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龙爪槐叶和茎中挥发油的GC-MS分析及活性研究



全 文 :华西药学杂志
W C J·P S 2016,31(5)∶490 ~ 494
基金项目:国家大学生创新创业训练项目(编号:201612216022)
作者简介:卫强,硕士,副教授,从事天然药物活性成分的研究工作。Email:weiqiang509@ sina. com
龙爪槐叶和茎中挥发油的 GC - MS分析及活性研究
卫 强,翟义祥,孙 涛,高 静
(安徽新华学院药学院,安徽 合肥 230088)
摘要:目的 分析龙爪槐叶和茎挥发油中的化学成分,并考察挥发油的活性。方法 采用超临界 CO2 萃取龙爪槐叶和茎的
挥发油,并用 GC - MS法分析其化学成分;考察挥发油的体外抗菌及抗氧化活性。结果 从龙爪槐叶的挥发油中鉴定了 49 个
化合物,主要有棕榈酸(7. 86%)、亚油酸(5. 80%)、4 - 乙烯基 - 2 - 甲氧基苯酚(5. 32%)、4 - 乙基 - 2 - 甲氧基苯酚
(5. 20%)、Z - 3 -己烯 - 1 -醇(5. 11%)、叶绿醇(4. 77%)和大马士酮(4. 47%);从茎的挥发油中鉴定了 31 个化合物,主要
有正己醇(5. 92%)、3 -烯丙基 - 6 -甲氧基苯酚(4. 63%)和 3 -甲基丁醛(4. 12%)。叶挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
的抑制作用较强,其最小抑菌浓度(MIC)分别为 0. 062、0. 031 mg·mL -1,同时对 DPPH自由基、亚硝酸盐、ABTS、超氧阴离子也
有较强的清除作用。结论 龙爪槐叶的挥发油具有较强的抗菌、抗氧化活性,具开发利用价值。
关键词:龙爪槐;叶;茎;超临界 CO2 萃取;挥发油;气相色谱 -质谱联用技术;化学成分;抗菌;抗氧化
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 - 0103(2016)05 - 0490 - 05
DOI:10. 13375 / j. cnki. wcjps. 2016. 05. 016
Analysis of essential oils from leaves and stems of Sophora japonica by GC - MS and the
study of their activities
WEI Qiang,ZHAI Yixiang,SUN Tao,GAO Jing
(Pharmacy School,Anhui Xinhua University,Hefei,Anhui,230088 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To analyze the chemical constituents of essential oils from leaves and stems of Sophora japonica var.
pendula and to investigate their activities. METHODS The volatile oils in the leaves and stems of S. japonica were extracted by
supercritical CO2 extraction,separated and identified by GC - MS,and inspected for their antimicrobial and antioxidant activities in
vitro. RESULTS Forty - nine components were identified from the volatile oil of the leaves,in which main constituents were n - hexa-
decanoic acid (7. 86%),Z,Z - 9,12 - octadecadienoic acid(5. 80%) ,4 - ethyl - 2 - methoxy - phenol(5. 32%) ,4 - ethyl - 2 -
methoxy - phenol (5. 20%) ,Z - 3 - hexen - 1 - ol(5. 11%) ,phytol(4. 77%) ,and E - 1 - (2,6,6 - trimethyl - 1,3 -
cyclohexadien - 1 - yl)- 2 - buten - 1 - one(4. 47%). Thirty - one components were identified from the volatile oil of the stems,in
which main constituents were 1 - hexanol(5. 92%) ,3 - allyl - 6 - methoxyphenol (4. 63%) ,and 3 - methyl - butanal(4. 12%). The
volatile oil of the leaves showed strong inhibiting activities against Escherichia coli and Staphylococcus aureus with the MIC concentration
of 0. 062 mg·mL -1 and 0. 031 mg·mL -1 . Besides,it also exhibited good scavenging activity against DPPH,NO2 - radical,ABTS radical,
and superoxide anion radical. CONCLUSION The volatile oil in the leaves has high antimicrobial and antioxidant activities,so that it
can be further developed.
Key words:Sophora japonica var. pendula;Leaf;Stem;SFE - CO2;Volatile oil;GC - MS;Chemical components;Antimicrobial
activities;Antioxidant activities
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 - 0103(2016)05 - 0490 - 05
豆科槐属龙爪槐 Sophora japonica var. pendula
别名蟠槐、垂槐[1]。对龙爪槐中挥发油成分及其活
性的研究较少,采用常规的水蒸气蒸馏法提取挥发
油会破坏其热敏性成分,影响活性[2]。超临界 CO2
萃取技术可实现常温提取,适合热不稳定性天然产
物的提取和分离[3]。现首次以超临界 CO2 萃取龙
爪槐叶和茎中的挥发油,以 GC - MS 法分析其化学
成分,并研究挥发油的抗菌及抗氧化活性,可为其开
发利用奠定基础。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
HA221 - 50 - 01 型超临界萃取设备(江苏南通
华安超临界有限公司);5975B /6890N 型气相色
谱 -质谱联用仪(美国 Agilent)。伤寒沙门氏菌
Salmonella typhimurium、大肠杆菌 Escherichia coli、变
形杆菌 Proteus vulgaris、假丝酵母 Candidaspp、枯草
杆菌 Bacillus subtilis、白色念珠菌 Canidia albicans、
绿脓杆菌 Pseudomonas aeruginosa、金黄色葡萄球菌
Staphylococcus aureus(中国菌种保藏中心);龙爪槐
叶、茎于 2013 年 10 月采自安徽合肥大蜀山,经李启
照副教授鉴定,标本存于安徽新华学院药学院实验
室;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 挥发油的提取 取龙爪槐叶、茎药材,阴干,
粉碎,过 24 目筛,各取 200 g,置超临界 CO2 萃取釜
中。萃取条件为:萃取釜的压力 30 MPa,温度
22 ℃,萃取时间 90 min;分离釜Ⅰ的压力 10 MPa,温
度 12 ℃,分离釜Ⅱ的压力 8 MPa,温度 10 ℃。循环
萃取 3 次,萃取物经减压蒸馏得到挥发油,用无水硫
酸钠脱水,得近无色液体。计算得龙爪槐叶、茎中挥
发油的平均收率分别为 0. 16%、0. 09%。
1. 2. 2 GC - MS 条件 采用 HP - 5 MS 石英毛细
管柱(30 m ×0. 25 mm,0. 25 μm),载气为高纯氦,分
流比 50∶1,进样量 1 μL;程序升温,柱的起始温度
为 50 ℃,保持 2 min 后以 5 ℃·min -1升至 150 ℃,
保持 2 min,再以 5 ℃·min -1升至 250 ℃,保持
5 min,再以 5 ℃·min -1升至 280 ℃,保持至完成分
析。电子轰击(EI)能量 60 eV,扫描范围 m/z 25 ~
550,离子源温度 220 ℃,接口温度 280 ℃,全离子
扫描。
1. 2. 3 挥发油的 GC - MS 分析 按“1. 2. 2”项
GC - MS条件分析龙爪槐叶、茎中的挥发油。通过
检索 NIST2011 数据库和核对文献,鉴定挥发油的化
学成分,并用峰面积归一化法计算各化合物的相对
含量。龙爪槐叶、茎中挥发油的总离子流图和主要
化学成分的鉴定结果见图 1 和表 1、2。从龙爪槐叶
的挥发油中鉴定出 49 个化合物,占挥发油总量的
88. 29%,主要由脂肪族化合物、芳香族化合物和萜
类化合物组成。其中,脂肪族成分有 26 种,芳香族
成分有 12 种,萜类成分有 11 种,相对含量分别为
46. 46%、24. 67%、17. 16%。挥发油中相对含量在
4%以上的化合物有:棕榈酸(7. 86%)、亚油酸
(5. 80%)、4 -乙烯基 - 2 -甲氧基苯酚(5. 32%)、
4 -乙基 - 2 -甲氧基苯酚(5. 20%)、Z - 3 -己烯 -
1 - 醇(5. 11%)、叶绿醇(4. 77%)、大马士酮
(4. 47%)。从龙爪槐茎的挥发油中鉴定出 31 个化
合物,占挥发油总量的 67. 01%,主要由萜类化合
物、脂肪族化合物、芳香族化合物组成。其中,萜类
成分有 5 种,脂肪族成分有 20 种,芳香族成分有 6
种,相对含量分别占 10. 85%、45. 24%、10. 92%。
挥发油相对含量在 4% 以上的化合物有:正己醇
(5. 92%)、3 -烯丙基 - 6 -甲氧基苯酚(4. 63%)、
3 -甲基丁醛(4. 12%)。龙爪槐叶、茎挥发油中共有
的成分有 6种,分别为:苯甲醛、1,2,3 -三甲苯、正己
醇、8 -丙氧基 -柏木烷、大马士酮、6,10,14 -三甲
基 -2 -十五烷酮。其中,前两者在叶中的含量较低
(0. 62%),在茎中的含量较高(2. 11%)。后两者在
叶、茎中的含量均较高(叶 7. 79%、茎 5. 75%)。
1. 2. 4 抗菌试验 以环丙沙星为对照,制备环丙沙
星、龙爪槐茎和叶的挥发油的肉膏平板培养基,浓度
依次为 2、1、0. 5、0. 25、0. 125、0. 062、0. 031、0. 016
mg·mL -1。在以上培养基上分别接种伤寒沙门氏菌、
大肠杆菌、变形杆菌、假丝酵母、枯草杆菌、白色念珠
菌、菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌,移入培养箱中,
4 8 12 16 20 24 28 32
4 8 12 16 20 24 28 32
A
B
t/min
图 1 龙爪槐叶(A)和茎(B)挥发油的总离子流图
Figure 1 Total ion chromatograms of the volatile oil from the leaves(A)and stems(B)of Sophora japonica
194第 5 期 卫 强,等。龙爪槐叶和茎中挥发油的 GC - MS分析及活性研究
表 1 龙爪槐叶挥发油中的化学成分
Table 1 Chemical constituents identified in the essential oil from the leaves of S. japonica
No. tR /min Compounds Molecular formula Matching rate /% Contents /%
1 3. 336 1 - methoxy - 2 - propanol C4H10O2 97 0. 76
2 3. 460 1,8 - nonadien - 3 - ol C9H16O 94 0. 80
3 4. 301 3 - methyl - 1 - butanol C5H12O 96 0. 62
4 4. 919 toluene C7H8 98 0. 57
5 5. 559 4 - methyl - 3 - penten - 2 - one C6H10O 97 0. 66
6 6. 448 furfural C5H4O2 98 0. 61
7 7. 067 Z - 3 - hexen - 1 - ol C6H12O 96 5. 11
8 7. 387 1 - hexanol C6H14O 93 1. 44
9 7. 929 cyclohexanol C6H12O 94 0. 03
10 8. 156 cis - 2 - methyl - cyclopentanol C6H12O 97 0. 07
11 10. 201 benzaldehyde C7H6O 96 0. 57
12 10. 673 1 - octen - 3 - ol C8H16O 98 0. 04
13 10. 819 6 - methyl - 5 - hepten - 2 - one C8H14O 96 0. 06
14 11. 118 1,2,3 - trimethyl - benzene C9H12 95 0. 05
15 11. 660 (E,E)- 2,4 - heptadienal C7H10O 96 0. 04
16 11. 931 2,6 - dimethyl - 1,5,7 - octatrien - 3 - ol C10H16O 96 0. 02
17 12. 696 benzeneacetaldehyde C8H8O 97 2. 18
18 13. 488 α - methyl - α -[4 - methyl - 3 - pentenyl]oxiranemethanol C10H18O2 95 2. 39
19 13. 759 nona - 3,5 - dien - 2 - ol C9H16O 94 0. 52
20 13. 981 cis - 2 -(5 - methyl - 5 - vinyltetrahydro - 2 - furanyl)- 2 - propanol C10H18O2 96 2. 61
21 14. 328 13 - tetradece - 11 - yn - 1 - ol C14H24O 97 0. 86
22 14. 453 3,7 - dimethyl - 1,5,7 - octatrien - 3 - ol C10H16O 97 1. 96
23 14. 773 phenylethyl alcohol C8H10O 97 1. 39
24 15. 933 E,Z - 2,6 - nonadienal C9H14O 98 0. 93
25 16. 280 4 - ethyl - phenol C8H10O 95 2. 10
26 16. 351 2 - isopropylidene - 3 - methylhexa - 3,5 - dienal C10H14O 96 3. 26
27 16. 600 6 - ethenyltetrahydro - 2,2,6 - trimethyl - 2H - pyran - 3 - ol C10H18O2 94 0. 28
28 17. 316 1,3,3 - trimethylcyclohex - 1 - ene - 4 - carboxaldehyde C10H16O 96 1. 42
29 17. 810 2,3 - dihydro - benzofuran C8H8O 98 3. 47
30 19. 241 nonanoic acid C9H18O2 97 0. 62
31 19. 388 4 - ethyl - 2 - methoxy - phenol C9H12O2 97 5. 20
32 20. 429 2 - methoxy - 4 - vinylphenol C9H10O2 96 5. 32
33 21. 541 eugenol C10H12O2 98 1. 25
34 22. 257 E - 1 -(2,6,6 - trimethyl - 1,3 - cyclohexadien - 1 - yl)- 2 - buten - 1 - one C13H18O 95 4. 47
35 22. 430 10 -(acetylmethyl)- (+)- 3 - carene C13H20O 96 0. 70
36 22. 972 4 -(2,6,6 - trimethylcyclohexa - 1,3 - dienyl)but - 3 - en - 2 - one C13H18O 98 1. 34
37 24. 035 6,10 - dimethyl - 5,9 - undecadien - 2 - one C13H22O 99 1. 26
38 25. 711 2,4 - bis(1,1 - dimethylethyl)- phenol C14H22O 92 1. 40
39 26. 752 3,7,11 - trimethyl - 1,6,10 - dodecatrien - 3 - ol C15H26O 94 1. 15
40 26. 948 3 - hexen - 1 - ol - 1 - benzoate C13H16O2 95 1. 17
41 27. 566 8 - propoxy - cedrane C18H32O 96 1. 22
42 28. 455 13 - heptadecyn - 1 - ol C17H32O 96 1. 30
43 28. 602 n - hexadecanal C16H32O 98 1. 42
44 28. 976 tetradecanoic acid C14H28O2 97 1. 35
45 29. 416 6,10,14 - trimethyl - 2 - pentadecanone C18H36O 96 3. 32
46 30. 429 n - hexadecanoic acid C16H32O2 96 7. 86
47 30. 630 Z -(13,14 - Epoxy)tetradec - 11 - en - 1 - ol acetate C16H28O3 98 2. 55
48 31. 199 phytol C20H40O 99 4. 77
49 31. 346 Z,Z - 9,12 - octadecadienoic acid C18H32O2 94 5. 80
于 37 ℃培养 48 h,计算环丙沙星、龙爪槐茎挥发油、
龙爪槐叶挥发油的最小抑菌浓度(MIC)。通常情况
下 MIC < 7. 81 mg·mL -1为高度敏感的天然抗菌药
物[4]。龙爪槐叶、茎中挥发油对伤寒沙门氏菌、大
肠杆菌、变形杆菌、假丝酵母、枯草杆菌、白色念珠
菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的 MIC 值均 < 7. 81
mg·mL -1,显示较强的抗菌作用。其中,龙爪槐叶中
挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄糖球菌的抑制作用
较强,其 MIC 值分别为 0. 062、0. 031 mg·mL -1
(表 3)。
294 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷
表 2 龙爪槐茎挥发油中的化学成分
Table 2 Chemical consitutuents identified in the essential oil from the stems of S. japonica
No. tR /min Compounds Molecular formula Matching rate /% Contents /%
1 3. 162 3 - methyl - butanal C5H10O 97 4. 12
2 4. 274 2 -(1,1 - dimethylethyl)- 3 - methyl - oxirane C7H14O 98 2. 79
3 4. 919 hydrazinecarboxylic acid,phenylmethyl ester C8H10N2O2 95 1. 30
4 5. 657 trans - 2 - methyl - cyclopentanol C6H12O 96 1. 35
5 6. 421 furfural C5H4O2 94 2. 82
6 7. 018 3 - hexen - 1 - ol C6H12O 96 3. 30
7 7. 387 1 - hexanol C6H14O 98 5. 92
8 10. 201 benzaldehyde C7H6O 97 1. 09
9 11. 118 1,2,3 - trimethyl - benzene C9H12 97 1. 02
10 11. 160 5 -(1 - methylpropylidene)- 1,3 - cyclopentadiene C9H12 96 1. 44
11 11. 465 4,4 - dimethyl - cyclohex - 2 - en - 1 - ol C8H14O 98 1. 16
12 12. 696 4 - methyl - 2,4,6 - cycloheptatrien - 1 - one C8H8O 95 1. 32
13 12. 967 cyclopropanecarboxylic acid - decyl ester C14H26O2 96 1. 18
14 13. 439 pentyl - cyclopropane C8H16 98 2. 67
15 13. 981 2 -(5 - Ethenyl - 5 - methyl - oxolan - 2 - yl)propan - 2 - ol C10H18O2 99 1. 30
16 14. 355 3,7 - dimethyl - 1,6 - octadien - 3 - ol C10H18O 92 2. 82
17 17. 512 pterin - 6 - carboxylic acid C7H5N5O3 94 1. 36
18 18. 032 geranyl vinyl ether C12H20O 95 1. 20
19 18. 726 Z - 3,7 - dimethyl - 2,6 - octadien - 1 - ol C10H18O 96 2. 41
20 19. 290 2 - methyl - cinnamaldehyde C10H10O 96 2. 76
21 19. 788 4 - ethyl - 2 - methoxy - phenol C9H12O2 98 0. 12
22 20. 603 2,6,10,10 - tetramethyl - 1 - oxa - spiro[4. 5]dec - 6 - ene C13H22O 97 1. 02
23 21. 541 3 - allyl - 6 - methoxyphenol C10H12O2 96 4. 63
24 22. 257 E - 1 -(2,6,6 - trimethyl - 1,3 - cyclohexadien - 1 - yl)- 2 - buten - 1 - one C13H18O 96 2. 96
25 24. 355 2,5,5,6,8α - Pentamethyl - trans - 4α,5,6,7,8,8α - hexahydro -
gamma - chromene
C14H24O 98 2. 62
26 27. 566 8 - propoxy - cedrane C18H32O 99 3. 01
27 28. 157 cis - 2,3,4,4α,5,6,7,8 - octahydro - 1,1,4 α,7 - tetramethyl - 1H -
benzocyclohepten - 7 - ol
C15H26O 95 1. 27
28 28. 455 1,7 - dimethyl - 4 -(1 - methylethyl)- spiro[4. 5]dec - 6 - en - 8 - one C15H24O 97 1. 31
29 28. 602 E - 2 - octadecadecen - 1 - ol C18H36O 95 1. 24
30 29. 616 6,10,14 - trimethyl - 2 - pentadecanone C18H36O 98 2. 79
31 30. 755 1 - heptatriacotanol C37H76O 97 2. 71
表 3 龙爪槐叶和茎中挥发油与环丙沙星抗菌实验的 MIC值(mg·
mL -1,n =3)
Table 3 Antimicrobial MIC of the essential oils from the leaves and
stems of S. japonica and Ciprofloxacin(mg·mL -1,n =3)
Microbial strains
Volatile oil
leaves stems
Ciprofloxacin
Salmonella typhimurium 0. 125 0. 250 0. 031
Escherichia coli 0. 062 0. 125 0. 062
Proteus vulgaris 0. 125 0. 125 0. 062
Candidaspp 0. 125 0. 250 0. 500
Bacillus subtilis 0. 125 0. 500 0. 062
Canidia albicans 0. 125 0. 500 0. 500
Pseudomonas aeruginosa 0. 500 0. 250 0. 125
Staphylococcus aureus 0. 031 0. 125 0. 031
1. 2. 5 抗氧化试验 以维生素 C(VitC)为阳性对
照,分别考察龙爪槐叶、茎中挥发油对 DPPH 自由
基、NaNO2、2,2’-联氮基 -二 -(3 -乙基苯并二氢
噻唑 - 6 -磺酸)二铵盐(ABTS)自由基和超氧阴离
子自由基的清除活性。精密称取 39. 6 mg DPPH 置
100 mL量瓶中,用 80%乙醇溶解并定容,取 5 mL置
50 mL 量瓶中,再用 80%乙醇定容,得 0. 2 mmol·
L -1DPPH溶液。将龙爪槐叶、茎挥发油和 VitC分别
用 80%乙醇稀释成 0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1、1. 2 mg·
mL -1的供试品溶液。精密量取供试品溶液 1 mL,置
5 mL试管中,加入 DPPH 溶液 1 mL,避光反应 30
min,于 517 nm处测定吸光度。以 DPPH 溶液为空
白对照,每个浓度平行操作 3 次,计算清除率[1]。以
清除率为纵坐标、浓度为横坐标绘制曲线,得回归方
程为:Y叶 = 63. 88X + 8. 446(r
2 = 0. 9610)、Y茎 =
67. 90X + 1. 753(r2 = 0. 9790)、YVitC = 56. 84X +
3. 026(r2 = 0. 9730)。当浓度为 1. 2 mg·mL -1时,三
者对 DPPH自由基清除率的大小依次为:叶挥发油
(87. 1%)>茎挥发油(78. 3%)> VitC(72. 8%);当
清除率为 50%时,叶挥发油、茎挥发油、VitC 的浓度
分别为 0. 65、0. 71、0. 83 mg·mL -1(图 2A)。取上述
不同浓度的供试品溶液各 1 mL,置 5 mL试管中,加
入 10 μg·L -1NaNO2 溶液 1 mL,于 37 ℃下避光反应
30 min。加入 4 g·L -1对氨基苯磺酸溶液 2 mL,摇
394第 5 期 卫 强,等。龙爪槐叶和茎中挥发油的 GC - MS分析及活性研究
匀,静置 5 min,再加入 2 g·L -1N - 1 -萘乙二胺盐
酸盐 1 mL,摇匀,静置 10 min,于 540 nm 处测定吸
光度(Ai)。以相应空白试剂来测定吸光度 A0,同
时,用 1 mL 80%乙醇代替 NaNO2 同法操作,测定吸
光度 Aj,计算清除率
[2]。以清除率为纵坐标、浓度
为横坐标绘制曲线,得回归方程为:Y叶 = 52. 34X +
15. 19(r2 = 0. 9880)、Y茎 = 36. 97X + 14. 18(r
2 =
0. 9850)、YVitC = 44. 87X + 13. 17(r
2 = 0. 9890)。当
浓度为 1. 2 mg·mL -1时,三者对亚硝酸盐清除率的
大小依次为:叶挥发油(77. 6%)> Vit C(68. 0%)>
茎挥发油(57. 5%);当清除率为 50%时,叶挥发油、
茎挥发油、VitC的浓度分别为 0. 66、0. 97、0. 82 mg·
mL -1(图 2B)。取 20 mg ABTS,精密称定,置锥形瓶
中,分别加入蒸馏水 5 mL、1. 0 mg·mL -1过硫酸钾 4
mL,室温下避光反应 12 h,移入 100 mL 量瓶中,加
入 15 mL蒸馏水,用 80%乙醇定容,得 ABTS 溶液。
在 5 支试管中分别滴入上述不同浓度的供试品溶液
0. 2 mL和 80%乙醇 0. 8 mL,再加入 1 mL ABTS 溶
液,摇匀,放置 5 min,于 734 nm 处测定吸光度 Am。
以 1 mL 80%乙醇作空白对照来测定吸光度 A0,计
算清除率[2]。以清除率为纵坐标、浓度为横坐标绘
制曲线,得回归方程为:Y叶 = 68. 71X + 9. 133(r
2 =
0. 9500)、Y茎 = 55. 64X + 4. 200(r
2 = 0. 9490)、YVitC =
56. 07X + 8. 166(r2 = 0. 9700)。当浓度为 1. 2 mg·
mL -1时,三者对 ABTS清除率的大小依次为:叶挥发
油(85. 6%)> VitC(70. 2%)>茎挥发油(65. 5%);
当清除率为 50%时,叶挥发油、茎挥发油、VitC 的浓
度分别为 0. 59、0. 82、0. 75 mg·mL -1(图 2C)。取
0. 05 mol·L -1三羟甲基氨基甲烷 - 盐酸缓冲液
(pH8. 2)5 mL 于试管中,水浴中保温(25 ℃)15
min,分别加入不同浓度的供试品溶液1 mL、2. 5
mol·L -1邻苯三酚 0. 5 mL,水浴中保温(25 ℃)5
min,快速滴入 2 滴 8 mol·L -1HCl,于 420 nm处测定
吸光度 Ax,以 1 mL蒸馏水作空白来测定吸光度 A0,
计算清除率[4]。以清除率为纵坐标、浓度为横坐标
绘制曲线,得回归方程为:Y叶 = 66. 52X + 2. 713
(r2 = 0. 9940)、Y茎 = 63. 21X - 2. 166(r
2 = 0. 9770)、
YVitC = 59. 51X - 4. 126(r
2 = 0. 9930)。当浓度为 1. 2
mg·mL -1时,三者对超氧阴离子清除率的大小依次
为:叶挥发油(80. 5%)>茎挥发油(70. 2%)> Vit C
(67. 6%);当清除率为 50%时,叶挥发油、茎挥发
油、VitC 的浓度分别为 0. 71、0. 82、0. 91 mg·mL -1
(图 2D)。
Cl
ea
ra
nc
e
ra
te
/%
volatile oil of stem
Vc
volatile oil of leaf
C/mg·mL-1
90
60
30
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
90
60
30
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
90
60
30
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
90
60
30
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
A B C D
图 2 龙爪槐叶和茎中挥发油对 DPPH自由基(A)、亚硝酸盐(B)、ABTS(C)和超氧阴离子(D)的清除能力
Figure 2 Scavenging activities of against DPPH(A),NO2 - radical(B),ABTS radical(C)and superoxide anion radical(D)of the essential
oils from the leaves and stems of S. japonica
2 讨论
酚羟基是抗氧活性基团,其清除过氧自由基的
过程是通过脱氢反应来产生较稳定的苯氧自由基和
过氧化物[5]。龙爪槐叶中挥发油的清除作用可能
与多种酚类成分有关,其酚类成分的相对含量占
24. 67%(高于茎挥发油中的 10. 92%)。对 DPPH
自由基、亚硝酸盐、ABTS、超氧阴离子的清除率为
50%时,龙爪槐叶中挥发油的浓度依次为 0. 65、
0. 66、0. 59、0. 71 mg·mL -1,表明其具较强的抗氧化
作用。
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收稿日期:2015 - 06 - 23
494 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷