全 文 ：　2011 年　第 40 卷　第 4 期 中 国 南 方 果 树
研究简报 ·柑桔类果树·
本 地早 桔试 管微 芽嫁 接初 步试 验
罗君琴 ,李 　丽 ,徐建国 ,孙建华 ,柯甫志 ,聂振朋
(浙江省柑桔研究所 ,黄岩 , 318020)
摘　要:研究不同接穗嫁接时期 、茎尖来源和茎尖大小对本地早桔试管内微芽嫁接成活的影响 。结
果表明 , 7—8月夏秋梢抽发期大田采接穗进行茎尖微芽嫁接 , 嫁接苗茎尖存活及萌芽率高。以枳
橙为砧 ,微芽嫁接茎尖大小以含 3 ～ 4 个叶原基成活率高。成年态茎段试管扦插萌芽提供微芽嫁接
茎尖接穗 ,可克服大田采芽受季节限制 , 延长接穗茎尖供应期。
关键词:本地早桔;微芽嫁接;离体培养
中图分类号:S 666.2　　文献标志码:A　　文章编号:1007-1431(2011)04-0037-03
　收稿日期:2010-05-25;修回日期:2010-07-06
资助项目:台州市科技项目(091KY02-23-27)资助。作者简介:罗君琴(1972-),女 ,农业技术推广硕士 ,浙江台州人 ,助理研究员 ,主要从事园艺植物组织培养工作。
　　推广应用无毒苗已是柑桔可持续健康发展的重
要生产环节。茎尖微芽嫁接是将不带毒的茎尖分生
组织作接穗嫁接到不带毒的幼砧上进行试管内培
养 ,获取完整的脱毒植株的技术[ 1-4] 。该技术既能利
用不带毒成年态茎尖营养体成功脱毒病原体 , 又能
通过嫁接解决果树茎尖组培脱毒不易生根问题 , 是
目前果树无毒苗生产中比较有效的病毒脱除方法。
本试验主要针对浙江地方特色柑桔品种本地早桔开
展试管内茎尖微芽嫁接技术研究 , 以期为茎尖微芽
嫁接技术快速推广应用提供一定的技术依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料
微芽嫁接柑桔接穗茎尖及砧木种子取自浙江省
柑桔研究所(黄岩)柑桔试验基地 , 其中接穗茎尖采
自 7～ 8 年生本地早桔。
1.2　微芽嫁接基本步骤
1.2.1　砧木培养　取卡里佐枳橙种子 , 无菌条件下
剥除种皮 , 5%～ 10%次氯酸钠消毒 10 ～ 15 分钟 , 无
菌水冲洗后接种于固体培养基 M T+糖 30 g/ L , pH
值 5.8～ 6.0。接种后在(27±1)℃温度条件下试管
内暗培养 2 周左右 ,获取黄化苗用作微芽嫁接砧木。
1.2.2　接穗准备　嫩梢抽发期 , 采集 2～ 2.5 cm 长
的柑桔茎尖接穗 ,自来水清洗 ,超净工作台上切取 1
～ 1.5 cm 长茎尖外植体 , 置于已灭菌锥形瓶中用
5%次氯酸钠消毒 5 ～ 10 分钟 , 无菌水冲洗后待用。
1.2.3　微芽嫁接　无菌条件下 ,选择茎粗较大的砧
木苗 , 切去顶端 ,在砧木根颈向上 1.5 ～ 2 cm 韧皮部
开小三角形 , 同时保留实生根 4 cm 左右。将已消毒
接穗在高倍体视显微镜下 , 快速切取适当大小茎尖 ,
移至砧木开口处 , 使尽可能多地贴合在一起。嫁接
苗接种于液态培养基 MT+糖 30 g/ L , 在(25±1)
℃、光强 2 000 ～ 2 500 lx 和 12 小时/天光照条件下
试管内培养。
1.3　试验设计
1.3.1　接穗嫁接时期对微芽嫁接成活的影响　通
过大棚结合修剪促发新梢萌发 , 分别在 4—11 月各
月上中旬采集本地早桔嫩枝茎尖进行试管内微芽嫁
接。每次嫁接 15～ 25个茎尖 ,嫁接 3 周后观察记录
茎尖存活及萌芽率。
1.3.2　茎尖来源对微芽嫁接成活的影响　在本地
早桔夏秋梢生长期 , 从已结果树采集半木质化新梢 ,
剪成 1.5 ～ 2 cm 长茎段作外植体 , 分别用 75%乙醇
和 10%次氯酸钠溶液消毒处理 2 次后 ,接种于芽诱
导培养基(MT+BA 0.5 ～ 1.0 mg/ L+IAA 0.05 ～
0.1 mg/ L)上 , 2 ～ 4 周后 , 诱导茎段腋芽再生 , 建立
试管内成年态茎段芽无菌再生体系[ 5-6] 。
在本地早桔秋梢抽发期 , 于 10月微芽嫁接时分
别取试管内无菌再生芽茎尖和大田嫩梢茎尖作茎尖
接穗进行嫁接成活比较 , 每个处理 18 株。嫁接 25
天后观察比较两种不同茎尖来源接穗茎尖萌发生长
及污染情况。
37
DOI :10.13938/j.issn.1007-1431.2011.04.032
中 国 南 方 果 树 2011 年　第 40 卷　第 4 期
1.3.3　茎尖大小对微芽嫁接成活的影响　在本地
早桔夏秋梢抽发期 , 分别用 2 、3 、4、5 和 6 个叶原基
大小的接穗茎尖进行微芽嫁接 , 每个处理 10 株 , 分
别于嫁接后 12 天和 25 天观察记录接芽存活状况。
5 周后试管嫁接苗的接芽萌发出 2 片以上幼叶时 ,
摘取幼叶送检黄龙病。送检通过的微芽嫁接生根苗
室外炼苗 , 1 个月后观察炼苗成活情况。
2　结果与分析
2.1　接穗嫁接时期对微芽嫁接成活的影响
4—10 月各月上中旬选晴好天气采集柑桔嫩梢
茎尖进行试管内微芽嫁接;11 月受低温天气影响 ,
修剪促发的新梢茎尖黄化自剪 , 田间采不到有用的
嫩梢茎尖 ,微芽嫁接未能进行。嫁接后 10 天左右嫁
接砧木除萌一次 ,接后 3 周观察记录柑桔嫁接苗茎
尖存活率及萌芽率 , 存活率(%)=茎尖接穗存活的
嫁接苗数/总嫁接苗数×100 , 萌芽率(%)=茎尖接
穗萌发长出新梢的嫁接苗数/总嫁接苗数×100。
从图 1 可以看出:4—10 月 , 本地早桔 7—8 月
夏秋梢抽发期微芽嫁接茎尖存活率和萌芽率明显高
于 4—6 月春 、夏梢及 9—10 月晚秋梢抽发期 , 这可
能与春梢抽发期采芽母本树同时伴有大量的花芽生
长发育 ,以及晚秋时期气温下降柑桔茎尖自剪加速 ,
从而影响到营养梢茎尖内部的生理活性有关。 11
月由于低温影响 ,在台州当地即使借助塑料大棚 , 仍
难以延缓修剪促发的新梢黄化自剪。大田采芽时间
控制在 10 月中旬以前为宜。田间采芽进行柑桔微
芽嫁接 ,其成活受季节影响明显。
图 1 　接穗采穗期对本地早桔微芽嫁接成活的影响
2.2　成年态茎段无菌再生芽茎尖与大田嫩梢茎尖
接穗嫁接成活比较
本地早桔成年态茎段再生芽茎尖接穗嫁接 25
天后茎尖平均存活率 50%,萌发率 16%,优于 10 月
大田采嫩梢茎尖微芽嫁接(存活率 33%、萌芽率
6%),接近七八月份大田采集茎尖成活及萌芽率;试
验过程中 , 成年态茎段再生芽茎尖与大田嫩梢茎尖
接穗嫁接苗污染率分别为 6%和 17%。试验结果看
出 , 试管再生芽作茎尖接穗时不经历消毒损伤 ,利于
接芽成活及有效降低微芽嫁接苗污染。
　　与此同时 , 再生芽茎尖作接穗苗萌芽长势稍弱
于大田茎尖嫁接苗(见图 2 、图 3), 萌发成活的成年
态茎段诱导芽茎尖接穗叶色嫩绿 , 比大田直接采穗
微芽嫁接成活苗幼叶颜色稍淡。可否通过培养基配
方调整等方法提高成年态茎段再生芽分化质量 , 从
而进一步提高成年态茎段再生芽茎尖接穗嫁接成活
及萌发效果 , 有待继续试验。
2.3　茎尖大小对微芽嫁接成活的影响
本地早桔分别用含 2 、3 、4 、5 和 6 个叶原基大小
的接穗茎尖进行微芽嫁接 ,每个处理 10 株 , 接后 12
天和25天记录接芽存活情况(见图4)。本地早桔
图 4 　接穗茎尖大小对本地早桔
微芽嫁接成活的影响
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　2011 年　第 40 卷　第 4 期 中 国 南 方 果 树
以卡里佐枳橙为砧木时进行微芽嫁接 ,茎尖接穗以
含 3～ 4 个叶原基大小为宜 , 过小或过大均不利于嫁
接成活。嫁接茎尖含 2 个叶原基时 , 茎尖在嫁接操
作过程中较易失水枯死;嫁接茎尖大于 4 个叶原基
时 ,茎尖切面易超出砧木切面 , 不能完全贴合在一
起 ,也不利于嫁接切口愈合 , 易引起茎尖枯死。
　　嫁接 5 周后 ,除含 6 个叶原基茎尖嫁接苗无萌
发外, 其余含2 、3 、4 、5个叶原基等4个处理茎尖接
芽均有萌发成活 ,萌发成活株数分别为 1 株 、3 株 、3
株和 1 株。成活 1株的处理每株取 2 片幼叶送检黄
龙病 ,成活 3 株的处理每株取 1 片幼叶放一起送检。
PCR检测结果显示各处理均不含黄龙病病原。
送检通过的生根苗室外条件适应 1 天后 , 移栽
于柑桔营养钵无土基质(珍珠岩∶泥炭=3∶1), 放
置在有防虫网的自动间歇弥雾苗床中炼苗。 1 个月
后试管苗室外炼苗成活 70%～ 85%。
3　小结
田间采芽进行柑桔微芽嫁接 , 其成活受季节影
响明显。本地早桔大田采集接穗进行茎尖试管内微
芽嫁接 ,七八月份夏秋梢抽发期嫁接苗茎尖存活率
和萌芽率为一年之中最高。 11 月受低温影响 , 大田
采集柑桔嫩梢茎尖难 , 田间采芽进行试管内微芽嫁
接最迟宜控制在 10 月中旬以前。
利用柑桔成年态茎段试管内扦插诱导无菌再生
芽做微芽嫁接接穗茎尖 , 体视显微镜下微茎尖嫁接
时无需进行表面消毒处理 , 茎尖不经历消毒损伤 , 利
于接芽成活及有效降低微芽嫁接污染 , 是克服大田
采芽受季节限制 、延长接穗茎尖采穗期的好途径。
本地早桔以卡里佐枳橙为砧木进行试管内微芽
嫁接 , 茎尖接穗大小以含 3 ～ 4 个叶原基为宜 , 过小
或过大均不利于嫁接成活。本试验中嫁接成活的苗
均未检测出含黄龙病病原。送检通过的茎尖微芽嫁
接试管生根苗自动间歇弥雾条件下室外炼苗 1 个
月 , 成活率达 70%～ 85%。
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(责任编辑:王新娟)
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(责任编辑:章　瑾)
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