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含羞草石蜡切片的制作



全 文 :含羞草(Mimosa pudica L.),又称“知羞草”,属于豆科植
物,具二回羽状复叶,掌状排列,总柄很长,基部膨大成叶枕,受
到触动即闭合下垂。全株生有茸毛及锐刺,盛夏以后开花,粉红
色的头状花序像一团团小绒球。萼钟状,有 8个小齿,花瓣 4
个,雄蕊 4个。荚果 2~5节,每节含一粒种子。含羞草原产美洲,
现已归化于热带各地,是我国广东常见的杂草。
含羞草受到刺激时叶片便下垂,含羞草的这种敏感运动虽
然是长期的自然选择下形成的保护反应,但引起了很多科学家
的兴趣。一些学者认为是电刺激产生的动作电位解说,另外一
些研究者认为是化学物质所致,还有人研究认为是其叶子的特
殊结构和功能所致,但至今未见进一步的报道。笔者尝试运用
石蜡切片法观察含羞草叶片的表面结构,以提供从解剖学上观
察和研究其结构和产生运动变化的理论基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料
含羞草采自广东省揭阳职业技术学院苗圃;石蜡为上海标
本模型厂生产,熔点为 54~56 ℃。
1.2 仪器与试剂
主要仪器:旋转式石蜡切片机(浙江科迪仪器设备有限公
司),KD- 202 恒温箱(上海博迅实业有限公司),GZX- 9246
MBE水浴锅(上海博迅实业有限公司),X21FS1奥林巴斯光学
显微镜(日本奥林巴斯公司)等。
主要试剂:冰醋酸、乙醇、二甲苯、番红、固绿、加拿大树
胶等。
1.3 取材与固定
FAA固定液的配制:3份无水乙醇 +1份冰醋酸;取含羞草
合并时的叶片,将其浸入到 FAA固定液中,约 30 min。
1.4 脱水与透明
1.4.1 脱水 将固定液中的材料取出,用 50%乙醇反复冲洗
几遍,然后转入 60%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→95%乙醇
(Ⅰ)→95%乙醇(Ⅱ)→无水乙醇中脱水,在 60%、70%、80%乙
醇中脱水各 30 min,在 95%乙醇和无水乙醇中脱水各 5 min。
因为在高浓度的溶液中,如果停留时间过长,容易导致材料变
硬。
1.4.2 透明 脱水后的材料依次移入 2/3无水乙醇 +1/3二甲
苯→1/2无水乙醇 +1/2二甲苯→1/3无水乙醇 +2/3二甲苯→二
甲苯(I)→二甲苯(II)中透明,前 3步各级停留 30 min,进入纯
二甲苯时停留 10 min,以防时间过长导致材料收缩或变脆。在
进入纯二甲苯中时,若材料周围出现乳状浑浊,说明材料中仍
残留水分,应退回脱水过程重新脱水,然后再透明。
1.5 浸蜡与包埋
1.5.1 浸蜡 在盛有材料及二甲苯的烧杯中加入与二甲苯等
量的石蜡,然后加盖放在 45 ℃恒温箱中,经 1~2 d石蜡不再继
续熔化为止,打开杯盖,并将恒温箱调到 60 ℃,让二甲苯慢慢
蒸发,约 24 h后,用镊子将材料拨入盛有融熔石蜡的烧杯中,
每隔 2~5 h换 1次纯蜡,共换 2次,使留在组织中的透明剂完
全排除后包埋。
1.5.2 包埋 将已融化的纯石蜡迅速倒入纸盒中,片刻间纸
盒底部即能凝固一薄层,随即将材料用已加热的镊子移入纸盒
内,并迅速将材料按照所需的切面整齐排好(切面朝向底部)。
在这个过程中,镊子要不断的在酒精灯上加热,沿纸盒和材料
的周围轻轻移动,将材料周围的气泡赶出,同时也使得材料和
四周的石蜡温度一致,避免石蜡凝固后和材料发生分离。待石
蜡的表面凝固一薄层时,平稳的将纸盒放入冷水中,使石蜡迅
含羞草石蜡切片的制作
赵 云 1,李 涛 1,陈增洁 2
1.揭阳职业技术学院,广东 揭阳 522051;2.潍坊职业学院,山东 潍坊 261041
摘 要:通过对含羞草进行取材、固定、脱水、透明、浸蜡、切片、脱蜡、染色、透明等一系列过程的试验研究,掌握了含羞草石
蜡切片的制作方法,总结出了含羞草石蜡切片制作过程中的关键技术,并通过显微观察分析,从解剖学上为研究含羞草的运
动机理提供了理论基础。
关键词:含羞草;石蜡切片;显微镜
中图分类号:S545 文献标识码:A 文章编号:1002- 204X(2011)04- 0045- 02
Manufaction of Paraffin Section on Mimosa pudica
ZHAO Yun et al (Jie Yang Vocational and Technical College,Jieyang,Guangdong 522051)
Abstract Manufacture method of paraffin section on Mimosa Pudica was mastered by experimental research of drawing materials,
fixing, dewatering, transparence, waxing, section,dewaxing,dyeing, etc. In this present study, the key technology of
manufacturing paraffin section on Mimosa pudica were summarized,which provided the foundation for further researching motion
mechanism of Mimosa pudica on anatomy by microscopic observation and analysis.
Key words Mimosa pudica;Paraffin section;Microscope
作者简介:赵云(1985- ),女,山东安丘人,助教,从事药用植物学
研究。
收稿日期:2011- 03- 05
宁夏农林科技,Ningxia Journal of Agri. and Fores. Sci.&Tech. 2011,52(04):45- 46 45
速凝固。
1.6 切片、贴片
1.6.1 切片 拆去纸盒,将蜡块修成梯形(有材料的一面较
小,另一面较大,容易粘在载蜡器上),装在切片机上,将蜡块切
成 10~14 μm的薄片。
1.6.2 粘片 配制赫伯特粘贴剂,溶液甲:明胶 1 g+蒸馏水
100 mL+甘油 15 mL+石碳酸 2 g;溶液乙:甲醛 4 mL+蒸馏水
100 mL。
在擦净的载玻片上滴上 1滴溶液甲,用洁净的小手指涂
匀,然后加上 1~2滴溶液乙,然后用小镊子将蜡片(光滑面朝
下)轻放在载玻片上,再把载玻片放在水浴锅盖上(温度为 45
℃左右),蜡片受热后慢慢展平。待完全展平后,用解剖针将切
片位置拨正,将其放在 45 ℃左右恒温箱内烤干。
1.7 脱蜡、复水
将烤干的切片依次放入二甲苯(I)→二甲苯(II),各级 5
min,以溶去切片上的石蜡。复水是将脱蜡后的切片经各级浓度
酒精逐渐下降到水的过程,即将二甲苯(Ⅱ)中取出的切片按照
1/2二甲苯 +1/2 纯酒精→无水酒精→95%酒精→85%酒精→
70%酒精→50%酒精的顺序,各级中停留 5 min,进行复水。
1.8 染色
配制番红、固绿染液。番红染液:0.5 g番红 +100 mL 50%
酒精;固绿染液:0.5 g固绿 +100 mL 95%酒精。
将切片在番红染液中染色 24 h,然后用 50%酒精洗去染
料,再转到 70%酒精→85%酒精→95%酒精中,各级 5 min。继
而进入固绿染液中染色 1~10 min,然后用 95%酒精将染液冲
洗干净。
1.9 脱水、透明和封片
切片依次入 95%酒精→无水酒精(I)→无水酒精(Ⅱ),各
级中停留 5 min,进行脱水。然后切片依次入 1/2二甲苯 +1/2纯
酒精→二甲苯(I)→二甲苯(Ⅱ)中透明,各级停留 5 min。完成
上述过程后,就可用加拿大树胶制成永久封片。
2 结果与分析
经过“1.3”至“1.9”一系列过程制得的永久制片,其组织完
整,细胞界限清楚,切片干净,表皮被番红染成红色,叶肉细胞
被染成绿色。经过石蜡切片并显微镜观察所得结果如图 1~3
(见封 3)所示。
2.1 含羞草叶片表面显微结构
由图 1可知(见封 3:图 1),含羞草叶片表面上有形状不同
的块状隆起,隆起上有细丝状毛样结构,下表皮上的块状隆起
较上表皮的多。表皮上的短柄腺毛较少,腺柄单细胞,腺头 3~
4个细胞,有的腺毛似由小管样毛组成,而且长短不一,下粗上
细。还有一些管样腺毛似乎有节,似竹节状。摧测这些腺样体可
能会分泌与运动相关的物质。
2.2 含羞草叶片石蜡切片横切、纵切图析
通过叶片横切(封 3:图 2)和纵切(封 3:图 3)发现,含羞草
叶片的导管非常发达,有利于水分和无机盐的迅速传递。于是
可以推测,当含羞草受到刺激时,便分泌一种物质,这种物质沿
着导管迅速传递给活细胞,引起细胞的兴奋,导致叶片下垂。后
续研究将继续通过对叶枕、叶柄进行解剖结构分析,以找到引
起含羞草运动的原理。
3 结论
因含羞草一碰即合并,因此该研究只是得到含羞草叶片合
并时的解剖结构。今后可通过一系列方法得到含羞草叶片张开
时的解剖结构,然后将两者比较,观察其结构的变化,从而在解
剖学上进一步解释含羞草的运动机理。
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责任编辑:高晓余
文著作奖。可以看出,对科研岗位的专业技术人员进行了比较
全面的激励制度设计。而管理岗位的激励形式非常单一,基本
上只有岗位津贴一项激励措施。而事业单位的管理岗位相对较
少,提供给管理人员的晋升机会远远少于科研岗位提供给科研
人员的专业职务晋升机会。这样就使在管理岗位工作的人员,
经济上看不如科研岗位实惠,政治上又不利于个人成长的。长
此以往,会使已经在管理岗位的人员不能安心本职工作,工作
上出工不出力或少出力,使新参加工作的人员不愿意到管理岗
位工作。这样的形势非常不利于管理人才队伍建设。一个组织,
如果没有一支素质优良、充满活力的管理人员队伍,同样会影
响到整个组织的全面、协调、可持续发展。
激励能使人的潜力得到最大限度的发挥。事实上,在正确
的激励工作中,需要的是各种理论的融会贯通。激励既是组织
成员个人努力、取得成绩、得到奖励、达到个人目标的过程,也
是激励理论正确运用、选择的过程,这表明了激励工作充满科
学性与艺术性,决不能采取“重赏之下,必有勇夫”的做法。
科研机构的工作人员绝大多数都受过高等教育,知识结构
广,技术水平高,无论是科研人员还是管理人员,他们对工作环
境需求较为苛刻,对工作成就需要较高。随着社会竞争的加剧,
他们越来越关心个人竞争力的提升。他们更看重尊重、自我实
现等高层次需要的满足。所以,制定科学合理、全面高效的激励
约束机制非常重要,这是特别需要农业科研单位人力资源管理
者重视和思考的课题。
责任编辑:王银惠
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52卷 04期赵 云,等 含羞草石蜡切片的制作46