全 文 ：香圆叶中柚皮苷的含量测定
王 萍，李 莉，张 静，国 宏，韩继红，张雪荣* (河北化工医药职业技术学院，河北石家庄 050026)
摘要 ［目的］建立香圆叶中柚皮苷的含量测定方法。［方法］采用 HPLC色谱法对香圆叶的主要成分柚皮苷的含量进行定量分析，色谱
柱为 Kromasil C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为无水甲醇 －水 －冰醋酸(30∶68∶2，V/V /V);流速 1． 1 ml /min，检测波长为 286 nm。
［结果］柚皮苷在 0． 192 6 ～1． 152 μg /ml范围内呈良好的线形关系，加样回收率为 100． 6%，RSD为 1． 5%(n =6)。［结论］高效液相色谱
法测定香圆叶中柚皮苷的含量方法操作简单、准确、重复性好、精密度高、专属性强，可以作为香圆叶的质量控制标准，为中药香橼的品
种鉴定和不同药用部位的研究开发提供较为科学的依据。
关键词 HPLC，香圆叶，柚皮苷
中图分类号 R284． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)32 －19789 －02
Determination of Naringin in Citrus wilsonii Tanaka Leaf by HPLC
WANG Ping et al (Hebei Chemical and Pharmaceutical College，Shijiazhuang，Hebei 050026)
Abstract ［Objective］To establish a method for the determination of naringin in the leaf of Citrus wilsonii Tanaka by HPLC ． ［Method］The
content of naringin in the leaf of Citrus wilsonii Tanaka was determined by HPLC． The separation was performed on a Kromasil column C18(250
mm × 4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase was methanol － water － glacial acetic acid (30∶68∶2，V /V /V)at the flow rate of 1． 1 ml /min． The
detection wave length was 286 nm． ［Result］There was a good linearity between the naringin concentration of 0． 192 6 and 1． 152 μg /ml． The
addition recovery rate was 100． 6% with the RSD of 1． 5%(n = 6)． ［Conclusion］The established HPLC method for determining naringin in
Citrus wilsonii Tanaka takes advantages of simplicity，accuracy，good repeatability，high precision and strong specificity，which could provide
a scientific basis for quality control specification of Citrus wilsonii Tanaka leaves，variety identification of FRUCTUS CITRI and development of
different medicinal parts．
Key words HPLC;Citrus wilsonii Tanaka leaf;Naringin
作者简介 王萍(1956 － ) ，女，河北石家庄人，教授，高级考评员，从事
化学化工产品、药品类质量研究与鉴定，质量分析工作，E-
mail:hzzj1981@ 163． com。* 通讯作者，教授。
收稿日期 2011-08-26
香圆(Citrus wilsonii Tanaka)来源于芸香科(Rutaceae)柑
桔属(Citrus．) ，是中药枸橼的两大植物来源之一。芸香科柑
桔属的果实形状相似，因此古代香橼的药材品种多指枸橼，
且较为混乱，但通过安国中药交易市场调查发现目前香圆是
枸橼的主流品种。香圆叶含有柚皮苷、挥发油等化学成分，
具有理气和中、化痰止咳的功效，中医用于缓解胃腹胀痛、呕
吐、咳嗽等症。至今为止，在现代医学研究中有关香圆的报
道较少，中国药典(2010 版)中尚没有香圆叶中柚皮苷的含
量测定方法和相应的质量标准［1］，所以关于相关的成分提取
和分离的研究鲜有报道。该试验采用中药常用的提取分离
方法对其化学成分进行研究，结合参考相关文献的报道采用
高效液相色谱法的试验条件进行探讨［2］，测定香圆叶中柚皮
苷的含量，以期为寻找不同药用部位的中药提供重要的参考
依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。香圆叶采于湖北，经专家鉴定为香圆
(Citrus wilsonii Tanaka)的叶。
1． 1． 2 主要仪器。岛津 LC-IOATvp 高效液相色谱仪，购自
北京京科瑞达科技有限公司;SPD-IOAvp 紫外可见检测器，
购自北京京科瑞达科技有限公司;CLSS-VP色谱工作站，购
自北京京科瑞达科技有限公司;CTO-IOASvp柱温箱，购自北
京京科瑞达科技有限公司;7725i手动进样器，购自北京京科
瑞达科技有限公司;CP225D电子天平，购自北京东方安诺生
化科技有限公司;Kromasil C18色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，5
μm) ，购自北京分析仪器厂。
1． 1． 3 主要试药。柚皮苷对照品(批号 l10722—200309)购
自中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯，水为屈臣氏纯
净水，其余均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件。色谱柱为 Kromasil C18(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －水 －冰醋酸(V /V /V，30∶68
∶2) ;流速为1． 1 ml /min;检测波长为286 nm;柱温为35 ℃;理
论塔板数不少于 2 200。
1． 2． 2 对照品溶液的制备。精密称取柚皮苷对照品 2． 40
mg，置 25 ml量瓶中，用无水甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
即得浓度为 0． 096 mg /ml对照品溶液。
1． 2． 3 供试品溶液制备。精密称定 0． 700 g香圆叶粉末(过
80目筛) ，置50 ml具塞锥形瓶中，加入25 ml浓度50%甲醇，
称定重量，回流提取 45 min，放冷，再称定重量，用浓度 50%
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2 ml，置
10 ml量瓶中，摇匀，过微孔滤膜(0． 45 μm) ，即得。
1． 2． 4 方法学考察。①线性关系考察。精密量取柚皮苷对
照品溶液(0． 096 mg /ml)2、4、6、8、10、12 μl，分别注入高效液
相色谱仪，测定峰面积，以柚皮苷对照品进样量为横坐标
(X) ，以峰面积为纵坐标(Y) ，绘制标准工作曲线。②精密度
试验。精密吸取上述对照品溶液(0． 096 mg /ml)各 2 ml，按
上述色谱条件重复进样 6次，每次 10 μl，记录色谱图和峰面
积，并计算 RSD。③重复性试验。精密吸取同一批号供试品
溶液 2 ml，平行取 6 份，按供试品测定法测定，记录色谱图，
各进样 10 ul，测定，记录峰面积并计算 RSD。④稳定性试验。
精密量取同一批号供试品溶液 2 ml，置于 50 ml的棕色容量
瓶中，用浓度 50%甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清液，用
微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，备用。在 1、2、4、6、8、16、24 h，分
别进样 10 μl，记录峰面积并计算 RSD。⑤加样回收率试验。
采用加样回收法，取已知含量的样品 6份，各精密吸取 1 ml，
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(32):19789 － 19790 责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.32.117
置于 50 ml棕色容量瓶中，精密加入柚皮苷(0． 096 mg /ml)3
ml，用浓度 50%甲醇稀释至刻度，按供试品制备及测定方法
制备及测定，按以下公式计算回收率和 RSD。
回收率(%)=测出总量 －样品中的含量
加入对照品的量
×100
1． 2． 5 香圆叶中柚皮苷的含量测定。取样品 10 批，分别精
密吸取供试品与对照品溶液各 10 μl ，注入液相色谱仪，测定
并计算含量。
2 结果与分析
2． 1 方法考察学
2． 1． 1 线性关系考察。回归方程为 Y = 32． 8 + 1． 82 × 103X，
(R =0． 999 9，n =6)。结果表明在上述色谱条件下柚皮苷在
0． 192 6 ～1． 152 μg /ml浓度范围内有良好的线性关系。色谱
图见图 1。
图 1 供试品、对照品色谱图
Fig． 1 Chromatograms of tested samples and standard substance
2． 1． 2 精密度、重现性、稳定性试验。计算得精密度、重现
性、稳定性试验的 RSD分别为 1． 68%、1． 39%、1． 5%，结果表
明测定方法精密度、重复性良好，且供试品在 24 h内稳定。
2． 1． 3 加样回收率试验。样品加样回收率为 101． 2%，RSD
为 1． 75%，表明样品回收率良好，可用于香圆叶中柚皮苷的
含量测定(表 1)。
表 1 加样回收率试验结果
Table 1 Determination results of recovery test
序号
No．
样品含量
Sample co-
ntent ∥mg
加入量
Addition
amount∥mg
测得量
Measured c-
ontent ∥mg
回收率
Recov-
ery∥%
平均回收率
Average rec-
overy∥%
RSD
%
1 1． 81 1． 81 3． 66 102． 2
2 1． 81 1． 83 3． 70 103． 3
3 1． 82 1． 83 3． 62 98． 4 101． 2 1． 75
4 1． 80 1． 80 3． 64 102． 2
5 1． 81 1． 85 3． 66 100． 0
6 1． 82 1． 79 3． 63 101． 1
2． 2 样品含量测定结果 由表 2可知，10批样品中柚皮苷
含量范围是 5． 14 ～5． 91 mg /g，含量平均值为 5． 54 mg /g，RSD
为 0． 96%，表明该方法快速、灵敏、准确、重复性高、稳定性
好，可以用于香圆叶中柚皮苷的含量测定。
表 2 香圆叶中柚皮苷的含量测定结果
Table 2 Determination results of content(n =10)
序号
No．
样品含量
Sample content∥mg /g
平均值
Mean∥mg /g
RSD∥%
1 5． 70
2 5． 60
3 5． 14
4 5． 56
5 5． 91 5． 54 0． 96
6 5． 82
7 5． 33
8 5． 25
9 5． 47
10 5． 66
3 结论与讨论
3． 1 流动相选择 采用相关文献报道的流动相无水甲醇 －
水 －冰醋酸(36∶61∶1，V /V /V) ，结果显示峰有拖尾现象。采
用药典测定香圆果实中橙皮苷方法里的流动相时，峰未能完
全分开。适当调整流动相比例，用无水甲醇 －水 －冰醋酸
(30∶68∶2，V /V /V)为流动相时，保留时间短，峰形良好，并可
达到基线分离。
3． 2 提取溶剂的选择 取样品数份，分别加入无水甲醇、浓
度 50%甲醇、无水乙醇25 ml，制成供试品溶液，取10 μl进入
高效液相色谱仪测定，结果表明采用浓度 50%甲醇提取，柚
皮苷含量最高，故采用浓度 50%甲醇作为提取溶剂。
3． 3 提取时间的选择 取样品数份，分别加入浓度 50%甲
醇，采用回流提取、超声提取、连续回流提取，制备供试品溶
液，分别取 10 μl进入高效液相色谱仪测定，结果表明回流提
取 45 min时，柚皮苷含量最高，故提取时间采用 45 min。
中药香橼为芸香科植物枸橼(Citrus medica L．)或香圆
(Citrus wilsonii Tanaka)的干燥成熟果实。试验研究表明香
圆叶含柚皮苷，并且柚皮苷的含量一般在 2 mg /g以上，而枸
橼不含有柚皮苷，通过性状相似的枸橼和香圆的含量测定，
能够准确、快速、灵敏的帮助鉴定中药香橼的品种，保证中医
用药的安全，并为寻找新的药用部位提供科学的参考依据。
参考文献
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］．北京:化学工业出版
社，2010．
［2］梁建宁，谭朝阳．大败毒胶囊质量标准研究［J］．中国中医药信息杂志，
2004，11(10):874 －875．
09791 安徽农业科学 2011 年