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HPLC测定不同来源白鲜皮中黄柏酮含量



全 文 :CHINA MODERN MEDICINE 中国当代医药
2009 年 11月第 16卷第 22期 制剂与技术
白鲜皮为常用中药。 商品为芸香科植物白鲜的干燥根
皮。 味苦,性寒。 有清热燥湿、祛风解毒的功效。 临床用于湿
热疮毒、黄水疮、湿疹、风疹、疥癣、疮癞、风湿痹、黄疸、尿赤
等症[1]。白鲜皮主要化学成分为生物碱,也有新发现的活性成
分黄柏酮,具有能增强抗肿瘤药的细胞毒作用[2]。为了能更有
效地控制其质量,本文采用高效液相色谱法对不同地区白鲜
皮药材及相应饮片进行黄柏酮的含量测定,初步制定白鲜皮
药材与饮片中黄柏酮含量的限度。
HPLC 测定不同来源白鲜皮中黄柏酮含量
吴 颖,李 斌,叶 青
(黑龙江省黑河市药品检验所,黑龙江黑河 164300)
[摘要] 目的:研究不同地区白鲜皮药材及饮片中黄柏酮的含量。 方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为 Agilent C18
(150 nm×4.6 nm,5 μm),流动相为甲醇-水(60∶40);检测波长 212 nm。 结果:加样回收率为 96.71%;RSD 为 1.56%;
相关系数 r=0.999 9;不同地区的白鲜皮药材与白鲜皮饮片中,黄柏酮的含量范围为 2.41~3.01 mg/g。 结论:不同地区
白鲜皮药材与相应饮片中,黄柏酮含量基本相同。
[关键词] HPLC;白鲜皮;黄柏酮
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721(2009)11(b)-143-02
HPLC determination of obacunone in Cortex Dictamni in different areas
WU Ying,LI Bin,YE Qing
(Heihe Institute for Drug Control Heilongjiang,Heihe 164300,China)
[Abstract] Objective: To establish a HPLC method to determine the contents of Obacunone in Cortex Dictamni in differ -
ent areas.Methods:Selected Agilent C18 (150 nm×4.6 nm,5 μm);The mobile phase was consisted of methanol-water (60 ∶
40);the detection wavelength was at 212 nm. Results:The average recovery was 96.71%;RSD was 1.56%;r was 0.999 9.The
contents of Obacunone in Cortex Dictamni in different areas were 2.41~3.01 mg/g.Conclusion:Cortex Dictamni in different
areas contains similar amount of Obacunone.
[Key word] HPLC ;Cortex Dictamni;Obacunone
图 1 全叶千里光中挥发油成分的 GC-MS 图谱
Fig.1 GC-MS Spectrum about volatile oil compsil of Senecio cannabi-
folius Less.var. integrifolius(Kǒidz.) Kitam
9,12-十八碳二烯酸、(E)- 9-十八碳烯酸、 油酸乙酯、(Z,Z)-
9,12-十八碳二烯酸,占全叶千里光挥发油总量的 65.661%;
其中含量在 10%以上的有 3 个分别为:1,7,7-三甲基二环
[2.2.1]-2-庚醇 10.703%、 石竹烯氧化物 12.087%、n-棕榈酸
13.521%。 此外从分析结果中可知脂肪烃含量较少仅占挥发
油总量的 3.715%。 其中,萜类化合物和不饱和脂肪族化合物
为全叶千里光挥发油的主要组成成分, 其中, 以 n-棕榈酸
(13.521%) 为代表的脂肪酸类占挥发油总量的 1/4 以上,即
25.331%。 它们有可能是该药用植物活性物质基础的一个部
分, 这对于开发利用这一药物具有一定的参考价值。
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(收稿日期:2009-08-17)
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2009 年 11月第 16卷第 22期制剂与技术
中国当代医药 CHINA MODERN MEDICINE
图 1 黄柏酮紫外扫描图
1 仪器与试药
美国 Agilent 1100 高效液相色谱仪。 甲醇为色谱纯,黄
柏酮对照品由中国药品生物制品检定所提供。 5批白鲜皮药
材与饮片分别由东北、内蒙古、安徽、河北、江苏 5地提供。
2 方法与结果
2.1 波长选择
取黄柏酮对照品溶液, 在紫外线区 200~400 nm 进行扫
描,确定最大吸收波长为 212.4 nm。 见图 1。
2.2 色谱条件
色谱柱为:Agilent(150 nm×4.6 nm);流动相为:甲醇-水
(60∶40);流速 0.8 ml/min;柱温 25℃;检测波长 216 nm。
2.3 供试品溶液制备
分别取东北、内蒙古、安徽、河北、江苏五地的药材及相
应饮片的粉末(过四号筛)1.0 g,精密称定。分别加甲醇 20 ml,
加热回流提取 1 h,放冷,过滤,置于 50 ml 量瓶中,加甲醇稀
释至刻度,摇匀即得。
2.4 黄柏酮对照品溶液制备
精密称取黄柏酮对照品 10.01 mg,置 100 ml 量瓶中,加
甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.5 线性关系考察
精密吸取黄柏酮对照品溶液 1、5、10、15、20、25 μl,在上
述色谱条件下重复进样 2 次,测定峰面积值,以峰面积平均
值和浓度进行回归处理,得回归方程为:Y=583.09X+1.827 6,
r=0.999 9。 线性范围在 0.100 1~2.502 5 μg 呈良好的线性关
系。 见图 2。
2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液 5 μl, 重复进样 5 次, 测定结果
RSD 为 1.68%。
2.7 稳定性试验
取河北白鲜皮药材供试品溶液,每隔 4 h进样 10 μl,测定
黄柏酮峰面积值,共测定 6次,测定结果 RSD为 1.55%。见图 3。
2.8 重复性试验
取河北白鲜皮药材供试品溶液进行 6 次平行试验,测定
黄柏酮的含量,每次进样量 10 μl,测定结果 RSD 为 1.43%。
2.9 准确度试验
采用加样回收法,精密量取 15 ml 黄柏酮对照品溶液加
入锥形瓶中,蒸干,精密称取进行重复性试验的河北白鲜皮
药材粉末 0.5 g,加入锥形瓶中,按黄柏酮含量测定方法进行
测定,计算加样回收率。 结果见表 1。
表 1 样品加样回收率结果
2.10 样品含量测定
取各供试品溶液,按上述色谱分离条件,进样 10 μl,测
定黄柏酮峰面积,计算含量,结果见表 2。
3 讨论
白鲜皮为临床常用药,且主要活性成分为白鲜碱、梣酮、黄
柏酮等[3],而 2005年《中国药典(一部)》中,只对白鲜皮药材中梣
酮进行了含量测定。通过本实验可以对白鲜皮药材与饮片中黄
柏酮进行含量测定,用来衡量白鲜皮药材及饮片的质量优劣。
本实验采用高效液相色谱法测定白鲜皮药材及饮片中
有效成分黄柏酮的含量,本法能达到有效地分离各组分的目
的,具有灵敏度高、操作简单、分离效果好等优点,试验证明,
同产地白鲜皮药材及饮片中黄柏酮含量基本相同,5 个不同
产地的药材及饮片黄柏酮含量平均值为 2.76 mg/g,所以,按
平均值的 80%规定药材及饮片中黄柏酮含量,白鲜皮中黄柏
酮含量应不低于 2.20 mg/g。
[参考文献]
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(10):607-608.
(收稿日期:2009-07-14)
加入量
(mg)
1.501 5
1
2
3
4
5
6
1.462 1
1.464 4
1.463 8
1.463 5
1.465 3
1.465 9
样品
编号
样品量中
黄柏酮(mg)
测得量
(mg)
2.891 3
2.918 6
2.886 8
2.945 9
2.921 2
2.933 7
回收率
(%)
95.19
96.85
94.77
98.73
96.96
97.76
平均值
(%)
96.71
RSD
(%)
1.56
图 2 黄柏酮对照品溶液色谱图
图 3 供试品溶液色谱图
表 2 样品测定结果(n=2)
RSD(%)
1.27
0.82
1.35
0.88
1.96
1.17
1.55
0.89
1.65
0.65
东北药材(吉林长春)
东北饮片(吉林长春)
内蒙古药材(加格达奇)
内蒙古饮片(加格达奇)
安徽药材(定远)
安徽饮片(定远)
江苏药材(滨海)
江苏饮片(滨海)
河北药材(邢台)
河北饮片(邢台)
3.01
2.89
2.49
2.53
2.87
2.94
2.58
2.41
2.93
2.90
样品 黄柏酮含量(mg/g)
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