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大孔吸附树脂分离白鲜皮抗炎有效组分的实验研究



全 文 :大孔吸附树脂分离白鲜皮抗炎有效组分
的实验研究
艾丹,杨桂明
(黑龙江中医药大学佳木斯学院,黑龙江 佳木斯 154007)
摘 要:目的:探讨白鲜皮不同洗脱物的抗炎作用。方法:采用大孔吸附树脂柱色谱,分别以水、20%乙
醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇为溶媒,对白鲜皮的 95%乙醇提取物进行分离。通过二甲苯致小鼠
耳廓肿胀模型,以吲哚美辛为阳性对照药物,考察各洗脱物的抗炎作用,筛选白鲜皮抗炎有效组分。结
果:水洗脱物、20%乙醇洗脱物、50%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物不具备抗炎活性;95%乙醇洗脱物有
抑制二甲苯造成的非特异性耳廓肿胀的作用,与生理盐水比较,有显著性差异(P < 0. 05),与吲哚美辛
作用相似。结论:95%乙醇洗脱物为白鲜皮的抗炎有效组分。
关键词:白鲜皮;大孔吸附树脂;抗炎作用;二甲苯
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2010)03 - 0113 - 02
An Experimental Study on Anti - inflammatory Active Compounds of Cortex Dictamni
Which was Separated by Macroporous Resin Column Chromatography
AI Dan,YANG Gui - ming
(Heilongjiang University of Chinese Medicine,Jiamusi
Medical College,Jiamusi,China 154007)
Abstract:Objective:The anti - inflammatory effect of different elution compounds in Cortex Dictamni were ex-
plored. Methods:95% ethanol extract of Cortex Dictamni was isolated by macroporous resin column chromatog-
raphy (Water,20% ethanol,50% ethanol,70% ethanol,95% ethanol as solvent,respectively). Theanti - in-
flammatory active constituents of Cortex Dictamni were selected with indome - thacin as a positive control drug
by xylene - induced mouse ears edema model. Results:Water - eluted materials,20% ethanol eluted materi-
als,50% ethanol eluted materials,70% ethanol eluted materials did not have anti - inflammatory activity but
95% ethanol eluted materials. Compared with saline,there was a significant differentce(P < 0. 05). However,
there was no difference with indome - thacin. Conclusion:95% ethanol eluted materials in Cortex Dictamni
had anti - inflammatory effect.
Key words:Cortex Dictamni;macroporous resin;anti - inflammatory effects;xylene
基金项目:黑龙江省中医管理局科研项目(ZHY08 - Z30)
作者简介:艾丹(1984 -),女,硕士,主要从事中药剂型改革及新药研发
工作。
通讯作者:杨桂明(1955 -),男,副教授,硕士研究生导师,主要研究方
向:中药剂型改革及新药研发。
收稿日期:2009 - 12 - 29
修回日期:2010 - 02 - 01
白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜(Dictamnus
dasycarpus Turcz.)的根皮,具有清热燥湿、祛风解毒,
止痒的功效。现代药理学研究证明,白鲜皮具有抗氧
化、抗病毒、抗细菌、抗炎、抗肿瘤等多种活性。本课题
组前期研究发现,白鲜皮的 95%乙醇提取物具有显著
的抗炎作用。本实验中采用大孔吸附树脂柱色谱法对
白鲜皮的 95%乙醇提取物进一步分离,考察不同洗脱
物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,探讨白鲜皮抗炎的
有效组分。
1 材料与仪器
1. 1 动物
SPF级 KM 小鼠 70 只,体重(18 ~ 22)g,♂,由黑
龙江中医药大学实验动物中心提供,合格证号 SCXK
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2010 年第 27 卷第 3 期
Vol. 27,No. 3,2010
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
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黑 2008004,适应饲养 3d后供试。
1. 2 药物
药材:白鲜皮购于河北安国药材市场,经黑龙江中
医药大学中药学教研室陈效忠副教授鉴定为芸香科植
物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的干燥根皮,粉
碎成粗粉,备用。
受试药物:水洗脱物、20%乙醇洗脱物、50%乙醇
洗脱物、70%乙醇洗脱物、95%乙醇洗脱物,供药效筛
选用。
阳性对照药物:吲哚美辛肠溶片,临汾宝珠制药有
限公司,批号:090201。
空白对照药物:生理盐水,浙江济民制药有限公
司,批号:08122403。
1. 3 试剂及仪器
二甲苯(分析纯,沈阳市新西试剂厂,批号:
20061110);乙醇(分析纯,沈阳市东光试剂厂,批号:
20090429);氢氧化钠(分析纯,天津市恒光化学试剂
制造有限公司,批号:20081218);盐酸(分析纯,固安
县北方化学工业公司,批号:081216);水为蒸馏水;AB
-8 型大孔吸附树脂(河北省沧州市宝恩化工有限公
司)。
恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司,型号:
DK -98 - 1);真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公
司,型号:DZF - 6020);旋转蒸发器(上海亚荣生化仪
器厂,型号:RE5220);旋转蒸发仪(上海申胜生物技术
有限公司,型号:R -201);电子分析天平(德国赛多利
斯集团,型号:ALC -210. 4)。
2 方法
2. 1 样品溶液制备
称取白鲜皮粗粉 800g,加入 4 倍量的 95%乙醇,
于恒温水浴锅(100℃)中回流提取 2h,提取液经滤过
后,减压浓缩挥去乙醇,放入真空干燥箱中除去残留溶
剂,干燥后的样品加蒸馏水稀释至 0. 5g·mL -1,备用。
2. 2 大孔吸附树脂预处理
称取一定量的 AB -8 型大孔吸附树脂,用水漂洗
去白色混浊物,加入 95%乙醇泡 24h 使之充分溶胀,
湿法装柱,用 95%乙醇洗柱至流出液与水混合(1∶ 3)
不呈白色混浊为止,以蒸馏水洗柱至流出液无醇味,然
后用 4%NaOH溶液洗至呈碱性,浸泡 6h,以蒸馏水洗
至中性,再用 4% HCl 溶液洗至呈酸性,浸泡 6h,以蒸
馏水洗至中性,备用。
2. 3 吸附洗脱
样品溶液过预先装好的大孔吸附树脂柱进行吸
附。依次用水、20%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙
醇进行洗脱,分别收集洗脱液,减压浓缩回收溶剂,加
蒸馏水稀释至浓度为 4mg·mL -1,备用。
2. 4 阳性对照药物制备方法
吲哚美辛肠溶片,每片 25mg,实验时用蒸馏水配
置成 5mg·mL -1的溶液,备用。
2. 5 抗炎实验
取 KM小鼠 70 只,随机分成 7 组:生理盐水组,吲
哚美辛组,水洗脱物组,20%乙醇洗脱物组,50%乙醇
洗脱物组,70%乙醇洗脱物组和 95%乙醇洗脱物组。
分别灌胃给白鲜皮不同洗脱物制剂和对照药物(详见
表 1),连续 7d。末次给药 1h后,于小鼠右耳两侧均匀
涂布二甲苯 0. 05mL·只 - 1,左耳不涂作为对照,致炎
1h后脱颈处死动物,沿耳廓基线剪下两耳,用直径
9mm打孔器打下双耳同一部位圆片,用电子分析天平
精密称重,右耳片重量减去左耳片的重量即为肿胀度,
抑制率(%)=(模型组肿胀度 -给药组肿胀度)/模型
组肿胀度 × 100%。
2. 6 统计学处理
本实验中实验结果用(珋x ± s)表示,运用 SPSS 13. 0
软件统计,各受试药物组数据与对照组数据的比较均
选用 t检验。
3 结果
结果如表 1 所示,与生理盐水组比较,95%乙醇洗
脱物能明显减轻二甲苯致炎小鼠的耳廓肿胀程度
(P < 0. 01),提示 95%乙醇洗脱物均有较好的抗炎作
用;与吲哚美辛组比较,95%乙醇洗脱物抗炎作用未见
明显差异(P > 0. 05),作用与吲哚美辛相似;与生理盐
水组比较,20%乙醇洗脱物,50%乙醇洗脱物,70%乙
醇洗脱物不具有抗炎作用(P > 0. 05)。
表 1 白鲜皮不同洗脱物对二甲苯所致小鼠
耳廓肿胀的影响(珋x ± s)
组别
动物数
(只)
剂量
(g·kg -1)
肿胀程度
(mg)
抑制率
(%)
生理盐水组 10 10mL·kg -1 17. 08 ± 1. 97 -
吲哚美辛组 10 10 7. 40 ± 1. 79* 56. 67
水洗脱物组 10 50 16. 38 ± 1. 95 4. 16
20%乙醇洗脱物组 10 50 16. 11 ± 1. 87 5. 68
50%乙醇洗脱物组 10 50 15. 96 ± 1. 76 6. 56
70%乙醇洗脱物组 10 50 15. 78 ± 1. 81 7. 67
95%乙醇洗脱物组 10 50 8. 81 ± 1. 92* 48. 42
注:与空白对照组比较,* P < 0. 01。
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Vol. 27,No. 3,2010
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4 讨论
4. 1 中药提取液中有效成分的精制方法有醇沉去杂
法、有机溶剂萃取法、大孔吸附树脂吸附法、聚酰胺柱
分离法等。其中大孔吸附树脂吸附法操作简便、无污
染、成本较低,较其它方法所得提取物体积小、不吸潮、
易制成各种剂型。本研究中采用 AB - 8 型大孔吸附
树脂对白鲜皮的醇提物进行分离。AB -8 型大孔吸附
树脂为聚苯乙烯型非极性吸附树脂,该树脂的比表面
积和孔径较大,适合于吸附具有一定疏水性的中药成
分,吸附量较大,洗脱容易,吸附动力学性能良好[1]。
对热、有机溶剂和一般使用条件下的酸、碱稳定,使用
寿命较长。
4. 2 非特异性炎症是具有血管系统的活体组织对局
部损伤的反应。在炎症的早期,某些炎症介质刺激血
管,使血管扩张,血管内皮间隙扩大,血管壁通透性增
强,血管内的液体、蛋白质和白细胞等渗出到组织间
隙,随着渗出的增加,造成组织肿胀,炎症渗出组织肿
胀是急性炎症病理组织学的主要特征。本研究采用二
甲苯作为致炎因子,引起急性炎症反应,通过测定小鼠
耳廓的肿胀程度,反应出白鲜皮不同洗脱物的抗炎效
果。实验研究结果表明,95%乙醇洗脱物能抑制二甲
苯引起的小鼠耳廓肿胀,提示其具有显著的抗炎作用。
参考文献:
[1] 景怡,景荣琴,任远,等. AB - 8 大孔吸附树脂分离纯化玉米须中
总黄酮的研究[J].中医药学报,2010,38(1):75 - 77.
蝙蝠葛碱抑制肺癌细胞 QG - 56 增殖的实验研究
石玉生,张艳,王加志,张金良
(黑龙江中医药大学佳木斯学院,黑龙江 佳木斯 154007)
摘 要:目的:研究蝙蝠葛碱的抗肿瘤作用。方法:采用 MTT法测定蝙蝠葛碱对肿瘤细胞增殖反应的影
响。结果:蝙蝠葛碱(Dau)能有效抑制癌细胞株 QG - 56 细胞增殖,MTT 分析结果显示,与溶剂对照组
相比,Dau在 3. 125 ~ 50μg·mL -1浓度范围内对细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率随着 Dau浓度的增
加而增加,存在明显的剂量 - 效应关系。不同浓度 Dau 之间的抑制率比较,具有统计学差异(P <
0. 05),以 22μg·mL -1 Dau作用 72h抑制率最高(91. 23%)。结论:蝙蝠葛碱有明显的抑制肿瘤细胞株
增殖反应的作用。
关键词:蝙蝠葛碱;MTT;抑制肿瘤作用
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2010)03 - 0115 - 02
作者简介:石玉生(1982 -),男,助教,硕士,主要从事中草药活性成分
及代谢产物分析研究、中药制剂分析的教学工作。
通讯作者:张艳(1982 -),女,助教,硕士,主要从事中药质量控制研究
及分析化学的教学工作。
收稿日期:2009 - 12 - 16
修回日期:2010 - 01 - 16
北豆根始载于《中国药植志》[1]是防己科植物蝙
蝠葛(Menispermum dauricum DC)的干燥根茎 ,为北方
习用中药,性味苦、寒,有清热解毒、祛风止痛的功效。
现代药理学证明,其具有抑菌、降压和抗心律失常等作
用,常用于治疗咽喉肿痛、肠炎痢疾和风湿痹痛等症。
北豆根在治疗扁桃体炎、咽喉肿痛、牙龈肿痛方面有良
好的效果,用北豆根总碱制成的片剂和注射液已广泛
应用于临床,而关于其抗肿瘤作用国内外报道较少。
文献报道,北豆根中主要化学成分为生物碱 ,其主要
有效成分为蝙蝠葛酚性生物碱(phenolic alkaloids of
menis permum dauricum ,PAMD) ,对多种组织来源的
肿瘤细胞增殖有很强的抑制作用,而且可以诱导肿瘤
细胞凋亡,具有逆转肿瘤多药耐药作用[2 ~ 4]。本课题
组分离得到蝙蝠葛酚性生物碱中的主要成分蝙蝠葛
碱,研究表明,其对肿瘤细胞增殖有很强的抑制作用,
为蝙蝠葛碱作为抗癌新药的进一步开发提供实验
依据。
1 材料与方法
1. 1 肿瘤细胞株 人肺癌细胞株 QG -56。
1. 2 肿瘤细胞株悬液制备 常规方法培养,待细胞进
入对数生长期后,收集细胞,用 RPMI1640 培养液调浓
度为 1 × 105 个·mL -1的细胞悬液备用。
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2010 年第 27 卷第 3 期
Vol. 27,No. 3,2010
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
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