全 文 ：中国寄生 虫 病防 治杂 志
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20 0 4 年 8 月 第 1 7 卷第 4 欺
A u g u s t 2 0 0 4
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.
1 7
,
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.
4
》 产、 渔古 .
. 丁匕刁与诵 .
砂生槐子生物碱杀灭原头坳及抗炎作用
马兴铭 ’ , 2 , 李红玉 ” , 尹少甫 ’ , 王 波 3
l(
. 兰州大学生命科学学院 , 甘肃兰州 7 3 0 0 0 。 ; 2 . 兰州医学院免疫学教研室 ; 3 . 甘肃省康复中心 )
【摘要】 目的 研究砂生槐子生物碱体外杀细粒棘球绦虫原头坳的活性及其抗炎 和对小 鼠的急性毒性作用 。 方法
用含生物碱 ( 。 . 75 一 6 . 0 m g / m l) 的 1 6 4。 培养细粒棘球绦虫 原头勤 , 。 . 03 %亚 甲基蓝拒染法检查原头拗每天 的死亡率 ;
选择昆明小鼠 ,腹腔注射给药 1次 ,生物碱浓度从 1 5 0 m g / k g 递增 , 连续观察 1 4 d ,记 录死亡动物数 ,计算半数致死量 ;用
二甲苯诱发小鼠耳肿胀动物模型 , 观察生物碱的抗炎作用 。 结果 砂生槐子生物碱具有体外杀死原头坳 的药理活性 ,
且杀虫作用 随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强 。 对小鼠的 L sD 。 一 ( 207 . 81 士 20 . 82 ) m g / k g , 对二甲苯诱发 的小
鼠耳肿胀无明显抑制作用 。 结论 砂生槐子生物碱体外具有杀死原头拗的活性 , 对小鼠具 有中等强度 的毒性 ,但对二
甲苯诱发 的小鼠耳急性炎症肿胀无抑 制作用 。
【关键词】 砂生槐 ; 生物碱 ; 原头坳 ; 急性毒性实验 ; 抗炎
[中圈分类号 1 R 3 8 3 . 3 3 1文献标识码 1 A l文章编号 1 1 0 0 1一 6 6 2 7 ( 2 0 0 4 ) 0 4一 0 2 1`7一 0 3
砂生槐 ( S o p h o ar m o cr or ft i a n a ) 又名 “ 西藏狼牙
刺 ” 、 “ 刺柴 ” ,豆科槐属 。 多年生矮灌木 ,其茎尖和托叶
硬化为尖长刺 ,为西藏高原一特有植物种 , 在雅鲁藏布
江河谷呈大片分布 , 具有极强 的抗旱 、 耐痔 薄 、 抗风沙
等生态适应性 和很 好的防风 固沙 、 保持水 土功能川 。
藏医药记载 2j[ , 砂生槐多以种子人药 , 味苦性凉 , 消炎
解毒 、催吐 , 主治湿热黄疽 、 白喉 、 痢疾 、 赤巴病 、 消化不
良 、 虫病等 , 是一种极为宝贵的植物药用资源 。 为充分
开发其药用价值 ,作者等从砂生槐种 子中提取了亲脂
性生物碱 ,研究其对小鼠急性毒性 、 抗炎作用及体外抗
细粒棘球绦虫原头坳作用 。
材料与方法
1 材料
1
.
1 仪器与药物 C O Z细胞培养箱 ( U S A ) ;倒置显微
镜 ( O l y m p u s , J a p a n ) ; JV C 显微成像系统 ( J a p a n ) ; A d -
ve nt ur er MT 天平 (奥豪斯国际贸易有限公司 ) ; 二 甲亚
矾 ( D M S O ) 为华 美公 司 产 品 。 砂 生槐 子 生 物碱 用
D M SO 配成 3 0 0 m g / m l ( D M S O 终浓度 < 0 . 1% ) ,灭
菌后 一 2 0℃冰箱保存 。
1
.
2 原头坳 常规方法从宰杀 的棘球 拗病羊肝包囊
中无菌采集囊液 , 用灭菌生理盐水 (含青霉素 、 链霉素
各 5 0 U /m l) 反复洗涤原头坳 , 0 . 03 %亚甲基蓝染色
镜检 ,原头拗存活率达 95 % 以上 。
1
.
3 动物 昆明种小 鼠 ,普通级 ,体重 18 ~ 2 9 , 由兰
州医学院动物实验室提供 (合格证号 : 1 4一0 5 ) 。
2 方法
2
.
1 体外杀原头勤试验 参考文献「3 , 4」略改动 。 取
原头坳 0 . 3 m l ( 2 . 0 X 1 0 3 /m l )接种于 4 . 7 m l 的 1 6 4 0
培养液中 , 每瓶约含 6 0 0 个原头拗 , 培养 24 h 后加
药 ,设阴性对 照组 (不加药物 , 加 。 , 1% D M S O ) 、 药物
实验组 ( 生物碱终浓度分别为 0 . 75 一 6 . 0 m g /m l) 和
阿苯达哇对 照组 [不加 生物碱 , 加 阿苯达 哇 ( A l be n -
d a z o l e
,
A B Z ) 2 0 拜g / m l〕 , 每组 3 个 培养瓶 , 置 3 7 aC 、
5% C O
: 饱和湿度的培养箱中培养 , 分别于培养后 1 、 3 、
5
、
7 d 在倒置显微镜下观察原头坳的活动情况 。 同时
吸培养液 10 0 川于载玻片上 ,用 0 . 03 %亚甲基蓝染色
1 m in
, 加盖玻 片在显微镜 下观察 , 若 ) 2 3/ 的虫体着
色或虫体不活动即判断为死虫 ,计数 20 0 个原头蜘 ,计
算校正死亡率〔 3 , ` 〕 , 并用数码成像系统照像 。
2
.
2 急性毒性试验 参考寇 氏法 〔漏〕 ,将小 鼠随机分
5 组 , 每组 10 只 ,雌雄各半 。 腹腔注射给药 1 次 , 最小
剂量 1 50 m g / k g , 其余各组按等比级数递增 ,给药容量
为 O , 1 m l / 10 9 。 连续观察 议 d ,记 录毒性反应情况和
死亡小鼠数 , 对死亡小 鼠进行剖检 , 肉眼观察病变情
况 。
2
.
3 抗炎试验 将 47 只小鼠随机分 4 组 ,雌雄不限 。
第 1 组为空白对照组 , 2 一 4 组为生物碱组 , 分别按 80
m g / k g
、
4 0 m g / k g
、
2 0 m g / k g 体重 给药 , 给药容量 为
0
.
1 m l/ 10 g
,腹腔注射给药 ’ l h 后 ,于右耳正反面均匀
涂以 0 . 1 m l 二 甲苯致炎 , 4 卜后处死小鼠 ,沿耳廓基线
剪下双耳 ,于同一部位用打孔器 (直经 6 . 5 m m ) 冲下
耳片 , 以两耳片重量之差为肿胀度 , 计算肿胀抑制率 。
肿胀抑制率一 (对照组肿胀度一药物组肿胀度 )/ 对照组
肿胀度 X 1 0 % 。
2
.
4 统计分析 用 N D S T 软件计 算 I J D S。 ; 用 S P S S
软件 ( 8 . 0 ) 的 G e n e r a l L i n e a r M o d e l ( G L M 一G e n e r a l
l 通讯作者 1 -E m a i l : lih y @ l: u . e d u . 。 n
【作者简介】 马兴铭 ( 19 6 9一 ) {男 (汉族 ) , 甘肃人 , 2。。 3 年毕业兰
州医学院病原生物学专业 ,硕士 , 现为兰州 医学 院免疫学教研室
副教授 ,主要从事中药免疫药理研究 。
-E m a i l
:
m i n g x m@ 1 63
.
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中国寄生 虫病 防 治杂 志
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0
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ǎ享à考周七。三飞乞套。ǎ享à铃们限邹日
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c ot ir a l
,
L D )S 统计处理各剂量组原头拗体外培养不
同时间的死亡率 ; 用 o en 一Way A N O V A ( L D )S 统计处
理肿胀度 。
结 果
1 杀虫效果
砂生槐子生物碱各剂量组原头坳体外培养不同时
间的死亡率见表 1 。 经双因素方差分析 ( F 一 20 . 34 , 尸
< 0
.
0 1 )
,生物碱各剂量组原头蜘死亡率与 D M S O 对
照组 比较差异有显著性 (尸 < 0 . 0 5 ) ,药物组 ( 1 . 5一 6 . 0
m g / m l) 原头坳死亡率与阿苯达哇组 比较差异有显著
性 ( P < 0 . 0 1 ) , 生物碱 1 . 5 m g / m l 、 3 . 0 m g / m l 、 6 . 0
m g / m l 组间原头坳死亡率差异无显著性 (尸 > 0 . 05 ) 。
说明砂生槐子生物碱在体外具较强杀灭细粒棘球绦虫
原头坳作用 , 1 . 5 m g / m l 以上剂量的生物碱体外杀原
头坳的作用明显强于阿苯达哇 。 生物碱浓度增加 , 作
用时间延长 , 原头坳的死亡率上升 ( 图 1 、 图 2 ) 。
12 0
1o
培养时间 (天 ) In c u b a t i o n t im e (da y )一 0 . 7 5m gl m l一 l . 5m0 砂m l· 0 · .3 o m创m l 一一拭- - .6 00 m创m l
图 2 生物碱体外杀原 头蜘 的时效 曲线圈
F i g
.
2 M
o r t a l i t y i n d i f fe er n t i n e u b a t i o n t ime
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P r o t o s e o l e x ter
a t e d w i th a lk a l o id s
表 l 砂生槐子生物碱 各剂 . 组原头勤体外
培养不同时间的死亡率
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e 1 T h e m o r t a l i t y o f Pr o t o s e o l e x t r e a t e d w i t h
a lk a l o id s i n d i f比 er n t i n c u b a t i o n t i幻n e
分组 死亡率 M o r t a l i t y (% )
G r o u P s —( m g / m l ) 1 d 3 d 5 d 7 dD M S ( ) 对照 2 . 1 8 . 6 1 4 . 6 2 9 . 1 图 3 0 . 1 % D M S O 对照组原头蝴体外培养 s d 的光镜结果F ig . 3 M i e or g r a p h o f por t o s e o l e x t r e a t e d w i t h 0 . 1%D M SO ( co n t r o l ) fo r 5 d a y 《A , B : 2 0 0 X , C : 4 0 0 X ).769524óO口弓d门J只é月了,.…门O口IC八b内匕ō了八óO口gdù30乙5门zC.…八jo白9`几匕J住ōd 工几卜月Oóho乙13270.54D M S ( ) C o n t r o l0 . 7 51 . 5 03 . 0 06 . U U阿苯达哩对 照A B Z C o n t r o l0020山.1 00642ǎ承à考翎七ouJ飞-。趁口ǎ李à瓣们以澎旧
0 7 5 1
.
5 3 6
浓度 e o n e e n t ta t i。。 ( m gl m l )
一 1 d a y es . se 3 day 一司卜- s d盯 - 令~ 7 d盯
图 1 生物碱体外杀原 头蜘 的t 效曲线图
F ig
.
1 M o r t a l i t y o f P r o t o s e o l e x t r e a t e d w i th d i f fe re n t e o n e e n t ra t i o n
a l k a l o id s fr o m t he f i r s t t o s e v e n t h d a y
图 4 生物碱组 《3 . 0 m g / m ” 原头蜘体外培养 s d 的光镜结果
F ig
.
4 M i e r o gr a P h o f P ro tos e ol e x trea
t e d w i t h a lk al o i d s 《3 . 0 m g / m l )
fo r 5 d a y 《A : 4 0 0 X ; B , C , D : 20 0 X )
2 虫体形态及结构变化
光镜下可见生物碱组原头蝴多呈外翻型 , 吸盘变
形 ,顶突破坏 ,外表粗糙 、 起泡 、 肿胀 , 虫体结构模糊 ,钙
粒减少或消失 ,小钩脱落或排列不整齐 ,对照组原头坳
结构正常 (图 3 、 图 4) 。
3 L D , 。结果
小鼠腹腔注射生物碱后 , 14 d 内共死亡 25 只 ,在
3 0 m in 内死 亡小 鼠 24 只 , 占小 鼠死 亡总数 的 96 %
( 2 4 / 2 5 )
, 经 N D S T 软 件 处 理 , L D S。 = ( 2 0 7 . 8 1 士
2 0
.
8 2 ) m g /m l
,
9 5 %可信 限为 1 8 8 . 0 3 ~ 2 2 9 . 6 7 m g /
中国寄生 虫病防 治杂志
C丙 in J Pa ra s it D is Co n
2 0 0 4年 8 月 第 17 卷第 4期
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ug us t 2 0 0 4, V o l
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N o
.
4 2 1 9
m l
,相关系数 R 一 0 . 98 。 小 鼠死亡前的主要反应 : 毛竖
起 、 兴奋 、 惊跳 。 解剖胸腔和腹腔 , 肉眼观察未见异常
病变 ,死亡小鼠无性别差异 。
4 对二 甲苯诱发小鼠耳肿胀的影响
砂生槐子生物碱对二甲苯诱发的小 鼠耳肿胀无明
显抑制作用 ( F 一 。 . 2 6 8 , 尸> 0 . 0 5 ) , 肿胀抑制率最高为
1 1
.
3 5%
,结果见表 2 。
表 2 砂生槐子生物碱对二 甲苯诱发的小鼠耳肿胀抑制效果
T a bl e 2 E f f e e t o f a lk a l o i d s i P o n r n o u se ea 卜 s w e l l i gn
i n d u e曰 by d ime th y一加 n z e en (牙士 : )%
分组 ( m g / k g )
G r o u p ( m g / k g )
空白对照组
C o n t r o l
8 0
40
20
小鼠数
N o
.
o f m ie e
肿胀度 ( m g )
S w e l li n g de g r e e ( m g )
7
.
3 1士 3 . 28
抑制率 (% )
In hib it io n ( % )
作用 〔卜 ` ’ 〕 。 砂生槐子生物碱体外杀灭细粒棘球绦虫
原头拗的作用是否与这 4 种生物碱有关 , 或其他的杀
灭细粒棘球绦虫原头坳成分 1 , 有待进一步证实 。
砂生槐子生物碱腹腔注射 , 小 鼠的急性毒性实验
L D S。 = ( 2 0 7
.
5 1 士 2 0 . 5 2 ) 1 m g / k g , 9 5 % 可 信 限 为
1 8
.
03 一 2 29 . 67 m g / k g ,对止 甲苯诱发的小 鼠耳肿胀
无抑制作用 , 参考我国中药的毒性分级标准 〔5〕和李建
华〔’ 2 〕报道的 L D S。值的毒性分级标准 , 以及美 国和前苏
联的化学药物毒性分级 ,砂生槐子生物碱属于中等毒
性的药物 。 关于砂生槐子生物碱 的毒性 , 可能的靶器
官 ,损伤的性质及可逆程度 、致死原因及机理等有待深
人研究 。 「
::
7
.
15士 2 . 16
6
.
48士 3 . 03
了. 3 1士 2 . 05
2
.
19
1 1
.
35
0
,
00
讨 论
细粒棘球绦虫幼虫寄生 于人体 内引起棘球 坳病
( 即包虫病 ) , 为全球性的公共卫生问题 。 目前对包虫
病 的治疗 ,手术仍然是主要的手段 ,但因手术并发症以
及术后复发等问题 , 使药物治疗包虫病逐渐受到人们
的重视 ,积极寻找抗包虫病的新药 已成为包虫病防治
研究中的一项 重要 课题川 。 本实验采用体外培养 方
法 ,对砂生槐子生物碱杀灭细粒棘球绦虫原头蜘的作
用进行了研 究 。 结果表 明 , 砂 生槐子生物碱 0 . 75 ~
6
.
0 m g / ml 浓度均具有明显 的体外杀灭原头坳作用 ,
是具有开发前景的药用植物资源 。 崔建芳等川用薄层
光密 度法 分 析砂 生 槐种 子 至 少含 有 4 种 生 物 碱 :
1
.
6 4%氧化苦参碱 、 0 . 5%氧化槐果 碱 、 o , 1 72 % 苦参
碱 、 。 . 0 05 %槐果碱 。 研究证明上述生物碱 具有调节
B c l
一
2 蛋白表达 、 抗肿瘤 、 抑菌 、 抑病毒 、 抗心率失常 、 正
性肌力 、 抗缺氧 、 扩血管 、 降血脂 、 调节免疫等多种药理
【参考文献】
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T H E S T U D Y O N K I L L IN G P R O T O SC O L E X A C T I V I T Y A N D A N T I
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