全 文 ： 中国现代应用药学 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 Chin JMAP, 2011 April, Vol.28 No.4 ·341·
表 5 2种方法测定心脉隆注射液蛋白质含量的显著性检验
Tab 5 Significance test of the protein contents of
Xinmailong injection by two different methods
方法 样品的浓度/mg·mL−1 显著性检验
方法 1 0.159 4 0.153 3 0.153 3 0.160 3 F 0.05,3,3 =1.21
方法 2 0.150 9 0.156 0 0.147 9 0.146 6 t 0.05,3=3.182
3 讨论
美洲大蠊携带的寄生虫卵、细菌、病毒和过
敏原，是公认的害虫；以美洲大蠊作为原料药材
开发的新药——心脉隆注射液是静脉注射。医生
和患者的认识接受程度需要长期的过程，成为较
快推广应用的主要障碍和需要解决的问题；特别
是是否存在过敏原为诸多专家、医生和患者担心
的问题。虽然整个工艺中都非常严格地排除蛋白
质等过敏原，但仍不排除有微量的蛋白质存在于
心脉隆注射液中。
蛋白质的检测方法有很多。但是根据文献，
本试验选择了 Bradford 染料结合法，以尽量避免
小分子肽[3]干扰。事实上，Bradford 染料结合法干
扰因素不但多，而且难以排除。一方面是心脉隆
注射液中的杂质带来颜色干扰，使显色结果的最
大吸收波长不在 595 nm，二阶导数光谱法(峰-谷
法)排除了颜色干扰；另一方面因心脉隆注射液中
样本基质影响较大，所以又采用标准加入法相结
合的方法。检测结果显示，心脉隆注射液中存在
极微量大分子蛋白质，含量约为 0.15 mg·mL−1。
但是这些蛋白质并不一定是过敏蛋白源，还有待
进一步的研究。
REFERENCES
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收稿日期：2010-06-12




HPLC 测定九里香中脱水长叶九里香内酯的含量

姜平川，李嘉，杨海船, 张赟赟，李红，黄建猷(广西壮族自治区中医药研究院，南宁 530022)

摘要：目的 建立九里香药材中脱水长叶九里香内酯的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，使用 Agilent Esclipe
XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 µm)，流动相为甲醇-水(55∶45)，流速 1 mL·min−1，检测波长 332 nm，柱温 25 ℃。
结果 脱水长叶九里香内酯进样浓度在 20.72~207.2 µg·mL−1内，与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8)；其平均回收率
为 98.41%，RSD为 1.65%(n=6)。结论 本法简便易行，重复性好，可用于九里香药材中脱水长叶九里香内酯的含量测定。
关键词：九里香；脱水长叶九里香内酯；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1；R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2011)04-0341-04

基金项目：广西科技厅科技攻关项目(桂科攻 0815005-1-22)
作者简介：姜平川，女，副研究员 Tel: 13807712995 E-mail: gxyat@126.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2011.04.012
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Determination of Phebalosin in Murrayae Folium et Cacumen by HPLC

JIANG Pingchuan, LI Jia, YANG Haichuan, ZHANG Yunyun, LI Hong, HUANG Jianyou(Guangxi Institute of
Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Nanning 530022, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a high performance liquid chromatographic method for the determination of
phebalosin in Murrayae Folium et Cacumen. METHODS The analysis was carried out on an Agilent Esclipe XDB-C18
column(150 mm×4.6 mm, 5 µm), using a mixture of 55% methanol and 45% water as the mobile phase at a flow rate of 1
mL·min-1 at 25 , the wavelength for measurement was 332℃ nm. RESULTS The calibration curve was linear in the range of
20.72−207.2 µg·mL−1(r=0.999 8); the average recovery was 98.41% with RSD of 1.65%(n=6). CONCLUSION The method is
simple, accurate and reproducible, and it is suitable for the determination of phebalosin in Murrayae Folium et Cacumen.
KEY WORDS: Murrayae Folium et Cacumen; phebalosin; HPLC; determination

九里香为芸香科植物九里香(Murraya exotica
L.)和千里香(Murraya paniculata L. Jack)的干燥叶
和带叶嫩枝，主要分布于我国云南、广东、广西、
海南、湖南、福建等省区[1]，具有行气止痛、活血
散瘀的功能，用于胃痛、风湿痹痛；外治牙痛、
跌扑肿痛、虫蛇咬伤。中国药典 2010 年版中九里
香项下只有显微鉴别和理化鉴别，尚无含量测定
的方法。本课题组研究发现，脱水长叶九里香内
酯为九里香两个品种的共有成分，且含量较高，
为有效控制其质量，笔者建立了以脱水长叶九里
香内酯为指标的含量测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪(二极管阵列检
测器，Agilent 化学工作站，美国 Agilent 公司)；
XS205 电子天平(瑞士 METTLER TOLEDO 公司)；
B2200s 超声波清洗器[必能信超声(上海)有限公司]。
九里香采自广西各地区，经广西中医药研究
院严克俭助理研究员鉴定为九里香 Murraya
exotica L.和千里香 Murraya paniculata L. Jack。脱
水长叶九里香内酯对照品为自制，纯度>98%，
1D-NMR，2D-NMR，MS，IR 和 UV 等数据与文
献[2]报道一致。结构图见图 1。
O O
O
CH2CH3
CH3O

图 1 脱水长叶九里香内酯的结构
Fig 1 The structure of phebalosin
甲醇为色谱纯(Fisher 公司)；水为娃哈哈纯净
水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent Esclipe XDB-C18 柱(4.6 mm×
150 mm，5 µm)；流动相：甲醇-水(55∶45)；检测
波长：332 nm，流速：1 mL·min−1；柱温 25 ℃；
进样量：10 µL。
2.2 对照品溶液的制备
取脱水长叶九里香内酯对照品适量，精密称
定，加甲醇制成 100 µg·mL−1 的溶液，即得，避光
保存。
2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过 3 号筛)约 0.25 g，精密称定，
精密加入甲醇 50 mL，称重，超声提取 1 h，放冷，
用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，
即得，避光保存。
2.4 耐用性试验
曾用 Agilent Esclipe XDB-C18，Agilent Zorbax
XDB-C18，Global Chromatography C18 等不同品牌
色谱柱进样测定，结果本品供试液的 HPLC 色谱
图中脱水长叶九里香内酯峰的分离很好，理论板
数按脱水长叶九里香内酯峰计算，应不低于 3 000。
2.5 线性关系考察
取脱水长叶九里香内酯对照品适量，精密称
定，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含脱
水长叶九里香内酯 0.207 2 g·mL−1 对照品储备液，
将对照品储备液稀释，得到浓度为 20.72，62.16，
103.6，145.04，207.2 µg·mL−1 共 5 个浓度对照品
溶液，避光放置。分别精密吸取 10 µL 注入液相色
谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以对照
品溶液浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行
中国现代应用药学 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 Chin JMAP, 2011 April, Vol.28 No.4 ·343·
回归计算，得回归方程为：Y=19.033X+23.082，
r=0.999 8。结果表明，脱水长叶九里香内酯进样浓
度在 20.72~207.2 µg·mL−1 内，呈良好的线性关系。
2.6 仪器精密度试验
取脱水长叶九里香内酯对照品适量，精密称
定，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度
为 60 µg·mL−1 的对照品溶液，避光放置，连续进
样 6 次，每次进样 10 µL，测定峰面积，脱水长叶
九里香内酯峰面积的 RSD 为 1.25%。
2.7 稳定性试验
取九里香供试品(广西灵川)溶液，避光放置，
分别于 0，2，4，6，8，24 h 进样测定，脱水长
叶九里香内酯峰面积的 RSD 为 2.36%，表明供试
品溶液在室温避光条件下 24 h 内基本稳定。
2.8 重复性试验
取九里香样品(广西灵川)，按“2.3”项下方法
平行制备 6 份供试品溶液，避光放置，按“2.1”
项下的色谱条件，测定脱水长叶九里香内酯峰面
积，其平均含量为 1.63%，RSD 为 1.57%。
2.9 回收率试验
取已知含量(1.63%)的千里香粉末 6 份，每份
0.125 g，加入对照品适量，按“2.3”项下方法操
作，制得 6 份供试品溶液，避光放置，按“2.1”
项下的色谱条件，测定含量，计算回收率。结果
见表 1。
表 1 回收率试验结果(n=6)
Tab 1 The results of recovery test(n=6)
取样量/g 样品中 含量/µg
加入量/
µg
测得量/
µg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/
%
0.125 9 2.052 2 4.014 0 96.6
0.125 0 2.037 5 4.064 4 99.9
0.126 8 2.066 8 4.066 2 98.5
0.125 9 2.052 2 4.074 7 99.6
0.126 7 2.065 2 4.088 3 99.6
0.128 0 2.086 4
2.030 0
4.039 2 96.2
98.4 1.65
2.10 样品测定
取所采集广西各地的九里香和千里香药材，
晾干，打粉，过 60 目筛，按“2.3”项下方法制备
供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别精密
吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 µL，注入液相
色谱仪进行测定，采用外标一点法计算脱水长叶
九里香内酯的含量，结果见表 3，色谱图见图 2。
表 2 九里香中脱水长叶九里香内酯含量测定结果
Tab 2 Contents of phebalosin in Murrayae Folium et
Cacumen
品种 样品编号 样品产地 采收时间
脱水长叶九里
香内酯含量/%
1 广西靖西 2008-12 0.16
2 广西堡里 2009-01 0.37
3 广西罗锦 2009-03 1.08
4 广西凌云 2009-04 0.81
5 广西百色 2009-04 1.23
6 广西灵川 2009-11 1.45
7 广西永福 2009-11 1.06
千里香
(Murraya
paniculata
L. Jack)
8 广西环江 2009-11 0.87
9 广西来宾 2009-03 0.62
10 广西崇左 2009-04 0.31
11 广西武鸣 2009-06 1.14
12 广西南宁 2009-11 1.85
13 广西桂平 2009-11 2.02
14 广西南丹 2009-11 1.30
15 广西环江 2009-11 1.17
九里香
(Murraya
exotica L.)
16 广西罗城 2009-11 1.45


图 2 脱水长叶九里香内酯对照品与供试品色谱图
A−脱水长叶九里香内酯对照品；B−九里香供试品；1−脱水长叶九里
香内酯
Fig 2 HPLC chromatograms of control and sample
A−control; B−sample; 1−phebalosin
3 讨论
3.1 检测波长的选择
本实验对脱水长叶九里香内酯进行了全波长
扫描，结果显示在332 nm有最大吸收，故选332 nm
为检测波长。
3.2 流动相的选择
本实验考察了不同比例的甲醇-水为流动相对
分离效果的影响。结果表明，选用甲醇-水(55∶45)
可使样品中目标峰与杂质峰达到基线分离。
3.3 供试品溶液制备方法的确定
本实验考察了脱水长叶九里香内酯在溶液状
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态的稳定性，结果发现其在光照和含水溶液条件
下极不稳定，故在提取溶剂考察方面只选择甲醇
和乙醇，结果甲醇的提取效率较高；通过对超声
提取 1 h，回流提取 1 h，索氏提取 2 h 的提取率的
比较，发现三者提取率基本一致，由于超声提取
操作简便，因此选择超声提取；另对超声提取 30，
50，60，70 min 的提取率比较，30 min 提取率最
低，60 min 和 70 min 的提取率基本一致；故最终
确定供试品的制备方法为取本品粉末，加入甲醇
50 mL，超声提取 1 h，避光保存。
本实验建立了九里香中脱水长叶九里香内酯
的含量测定方法，操作简单，结果可靠，重复性
好。对不同产地的九里香两个品种进行了分析，
结果表明脱水长叶九里香内酯为九里香(Murraya
exotica L.)和千里香(Murraya paniculata L. Jack)两
个品种的共有成分。本实验建立的含量测定方法
可为九里香质量标准研究提供科学的依据。
REFERENCES
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Murraya plants [J]. J Pharm Pract(药学实践杂志), 1997,
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收稿日期：2010-06-23



HPLC 测定不同产地罗勒中芦丁和槲皮素的含量

陈良 1，徐晓琴 1，凯撒·苏来曼 2，姜林 1∗(1.新疆医科大学附属中医医院，乌鲁木齐 830000；2.新疆维吾尔自治区民族药物研究所，
乌鲁木齐 830002)

摘要：目的 建立罗勒中芦丁和槲皮素的含量测定方法，并对不同产地药材进行含量测定。方法 采用高效液相色谱法
将罗勒中芦丁和槲皮素进行测定；芦丁的流动相为乙腈-0.4%磷酸(18∶82)，槲皮素的流动相为乙腈-0.4%磷酸(32∶68)；
检测波长均为 360 nm；流速均为 1.0 mL·min−1；柱温均为 30 ℃。结果 芦丁的线性范围为 4.95~24.75 µg(r＝0.999 7)，
平均回收率为 100.7%，RSD=1.62%(n=6)。槲皮素的线性范围为 1.792~8.064 µg(r=0.999 7)，平均回收率为 98.3%，RSD
为 0.94%(n=6)。不同产地罗勒药材中芦丁和槲皮素的含量分别在 0.39~0.71 mg·g−1和 0.29~0.58 mg·g−1之间。结论 本法
专属性强，重复性好，结果准确可靠，可作为罗勒的质量控制方法。
关键词：罗勒；芦丁；槲皮素；高效液相色谱法
中图分类号：R927.2 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2011)04-0344-03

Determination of Rutin and Quercetin in Ocimi Herba from Different Places by HPLC

CHEN Liang1, XU Xiaoqin1, KAISA Suerman2, JIANG Lin1∗(1.Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of
Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China; 2.Xinjiang Institute of Chinese Materia Medica and Ethnodrug, Urumqi
830002, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a method for determination of the contents of rutin and quercetin in Ocimi Herba,
and to determine the contents of rutin and quercetin in Ocimi Herba from different places. METHODS The contents of rutin
and quercetin in Ocimi Herba were determined by HPLC. The rutin was determined by using mobile phase consisted of
acetonitrile-0.4% phosphoric acid solvent(18∶82), the quercetin was determined by using mobile phase consisted of
acetonitrile-0.4% phosphoric acid solvent (32∶68). All the UV wavelength was 360 nm, the flow rate was 1.0 mL·min−1 and the
column temperature was 30 ℃. RESULTS The linear range of rutin was 4.952−4.750 µg(r=0.999 7) with a mean recovery of
100.7% and RSD 1.62%(n=6). The linear range of quercetin was 1.792−8.064 µg(r=0.999 7) with a mean recovery of 98.3%,
RSD 0.94%(n=6). The contents of rutin and quercetin in Ocimi Herba from different places were within the range of 0.39−0.71
mg·g−1 and 0.29−0.58 mg·g−1. CONCLUSION The method is specific, reliable and accurate. It can be used for the quality
基金项目：新疆维吾尔自治区重大科技专项(200733146-1)
作者简介：陈良，男，硕士生，中药师 Tel: 13579832835 E-mail: zzqzyyyyyscl@sina.com *通信作者：姜林，男，硕士，副教授
Tel: 15999131684 E-mail: jianglinjjj@163.com