scientific reference for qualitative and quantitative determination of securinine and allosecurinine from
Securinega suffruticosa．
Key words∶ Securinega suffruticosa(Pall．)Ｒehd．;securinine;allosecurinine;HPLC
叶底珠 Securinega suffruticosa(Pall．)Ｒehd．为大戟科 Euphorbiaceae 叶底珠属 Securinega 植物，别名叶下
珠、狗杏条、黄恨子或一叶萩。作为传统中药材，叶底珠根部入药，有活血舒筋、健脾益肾等功能，用于治疗风
湿腰痛、四肢麻木和小儿疳积等疾病。叶底珠生长在山坡灌丛中及向阳处，在我国东北、华北、江西、浙江、江
苏、河南以及陕西等省区均有分布［1］。叶底珠植株主要含有以一叶萩碱(securinine)为代表的一叶萩型生物
碱(securinega-type alkaloids)类化合物［2 － 5］。一叶萩碱不仅对脊髓和脑干中枢神经具有不同程度的兴奋作
用，还有一定的抗肿瘤以及肝保护作用［6 － 8］。目前，对于叶底珠的研究多集中于叶、根以及枝叶部位［8 － 10］，
而对各个部位的成分，尤其是主要成分生物碱的定性与定量方面的研究较少。本研究在前期纯化精制一叶
山 东 科 学 2016 年
萩碱和别一叶萩碱的基础上，采用高效液相色谱法对叶底珠植株各部位中所含一叶萩碱和别一叶萩碱进行
含量测定，分析其在各部位的分布规律，建立叶底珠各部位的质量控制方法，为新药研发奠定基础。
1 材料、仪器与试剂
1． 1 材料
叶底珠植株各部位样品除临沂产的嫩叶芽由临沂某商务会所提供外，其余样品均于 2014 年 4 月采于山
东济南佛慧山，经山东中医药大学徐凌川教授鉴定为大戟科植物叶底珠 Securinega suffruticosa(Pall．)
Ｒehd．。
1． 2 仪器
高效液相色谱仪 Waters 2695 Separation Module、光电二极管阵列检测器 2998 (美国 Waters 公司);上皿
FA1004 电子天平(上海精科天平厂);CP225D型十万分之一电子天平(德国 Sartorius 公司)。
1． 3 药品与试剂
一叶萩碱、别一叶萩碱对照品(四川省维克奇生物科技有限公司，批号 130517、130623);氯仿、无水乙醇
(天津四友精细化学品有限公司)，纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。
2 实验方法
2． 1 供试品溶液的制备
精密称定过 40 目筛的叶底珠各部位干燥样品粉末 2． 5 g，置于 60 mL 分液漏斗中，加适量的 25%
NH4OH浸润 1 h，加氯仿 50 mL，充分振荡 30 min后置于铁架台上静置过夜分层。取出氯仿层，减压蒸馏挥
去氯仿，残渣加无水乙醇溶解定容至 50 mL容量瓶，摇匀，微孔滤膜(0． 45 μm)过滤，即得。
2． 2 对照品溶液的制备
分别取一叶萩碱和别一叶萩碱对照品约 0． 14、0． 20 mg，精密称定，用无水乙醇溶解定容至 10 mL，摇匀，
微孔滤膜(0． 45 μm)过滤，即得。
2． 3 色谱条件的选择
色谱柱:Kromasil C18色谱柱(4． 6 mm ×250 mm，5 μm);检测波长:254 nm;流速:1 mL /min;柱温:25 ℃;
流动相:甲醇:0． 1% 三乙胺水溶液(50:50，V /V);进样量:10 μL。
2． 4 线性关系考察
取 2． 2 项下的一叶萩碱和别一叶萩碱对照品溶液，分别依次进样 1、5、10、15、20 μL，按照 2． 3 项下的色
谱条件测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归后得回归方程。一叶萩碱含量与峰面积关系回
归方程:y = 7 × 106x － 973 023 (Ｒ2 = 0． 999 7，n = 5);别一叶萩碱含量与峰面积关系回归方程:y = 6 × 106x －
882 273 (Ｒ2 = 0． 999 9，n = 5)。实验表明，在一叶萩碱和另一叶萩碱进样量分别为 0． 140 μg ～ 2． 110 μg，
0． 170 μg ～ 3． 700 μg范围内，含量与峰面积线性关系良好。
2． 5 加样回收率实验
取已知含量的供试品 6 份，分别精密加入一定量的一叶萩碱和别一叶萩碱对照品，按照 2． 1 供试品溶液
的制备方法进行制备，测得一叶萩碱和别一叶萩碱的平均回收率分别为 99． 8%、99． 6%;相对标准偏差分别
为 0． 4%、0． 3%。
2． 6 精密度实验
分别取一叶萩碱和别一叶萩碱对照品溶液，重复测定 6 次，结果一叶萩碱的相对标准偏差为 0． 3%，别
一叶萩碱的相对标准偏差为 0． 4%，表明仪器精密度良好。
01
第 2 期 吕海花，等:叶底珠各部位中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定
2． 7 稳定性实验
取同一浓度的一叶萩碱和别一叶萩碱对照品溶液各一份，分别于 0、2、4、8、16、24 h 精密吸取 10 μL 进
样，测得一叶萩碱和别一叶萩碱峰面积的相对标准偏差分别为 0． 3%、0． 4%。表明在 24 h内稳定。
3 实验结果
样品各部位与标准品一叶萩碱和别一叶萩碱的 HPLC 图见图 1 ～ 10。各部位一叶萩碱和别一叶萩碱在
各部位的质量分数详见表 1。由表 1 可以看出，一叶萩碱的质量分数 w根皮 ＞ w细根 ＞ w枝干皮 ＞ w木部 ＞
w嫩叶芽(济南)＞ w枝叶 ＞ w根 ＞ w嫩叶芽(临沂)。别一叶萩碱在各部位的质量分数 w根皮 ＞ w细根 ＞ w木部 ＞ w枝干皮 ＞ w根 ＞
w嫩叶芽(临沂)＞ w嫩叶芽(济南)＞ w枝叶。
表 1 叶底珠植株各部位一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定
Table 1 Content determination of securinine and allosecurinine in different parts of Securinega suffruticosa(Pall．)Ｒehd．
编号 植株部位 样品质量 / g
一叶萩碱平均
峰面积 /A
一叶萩碱
质量分数 /%
别一叶萩碱平均
峰面积 /A
别一叶萩碱
质量分数 /%
样品 1 根 2． 518 1 601 355 0． 045 2 844 074． 5 0． 124
样品 2 细根 2． 528 1 7 476 576 0． 240 15 231 228． 5 0． 531
样品 3 根皮 2． 492 7 13 775 789 0． 423 21 274 819 0． 741
样品 4 木部 2． 517 9 4 375 152． 5 0． 152 8 197 887． 5 0． 301
样品 5 枝叶 2． 500 6 2 764 280 0． 108 - 0
样品 6 枝干皮 2． 538 2 5 311 243 0． 178 4 296 148 0． 170
样品 7 嫩叶芽(临沂) 2． 532 8 24 161． 5 0． 029 162 048 0． 035
样品 8 嫩叶芽(济南) 2． 505 2 3 352 538． 5 0． 124 47 107． 5 0． 031
图 1 一叶萩碱对照品 HPLC图
Fig． 1 HPLC analysis of securinine standard
图 2 别一叶萩碱对照品 HPLC图
Fig． 2 HPLC analysis of allosecurinine standard
图 3 样品 1(根)的 HPLC图
Fig． 3 HPLC analysis of sample 1 (root)
图 4 样品 2(细根)的 HPLC图
Fig． 4 HPLC analysis of sample 2 (fine root)
11
山 东 科 学 2016 年
图 5 样品 3(根皮)的 HPLC图
Fig． 5 HPLC analysis of sample 3 (root bark)
图 6 样品 4(木部)的 HPLC图
Fig． 6 HPLC analysis of sample 4 (xylem)
图 7 样品 5(枝叶)的 HPLC图
Fig． 7 HPLC analysis of sample 5 (branches and leaves) 图 8 样品 6(枝干皮)的 HPLC图
Fig． 8 HPLC analysis of sample 6 (limb skin)
图 9 样品 7(嫩叶芽临沂)的 HPLC图
Fig． 9 HPLC analysis of sample 7 (bud from Linyi)
图 10 样品 8(嫩叶芽济南)的 HPLC图
Fig． 10 HPLC analysis of sample 8 (bud from Jinan)
4 讨论
本实验以一叶萩碱和别一叶萩碱为研究对象，采用高效液相色谱法对叶底珠各部位样品进行含量测定，
得到不同部位的一叶萩碱和别一叶萩碱的含量(表 1)，该方法为叶底珠各部位的生物碱含量测定提供了依
据。
由测定结果可见，根皮中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量最高，其次是细根，这一结果也验证了中药以根
部入药的原因。同时，可依据该数据确定适宜的药用部位，从而达到较好的治疗效果。嫩叶芽中一叶萩碱和
21
第 2 期 吕海花，等:叶底珠各部位中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定
别一叶萩碱的含量较低，药用价值相对较小，可以选择优先利用叶底珠根部入药。在济南和临沂分别采收的
嫩叶芽一叶萩碱含量差异较大，别一叶萩碱含量差别不大，由此也为道地药材生产地的选择提供了依据。该
实验为叶底珠生药成分中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定和质量控制提供了有效依据，并为其资源开发
与利用奠定了基础。
参考文献:
［1］国家中医药管理局． 中华本草［M］． 上海:上海科学技术出版社，1999:3669 － 3676．
［2］王英，李茜，叶文才，等． 一叶萩的化学成分［J］． 中国天然药物，2006，4 (4):260 － 263．
［3］屈志伟，张均田． 一叶萩碱对 5 种神经递质受体和蛙脊髓膜电位的影响［J］． 药学学报，1987，22(4):305 － 307．
［4］中华人民共和国卫生部药典委员会． 中华人民共和国卫生部药品标准:化学药品及制剂第一册［S］． 北京:北京科技出
版社，1989:142 － 143．
［5］吴海燕，周金云． 一叶萩的化学成分研究［J］． 中国中药杂志，2004，29 (8):535 － 536．
［6］刘毅，岳志华，张娜，等． 一叶萩碱的研究进展［J］． 中国药事，2009，23 (8):817 － 818．
［7］陆小娟． 叶底珠叶化学成分的研究［D］． 吉林:吉林大学，2010．
［8］贲亮，郭伟康，袁红艳，等． 叶底珠枝叶水提物对小鼠急性肝损伤的保护作用［J］． 四川中医，2010，28 (2):25 － 26．
［9］LI M D，HAN S W，ZHANG G，et al． Antiproliferative activity and apoptosis-inducing mechanism of L-securinine on human breast
cancer MCF-7 cells［J］． Die Pharmazie，2014，69 (3) :217 － 223．
［10］ZHANG G，LI M D，HAN S W，et al． Induction of human chronic myeloid leukemia K562 cell apoptosis by virosecurinine and its
molecular mechanism［J］． Molecular Medicine Ｒeporis，2014，10 (5) :2365 － 2371．
31