全 文 ：福 建 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 )
O JU R N AL O F r U JI AN N O R M AL U N I VE R SI T 丫
C N AT U R L A SC I E N C E )
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野亚麻蝇 ( aP ar as 叮动左ag a st’ 、 `lt’s ) 幼虫凝集素
的细胞凝集和糖抑制作用 .
余萍 吴旭初 黄德棋 朱苏阂 林少琴
( i荡分子研究所 )
摘 要
野 亚麻蝇幼 曳凝集素的浏定结果表明 : 它时 人的 A 、 B 、 O 、 A B血型红细胞 , 以 及兔 、
豚鼠 、 大鼠 、 小 鼠 、 鸽子的红 细胞有凝集作用 , 其中对豚鼠红细胞投集活性最高 , 但时
牛 、 纬羊 、 鸡 、 鸭 、 龟、 蛙 , 鳝鱼 、 鲤鱼 、 泥鳅的红 细胞无凝集作用 。 对 小 鼠琳 巴细胞
凝集作用的浓度为 1 8 . 7 5协g /m l , 而 时大鼠琳 巴细 胞凝集浓度则为 1 5 0林g / m l , 计牛 的 淋
巴细胞无凝集活性 . 对肿瘤细 胞的凝集作用很不相 同 , 可凝集小 鼠的 5 180 、 S P Z0/ 、 u1 4 、
L l 细 胞 , 但不能凝集小 鼠艾氏细胞 、 大鼠W 25 6细 胞 、 人 H el a 细胞和M G C 80 一 3胃痊细
胞 . 该凝集素衬兔红细 胞的凝集作用可被 D一丰乳糖 、 N一 乙 跳氛墓半乳糖抑制 .
关锐词 : 凝集素 , 野 亚麻绳 , 细胞凝集 , 糖抑制作 用
0 弓}言
凝集素具有众多的生物学性质川 , 其中最重要的是它能识别细胞表面搪基团 , 有选
择性地凝集不同细胞 . 由于这种特性 , 它已被广泛作为分子探针 , 来研究肿瘤细胞 、 红
细胞 、 淋巴细胞的表面糖蛋白和糖脂的糖链结构 . 并被用于探讨伴随细胞生长和恶性转
化时 , 表面含糖物质的变化 .
巳经发现某些昆虫凝集素具有诱发淋巴细胞产生丫一干扰素 、 肿瘤坏死因 子 、 细 胞
毒蛋白等性质 lz[ , 但其对细胞的识别机制尚不清楚 . 基于上述原因 , 本文尝试用纯化的
野亚麻蝇凝集素来测定对糖作用的专一性 , 以及对不同动物红细胞 、 肿瘤细胞 、 淋巴细
胞的凝集活性 .
1 材料和方法
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1 材料
小鼠艾氏腹水癌细胞 、 肉瘤 5 18 0、 内瘤 u1 4和肉瘤 L l 由福州市第一医院赠送 . s P Z0/
细胞由本实验室提供 . 大鼠 w 2 56 肉瘤细胞由上海医药研究院提供 . 培养的人汽感 细 胞
( M G C 80 一 3 ) 和 H e la 细胞由福建医学院肿瘤室赠送 . 各种单糖 、 氨墓糖为 国外进 口产
带 本文于 1 9 9 1年工月 i4 日收到 .
6 7《 福 建 师 范 大 学 学 报 》 自 然 科 学 版 一。。 l年 x Z月
品 , 由中科院上海生物化学研究所赠送 . 其余试剂均系国产分析试剂 .
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2 方法
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2
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1 红细胞的分离: 人血由福建师大医院提供 , 其余血样均由本实验室采集 . 血
样均加入 A ls ve e r抗凝剂 , 离心去除血浆 . 血球用生理盐水洗涤 3~ 5次 , 最后配感2帕细
胞悬液 .
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2
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2 淋巴细胞的分离 : 大鼠 、 小鼠 、 牛的脾脏取出后 , 置于生理盐水中 , 经常规
处理后 , 用淋巴细胞分离液分离 , 并配成 1。。个细胞 /毫升 的悬液 .
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2
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3 肿瘤细胞的分离 : 小鼠腹水庙细胞 、 小鼠实体瘤细胞和人体肿瘤的分离分别
按下述方法处理 .
腹水鹿细胞: 将业已接种癌细胞的小鼠拉脱颈椎致死 , 抽出腹水 , 常规处理后配成
10 .个细胞 /毫升的悬液 .
实体瘤细胞 : 肿瘤块取出后经常规处理 , 配成 1。 ,个细胞 /毫升的悬液 .
人肿瘤细胞 : 在培养瓶中培养 84 小时的H e al 细胞和 M G 8C o一 3细胞倒去 原 培 养 液
后 , 加入。 . 25 肠胰酶置室温消化 7分钟后弃去胰酶 . 用生理盐水将细胞从瓶壁上 冲下 ,
离心洗涤2次 , 并配成约 1 0 .个细胞 /毫升的悬液 .
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2
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4 野亚麻蝇凝集素的提取 : 采集幼虫血淋巴经纯化获得的纯品 , 方法见文献 〔3〕 .
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5 血凝活力测定 : 方法见参考文献〔4〕.
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6 细胞凝集试验 : 取分散细胞 0[] ( 淋巴细胞或肿瘤细胞 ) o . l m l , 加入不同 浓
度的野亚麻蝇凝集素。 . I lu l . 4 ℃培养 2小时后吸取细胞悬液涂片 , 冷风干燥 , 甲醛固定 ,
伊红染色 , 显微镜下观察 . 用生理盐水做对照试验 。
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2
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7 血凝抑制实验: 各种糖均配成。 . 2m ol /L . 然后用生理盐水依次倍 比 稀 释 .
野亚麻蝇凝集素配成 9协s / m (I 凝集的最低浓度 ) , 以兔红细胞检测 , 方法见文献〔5〕.
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2 结果与讨论
2二 血报作用
野亚麻蝇凝集素能使多种红细胞凝集 . 已经测试的红细胞中 , 能凝集的有人 A 、 B 、 0 、
A B型红细胞 , 兔 、 豚鼠、 大白鼠 、 小白威、 鸽子的红细胞也能被野亚麻蝇凝集素凝集 .
但它不凝集小牛 、 绵羊 、 鸡 、 鸭 、 龟 、 蛙等的红细胞 . 实验结果 ( 表 l ) 表明其血 凝 作
裹 1 肠亚麻蝇凝橄索对各种红细胞的凝集作用
一矿雨 莱」 源 ’ { 血凝滴度· ’ } `细胞来源 }’ 血凝二 , -一环瓜歹一 ~下一厂一 {钾赢一厂兀厂一
B 型 , 2 4 } 大鼠 {
A B 型 ; 2` { 小鼠 {
0 型 { 2
。
{ 鸽子 }小牛 { 不凝集 } 鳝鱼 { 不凝集`“羊 { 不凝集 { 鲤鱼 { 不凝集兔 ` 卜_ ’ 6 . } 泥鳅 . } 不凝集
. 第一孔 ( 2 ’ )的野亚麻蝇凝集素浓度为。 · 3 nI g / lm , 逐孔倍比稀释 .