全 文 ：福 建 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 )
T HE JO UR N L O F AF UJ IAN E T C A HE R S UN V IE R S IT Y
( N ATR UAL SC E N C E I)
2( 3 ): 1 11一 1 1 2
,
19 86
月、 产、 尹、 训气 . 尸、 尸、 护、沪研 究 简 报
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野亚麻蝇 ( aP 绷” “ 叻再ag “ : 伽 i价 ) 幼虫体液凝集素
的提取研究简报
高分子研 究所 免疫化生物 系衰老细胞生物摹算奏熟 “ ` 题组
八十年代以来 , 日本一组科学家从人工损伤的麻蝇幼虫体液中分离到一种外源凝集
素 , 并对其结构 、 性质作了系列研究 , 试验表明该凝集素能通过诱导异种动物免疫系统
产生 Y一干扰素 、 肿瘤坏死因子和细胞毒因子而对移植肿瘤具有强烈的抑 制 与 消 除 作
用 , 认为此凝集素具有潜在开发应用价值 .
本联合课题组于今年 4月底开始研究正常 ( 无损伤 ) 野亚麻蝇幼虫体液 , 发 现 其中
也含有血球凝集活性蛋 白 , 证实这种外源凝集素可通过亲和层析方法分离获得 , 其生化
特征类似于日本学者提取的麻蝇凝集素 , 进一步试验还在进行中 .
从人工培养的 F 61 纯系野亚麻蝇成熟幼 虫收集的体依经离心弃去沉淀细胞后 , 保存
在 一 30 ℃ . 凝集素活性及糖对凝集活性影响的分析 按 照 N o w a r k 等 的方法 [ ’ 1进行 . 阴
性对照为生理盐水 , 一 阳性对照为植物血球凝集素 ( P H A ) .
凝集素的分离使用 s e p h a r o s e 4 B 亲 和柱 , 柱先以 0 . 0 1 M T r i s / H C I ( p H 7 . 9 ) 昆虫
缓冲生理盐水 ( BI S ) 平衡 , 上样后以 B ls 淋洗 , 待第一峰出现后 , 改用洗脱液洗脱 ,
DH
一” `一” 型核酸那检测仪检测一 ;聚丙烯酸胺凝胶电泳分析基本上与 D va i s 法 1zI
相同 , 采用垂直板电泳 . 胶染色用考马斯亮兰 R和
铬一银染色法 [3 1 .
不同批收集的野亚麻蝇体液 , 经 高 速 离 心处
理 , 得到淡黄色或深竭色的上清液 , 用胰酶处理戊
二醛固定的兔红细胞测定凝集活性 , 结果表明 , 在
正常幼虫体液中也含有凝集素 , 其活性不受批数及
体液颜 色影响 , 其活性滴度在 2 一 7、 2一 。 /m l 范围 .
.砰 徒
使用 蕊洲日 r os e 4 B 分离凝集素 , 实验 结 果见
图 1 . 图示经洗脱液洗脱后出现的不是 单一 峰 , 重
复试验结果相似 . 活性测定表明三个峰都具血球凝
集活性 .
一
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图 1 S e p h a r o , e 4 B 柱分离
体液中凝集素层析图
柱 Z x 1c0 m , 上样童 2 . 5m l体液 ,
流速为 3 m l / g m i n , 每管3m l .
11 2《 福 建 师 范 大 学 学 报 》 自 然 科 学 版 1 9 86年 9月
分离洗脱获得的样品和幼虫全体液进行 电泳比较 , 电泳图谱见 图2 .
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图2 纯化后样品 ( A ) 和全幼虫
体液 ( B ) 电泳图谱
胶板 1 0 X I OX l m m . 浓缩胶
A cr 3%
. 分离胶 7 .骡 , 电泳
条 件为恒压 150V . ( 人 ) 为铬
一银染色 . ( B ) 为考马斯亮
兰 R染色 .
l
参 考 文 献
〔1 ] N 6w a r k , T .
〔2〕 D a v i s , B . J
〔3〕 龚正雄等
.
e t a l
.
B i o c h e m
.
B i o P h y
.
R e s
.
C o m 恤 u . 6 8 : 6 5 0一 6 5 7 ( 1 9 7 6 ) .
A n n
.
N Y 人 e a d . S e i . 1 2 1 : 4 0 4一 4 2 7 ( 1 9 6 4 ) .
微生物学通报 1 9 8 5年第二期 .
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