全 文 ：办
中 国 药 科 大 学 学 报 18 3
Jo uro al oC fhin a Ph arm a e e ut i ealU n
. v e: s荃 t了 9 18 7 门8 ( 3 ), 1 8 3~ 1 8 6
九里香皮抗生育物质的分离 、 效价与毒性
王淑如 吴梧布同 陈琼华
( 生物化学研究室 )
右
摘 要 本实验以不同方法从九里香M u r r a y o p a n f e o l a t a ( L . ) J a e k s皮分离 。 种抗生育
有效物质 , 并比较其效价和毒性。 其中以 S e p h a d ex G : 0柱层析一 C T A B络合物 ( V )和不络合物
(砚 ) 、磷酸氢钙吸附酸溶一 C T A B络合物 (孤 ) 、 S e p h a d e x G : 0柱层析一磷酸氢钙吸附酸溶一 C T A B
不络合物 (植 )及 S e p h a d e x G : 。。柱层析一磷酸氢钙吸附酸溶一 S e p h a d e x G : 。。柱层析物 ( l )等 5 利,
分离物的抗生育效果显著 , 小鼠腹腔注射有效剂量 分别为1 · 。 , 1 · 0 , .0 5 , 。 · 2和。 · 。6 m g / 3 0 9 , 小
鼠腹腔注射给药 L D 。。 分别为 21 , 56 , 31 , 24 和 9 · 3 m g / 2 0 9 。 狗的亚急性毒性试验 , 尿常规 、 血
象 、肝功能和肾功能均正常 , 重要脏器的病理学检查 , 均未发现有与药物有关的病变 。 豚鼠抗 原
性试验也未见有过敏症状发生 。 但家兔热源试验阳性。 化合物砚初步用于临床中期妊娠引产 , 8
例中 7 例有效 , 但也有发热发冷副反应 。
关 . 词 九里香 , 抗生育物质多 效价 , 毒性
九里香 M u r r a y a P a ” i c “ Ia t a ( L . ) J a e k s为芸香科九里香属植物 , 具有抗生育功 效川 ,
福建民间验方用为中期妊娠引产效果显著 。 其抗生育药用部位以皮的效果最 好 , 木 质部 最
差 1J 。 本文报道了以不同方法从九里香皮分离抗生育有效物质 , 比较了其效价和毒性 , 并初
步试用于临床 。
实 验 部 分
待
.
一 、 实脸材料
九里香 , 广西扶绥县采购 , S e p h a d e x G : 。。 , S e p h a d e x G : 。。 , p h a r m a e i a公司产品 。 小
鼠 (昆明种 ) , 狗 , 豚鼠 , 家兔 , 均由本校动物室提供 。
二 、 九里香皮杭生 , 有效物质的提取 、 分离和纯化
1
.粗提物 取广西产九里香皮切成小片 , 用水煎煮 2 ~ 3 次 , 合并煎液 , 浓缩 , 过池 ,
透析 。 加入三倍量 95 %乙醇 , 离心 , 沉淀相继以95 %乙醇和丙酮洗涤 , 真空干燥后磨成粉 ,
得棕褐色九里香皮粗提物 。
2
。
S e p h
a d e x G
: 。。柱层析分离物 ( I ) 将粗提物溶于水 , 离心 。 上清 液加 入 S e Ph a d e x
G “ . 层析柱 , 用蒸馏水洗脱 , 收集多糖反应 (蕙酮法 )阳性的高峰部分 , 水浴浓缩 。 加三倍量
乙醉沉淀 , 以下按 1 法处理 , 得样品 工。
3
.
C T A B络合物 ( n ) 将粗提物溶于水 , 加人 C T A B 离心 。 沉淀以热水洗 涤 后 , 加人
N
a C I溶液解析 , 再加三倍量乙醇 , 以下按 1 法处理 , 得样品 n 。
4
. 碑酸氢钙吸附酸溶物 ( 1 )及酸不溶物 ( W ) 将粗提物溶于水 , 加人磷酸氢钙 , 搅拌吸
附 3 h , 离心 。 沉淀部分以稀盐酸解析 , 离心 。 沉淀相继以稀酸和乙醉洗涤 , 真空千燥 , 即
1 981 年 1 月 . 日收摘
8 1 4}!
:国 药 科 大 学 学 报 8 1卷
得样品 lY’ 。 上 i占液部分以稀碱中和 , 加入三倍量乙醉 , 以下按 1 法处理 , 得样 .异; 1 。
5
.
S e p h a d e x G ; 。。柱层析一 C T A B 络合物 ( V )和不络合物 ( n ) 将 S e p h a d e x G ; 。 。柱层析
收集的洗脱液浓缩 , 加人 C T A B , 离心 。 沉淀部分按上述 3 法处理 , 得样 : {): V 。 上 洁 液 部
分 , 加入三倍觉乙醇 , 离心 。 沉淀以乙醇洗涤 , 直至无 C T A B , 再用丙酮洗涤 , 即得样 ;、入巩 。
6
. 磷酸氢钙吸附酸溶 一 C T A B 络合物 (珊 ) 将样品 1 溶于水 , 加人 C T A B , 离心 , 沉淀
按 3 法处理 , 得样品姐 。
7
.
S e p h a d e x G :
。。柱层析一磷酸氢钙吸附酸溶 一C T A B 不络合物 ( 姗 ) 将样品 工按样 .话 1
和巩步骤处理即得样品珊 。
8
.
S e p h a d e x G
: 。。主兰层析一磷酸氢钙吸附酸溶一S e p h a d e x G Z。 。 往 层 析 分 离 物 ( Xl ) 将
se hP ad
e x G :
。。柱层析一磷酸氢钙吸附酸溶物溶于水 , 不经 C T A B处理 , 而直接加入 S e p h a d e x
G
: 。。层析往 。 用蒸馏水洗脱 , 分部收集多糖反应阳性的高峰部分 , 水浴浓缩 , 以下按 1 法处
理 , 即得灰白色精制品 R 。
褚
三 、 九里番皮提取物抗早孕的效价比较
取 2 8 9 左右妊娠小鼠分为两组 。 给药组
于妊娠第 7或第 8天一次 印给药 , 对照组给等
量生理盐水 。 均于妊娠第 9 或第 10 天解剖 ,以
胎仔萎缩游离或排出留有痕迹者作为抗早孕
有效指标。 结果 (见附表 )表明 ,九里香粗提物
抗早孕有效剂量为 3 . o m g / 3 0 9 。 粗提物再分
别单用 S e p h a d e x G , 。。往层析或 C T A B络合
或磷酸氢钙吸附等处理 (样品 工~ W ) , 其抗
早孕有效剂量为0 。 3一 1 . o tn g / 3 0 9 , 也即效价
提高 3 . 3~ 10 倍 , 但毒副作用也大 (见下述 ) 。
如果粗提物再配合柱层析 、 吸附酸溶或 C T A B
络合两种方法处理 (样品 V 一 R ) , 其抗早孕
有效剂量为。 . 06 ~ 1 . o m g / 3 0 9 , 效价提高了
3
.
3~ 50 倍 , 而毒副作用也较低 (见下述 ) 。
四 、 九里 . 皮杭早孕物质的毒性试验
(一 )小鼠毒性试验
1
. 毒性反应初步观察 取健康小鼠分为
附表 九里香皮抗生育有效物质的效价和毒性
剂 t
样 品 ( m g / 3 0 9 ) 鼠 数
胎仔异 杭早孕
常鼠数 率 (% )
L D 二。
( i P ) ( m g / 2 0 9 ) 玲
00503浦冶2卜110IL粗提物
I
I
.吕扮
V
妞
妞
粗
互
对照组
2 0 1 9
12 1 1
10 8
5 5
15 13
7 5
2 4 2 3
10 1 0
10 8
12 1 1
2 3 15
16 1 2
3 5 1 9
2 5 1 8
CO (总 和 ) 0
9 5
9 2
乞0
10 0
8 7
7 0
9 6
1 0 0
8 0
9 2
6 5
7 5
5 4
7 2
0
2 l
5 6
3 1
2 4
9
。
3
书
注 : 祥品 , 中剂 t 为 0 . 3时 P < 0 . 01 , 其余均为 P < 0 . 0 01
两组 , 每组 10 只 。 对照组给生理盐泳 , 给药组分别一次 iP 给药 (样品 I 一 w ) , 观察d6 。 结果样
品 W剂量 s m g / 3 0 9 ,小鼠有 2邝死亡 ,而样品 I 和 n 剂量加大至 l o m g / 3 0 9才出现有少数 ( 1邝 )死
亡现象 。至于样品 1 即使剂量达到 20 m g / 30 9也未见有死亡现象。 但狗 iv 给药仍有呕吐和腹 泻
副反应 (见后述 ) 。 初步表明样品 l 毒 性 较小 , 样品 VI 毒性最大 。 综合样品 I 一 VI 的小鼠毒
性反应 : 轻者有扭体现象 , 然后呈现安静状态 , 童者除上述症状外 , 还表现出腹泻 、 竖毛 、
萎缩 、 呼吸急促 、 瘫卧不起等现象 , 严重者死亡 。 尸体解剖 , 内脏 (心 、 肝 、 肾 、 脾 、 肺等 )
有痕血及出血。 表明九里香皮粗提物分别单用柱层析法 、 络合法和吸附法处理 (样品 I 一 VI ) ,
效价虽提高许多倍 , 但仍存在一定毒副反应 。
2
. 小鼠急性 L D 。 。的测定 取体重 18 ~ 2 2 9 小鼠 50 只 , 每个样品分为 5 个剂量组 , 剂量比 苦
3 其月 王淑如等 : 九里香皮抗生育物欣的分离
、 效价与毒性
诊
毒
扮
为 1 : 0 . 7 5 , i p给药 , 观察 d6 , 记录死 亡鼠数 。 用简化机率单位手去和寇氏法计算 L D。 。 , 结果样
品 v , v l , 丫;z , \妞!不一! Xl 的 L D 。 。分别 为2 1 , 5 6 , 3 1 , 2 4和 9 . 3 m : / 2 0 9 , 而这 5 种样品的抗早孕
有效剂量分别 为 1 . 0 , 1 . 0 , 0 . 5 , 0 . 2和 0 . 06 m g / 3 0 9 ( 见上述 ) 。 从 L D 。 。 和有效剂量的关系来
看 , 样品珊和 议较好 。 表明粗提物经过纯化 , 效价分别提高 15 一 50 倍 , 同时安全范围 也相应
增大 。
(二 ) 狗的毒性试验
1
. 狗的毒性反应初步观察 选取体重 1 0 k g左右的狗分为两组 , 侮组 3 只 。 对照组注射生
理盐水 , 给药组分别 iv 给药单用层析法制品 (样品 工 ) 、 络合法制品 (样品 n ) 、 吸附法制品 (样
品班 , VI ) , 剂量为 10 m g / k g 。 结果四个给药组均出现副反应 。 样品 工 , n , 1 三组副反应
较轻 , 有流涎 、 排便现象 , 而样品 VI 毒副反应较大 , 有严重吐泻 、 瘫卧不起 、 反应迟钝 、 厌
食 、 甚至便血等 。 如果以层析 、 络合和吸附酸溶两种以上方法互相配合的制品 (样品 V ~ R )
给狗静脉注射 , 则无异常反应 。
2
. 狗的亚急性毒性试验 选取体重 l o k g 左右的狗 9 只 , 分对照组和给药组 , 每组 3 只 。
实验前检查狗的尿常规 、 血象及肝 、 `肾功能等 。 对照组给生理盐水 , 给药组分别 iv 给药样品
v 和 vI ,每次 10 m g k/ g , 炼天一次 ,连续沈 ,第 6 天检查尿常规 , 血象 , 肝 、 肾功能 , 结果均正
常 。 第 8 天处死动物 , 取出肝 、 肾 、 胃 、 肠 、 心 、 肺 、 脾 、 胰和肾上腺等脏器 , 进行病理学
检查 , 结果均未见有由于药物所引起的病变 。
(三 )豚鼠过放试验 取体重 3 0 0 9左 右的啄鼠 3 只 , 每只 i m给药 巩 0 . s m g / 3 09 , 隔 日注射
同等剂量 , 第 15 天再 iP 给药 , 剂量为 1 m g / 30 9 。 结果未见有过敏症状发生 。
(四 )家兔热源试验 粗提物及样品 VI , 姐和 R 按常规方法以家兔进行热源性试验 , 结果
均呈阳性反应 。 样品 XI 反应较轻 , 平均每只兔体温上升 0 . 7℃ 。 样品如以碱或过氧化氢等方
法处理 , 热源反应转阴 , 但效价也消失 。
五 、 临床初步观察
以样品巩在临床初步试用 于中期妊娠引产 , 羊膜囊腔给药 , 剂量 1 . 6m g / k g , 8 例中有 7
例胎儿完全自然排出 , 成功的 7 例有发热 38 一 39 . 5 “ C副反应 , 发热是在宫缩高峰时发生 。 胎
儿娩出后 , 发热也自然消退至正常 。 失败的 1 例无发热副反应 , 以前列腺素 E Z引产也未成功 。
讨 论
耳
九里香皮抗生育有效物质的分离 , 从粗提物到精制品 (样品 XI )都是设想其化学本质为生
物大分子 , 尤其是糖蛋白之类的提取 、 分离 、 纯化而设计的 。 通过分析测定 : 粗提物含总糖
3 3%
, 蛋白质 1 8% , 核酸类极微量 , 水分 1 % , 灰分 9 % , 其它 2 9% , 有效 l)t 最为 3 . Om g / 3 0自
精制品 (样品 XI )含总糖 52 % , 蛋 白质 20 % , 核酸类极微 显 , 水分 9 % , 灰分 6 % , 其它 13 % ,
有效剂量为0 . 06 m g / 3叱 , 效价提高 50 倍 。 样品 R 通过去除蛋白质 , 总补含虽 8 % , 蛋 白质和
核酸极微量 , 水分 5 % , 灰分 4 % , 其它 3 % , 已接近多糖纯品 , 但效价比样品 XI 低一倍 。
初步断定 , 九里香抗生育有效成分是糖蛋白或蛋 白多糖 。
九里香根煎剂福建民间用于中期妊娠引产数百例 `忍’ , 成功率 91 ~ 1 0 % , 但有发热 ( 3 8 . 5
~ 4 0
.
5℃ ) 及发冷副反应 。 我们以九里香皮分离物经动物实验及初步临床验证 , 其效果是肯定
的 , 但也存在有发热副反应 。 九里香蛋 白多糖 (样品 XI )及去蛋白后的九里香多糖热源试验仍
为阳性 。我们也对抗生育有效的其它多糖制品进行试验 , 同样有热源样反应 。 说明多糖 、 糖蛋白
或蛋白多锗一类引产药可能由于与热源物质有类似的化学结构而呈现热源样的发热副反应 。
8 61中 国 药 科 大 学 学 报 8 1卷
天花粉引产药 , 其化学本质是搪蛋白 , 临床应用也有发热副反应 。 J仁作用机制有报道认
为是通过前列腺素的大量释放而引起的 。 由于前列腺素有引产效果和引起发热反应 , 因此九
里香引产和发热副反应也有可能是通过前列腺素而起作用 。 临床验证也观察到 当宫缩达到最
高峰时 , 也正是发热最高峰 。 胎儿娩出后 , 发热也自然消退 , 宫缩与发热有平行关系。
九里香抗生育作用无论动物或临床试验其效果是肯定的 , 但有 发热副反应 , 影响其临床
应用 。 以碱或过氧化氢鸽多种去热潦方法处理 , 热源试验可转阴 , 但效价也随之消失 。 要保持
效价不变 , 又无发热副反应是今后急待解决的问题 。
致 姗 参加部分实验工作者 (按工作先后顺序 )有: 邹振伟 、 胡卓逸 、 张祖 荡 、 蔡 瑞 芬 、
申素琪 、 贾海滨 、 陈景月 、 张宗禹、 李玲 、 徐秀兰 、 张道中、 知 个 、徐 坚 、冯玫 华 、 任 慧 霞 、
姜庆平、 李军宁、 任金山、 许国荣 、 何冰芳、 陈昊 、 刘京丽等。
今 考 文 献
奋
.1 福建省医药研究所 . 福建药物志 .第一册 . 福州 : 福建人民出版社 , 19 79 : 2 4。
2
. 陈琼华 , 王淑如 ,张宗禹等 。见本期学报 2 13 页
I SOL AT ION
,
AC T IV IT Y AND T OX IC IT Y OF T HE AC T IV E
吟
SUBST ANCES OF ANT IF E
’
RT! L IT Y
F ROM MURRAY A P AN!C ULAT A
W
a n g Sh u r u
,
W
u
W
u t o n g a n d C h
e n Q i o n g h u a
( D i o is i o , o f B i o c h
e m i s t r y )
C o m P a r i s o n o f t h e a e t i甲 i t了 a n d t o x i e i t了 o f t h e a e t i v e s u b s t a n e e s o f
a n t i f e r t i l i t y
,
i s o la t e d f r o m t h e
e o r t e 工 o f M u r r a y a P a n f c u l a t a w i t h t e n m e t h o d s
下 a s rn a d e 。 F i丫 e a e t i v e s u b s t a n e e s a m o n g t h e m w e r e b e t t e r , t h e y w e r e :
S e P h a d e x G : 。 。 e h r o m a t o g r a p h了一C T A B e o m P l e x a n d n o n e o m p l e x , C a H PO -
a d s o r P t i o n 一 a e i d一 s o l u b le f r a e t i o n 一 C T A B e o m p l e x
,
S
e Ph
a d e x G
: 。 。 e h r o m a t o g r a p h了
一
C a H PO
一 a d s o r p t i o n a e i d一 s o lu b l e f r a e t i o n 一C T A B n o n e o m p l e x a n d S e p h a d e x
G l o 。 e h r o m a t o g r a p h y 一C a H P O一 a d s o r p t i o n a e id 一 s o l u b l e f r a e t i o n S e p h a d e x G : 。。
e il r o m a t o g
r a p h了 。 T h e s e f i丫 e s a m p le s w e r e p r o m i n e n t t o t e r m i n a t e e a r l y
P r e g n a n e了 . T h e e f f e e t i , e d o s a g e s ( i P ) f o r t e r m i n a t i o n o f m i e e e a r ly P r e g n a n e了
甲 e r e 1 . 0 , 1 。 0 , 0 . 5 , 0 . 2 , a n d 0 . 0 6m g / 3 0 9 r e s p e e t i v e l y , L D 。 。 ( i p ) i n m i e e w e r e
2 1
,
5 6
,
3 1
,
2 4 a n d g
。
3 m g / 2 0 9
r e s P e e t i v e ly
。
S u b a
e u t e t o x i e i t y t e s t i n d o g s b y
d o s i n ` i o m g / kg i , f i , e d a y s , k id n e y , 11, e r a n d o t h e r o r g a n s s h o w e d n o a n y
s i g n i if e a n t P a t h o l o g i e a l e h a n g e s
.
T h e a n t i g e n e i t y t e s t i n g i n e a 一 P i g s s h o w e d n o
a n a Ph了 l a t i c p h e n o m e n o n .
K . y w o r d s M
u r r a夕 a P a n i c o l a t a , A e t i v e s u b s t a n e e s o f a n t i f e r t i l i t了
女
澎