全 文 ：中 药 研 究
藏药砂生槐子生物碱抗炎抑菌活性的研究
马兴铭1 ,李红玉1 ,尹少甫1 ,王波2
(1.兰州大学生命科学学院 ,甘肃 兰州 730000;2.甘肃省康复中心 ,甘肃 兰州 730000)
摘　要:目的:观察砂生槐种子生物碱体外抗炎抑菌活性 。方法:用 KB法和最低抑菌浓度测定进行研
究 ,用二甲苯诱发小鼠耳肿胀动物模型观察其抗炎作用 。结果:砂生槐种子生物碱(2-16mg·0.01ml-1)
具有抑制金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌的生长繁殖的活性 ,形成抑菌环;对二甲苯诱发的小鼠耳急性炎
症肿胀无抑制作用。结论:砂生槐子生物碱能抑制金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、铜绿假单胞菌的生长
繁殖 ,对小鼠耳急性炎症肿胀无抑制作用 。
关键词:砂生槐;生物碱;抑菌;抗炎
中图分类号:R285　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2004)05-0023-02
收稿日期:2004-04-12
作者简介:马兴铭(1969-),男 ,硕士 ,副教授 ,主要从事中药免疫调控机
理和抗菌药物合成与筛选的研究工作。
　　砂生槐(Sophora Moorcroftiana ,SM)又名“西藏狼牙
刺” 、“刺柴” ,豆科槐属。多年生矮灌木 ,其茎尖和托叶
硬化为尖长刺 ,产于西藏波密 、拉萨 、米林等地 ,为西藏
高原一特有植物种 ,具有极强的抗旱 、耐瘠薄 、抗风沙
等生态适应性和很好的防风固沙 ,保持水土的功能。
在雅鲁藏布江河谷呈大片分布[ 1] 。藏医药记载[ 2]砂生
槐多以种子入药 ,味苦性凉 ,清热解毒 、催吐 ,主治湿热
黄疸 、白喉 、痢疾 、赤巴病 、消化不良 、虫病等 ,是一种极
为宝贵的植物药用资源 ,但是目前当地群众仅利用其
植株作为生活燃料或牲畜饲料 。为充分开发其药物利
用价值 ,笔者从砂生槐种子中首次提取了亲脂性总生
物碱 ,研究了其抑菌抗炎的药理作用 ,为开发砂生槐植
物资源的药用价值提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　取样
收集自然群落中成熟果实的种子 ,严格挑出虫粒
和杂质 ,将干种子在磨碎机上磨碎 ,过 40目筛备用。
1.2　砂生槐子生物碱提取[ 3]
用15倍体积的 0.5%盐酸水溶液(pH=1)少量多
次浸泡 ,首次 2d ,依次 1d 、12h 、6h ,酸水液用三氯甲烷
萃取除去脂类成分 ,回收酸水液经浓氨水调 pH=10 ～
11 ,放置 24h ,碱水液氯仿多次萃取 ,常压蒸馏浓缩萃
取液 ,获得粗生物碱 ,再重复进行酸水液氯仿萃取-碱
水液氯仿萃取 ,得亲脂性总生物碱 ,将其溶于二甲亚砜
(DMSO ,DMSO终浓度小于 0.1%),灭菌备用。
1.3　砂生槐子生物碱体外抑菌实验[ 4、5]
1.3.1　试剂与菌株　MH 琼脂 、MH肉汤 、平板菌落计
数琼脂:杭州微生物试剂厂;细菌菌株:金黄色葡萄球
菌(S.aureus)CMCC(B)26003 、大肠埃希菌(E.coli)CM-
CC(B)44102:甘肃省药检所提供;金黄色葡萄球菌
(S.aureus)A209 、大肠埃希菌(E.coli)ATCC25922:兰州
医学院基础医学院免疫学教研室提供。
1.3.2　菌液制备　取试验菌种接种于 MH 琼脂平板
培养基中 ,35℃培养 14h ,用MH 液体培养基制备菌悬
液 ,菌液浓度为 15×108CFU(colony forming unit , CFU)/
ml和 5.5×105CFU/ml备用。
1.3.3　含药纸片制备　每张纸片(直径 6mm)含药物
样品分别为 2mg 、4mg 、8mg 、16mg , 阴性对照分别是
0.5%DMSO水溶液 ,空白对照 0.85%生理盐水 。
1.3.4　K-B 法　取菌液浓度为 1.5×108CFU/ml的
菌株 0.2ml ,均匀涂布整块 MH 琼脂培养基表面 ,室温
3 ～ 5min 后 ,贴加含药纸片 ,置入 35℃孵箱培养 16 ～
18h ,测定其纸片周围抑菌环直径的大小 。
1.3.5　最低抑菌浓度测定[ 5](MIC)　用 MH 液体培养
基(2ml/管)将药物(160mg/ml)对倍稀释成系列浓度 ,
每个浓度 2 个复管 , 然后加入 0.1ml 浓度为 5.5 ×
105CFU/ml菌液混匀 ,在 35℃孵箱培养 24h ,以法度为
·23·中医药学报 2004 年第 32卷第 5 期
指标检查该管中有无细菌生长 ,以不显示混浊试管的
终浓度为最低抑菌浓度 ,不易观察结果者 ,转种 MH固
体培养基确定是否抑菌。
1.4　砂生槐子生物碱对小鼠耳肿胀的影响
1.4.1　动物 　昆明健康种小鼠 , 普通级 ,体重 18 ～
22g ,兰州医学院动物实验室提供 。
1.4.2　二甲苯诱发小鼠耳肿胀的实验模型　小鼠随
机分 4个组 ,雌雄不拘 ,给药容量为 0.1ml/10g ,腹腔注
射给药 1次 , 1小时后于右侧耳壳正反两面均匀涂以
0.1ml二甲苯致炎 ,4h后处死动物 ,沿耳廓基线剪下双
耳 ,于同一部位用打孔器(直径 6.5mm)冲下耳片 ,以两
耳片重量之差为肿胀度 ,计算肿胀抑制率 。肿胀抑制
率=(对照组肿胀度-药物组肿胀度)/对照组肿胀度。
1.5　统计分析　SPSS 软件(8.0)的 One-Way ANOVA
统计处理 。
2　实验结果
2.1　砂生槐种子生物碱抑菌结果
实验以金黄色葡萄球菌代表革兰氏阳性(G+)菌 ,
以大肠埃希菌代表革兰氏阴性(G-)菌 ,对砂生槐种子
总生物碱进行体外抑菌药理活性的初步研究 ,其生物
碱的抑菌结果见表 1。砂生槐生物碱显著抑制 G+金
黄色葡萄球菌 、G-大肠埃希菌的生长繁殖 ,形成抑菌
环;浓度越大抑菌环直径越大 ,尤其对金黄色葡萄球菌
的抑制效应更显著(图 1-2)。砂生槐种子总生物碱
对金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌的最低抑菌浓度见表
2。
表 1　砂生槐子生物碱抑菌结果 ( x±s)
Bacterium strain 2mg 4mg 8mg 16mg 0.85%NaCl 0.5%DMSO
S.aureus
CMCC(B)26003 8.92±0.45 11.83±0.58 16.16±0.61 20.00±0.75 — —
E.coli
CMCC(B)44102 7.58±0.37 8.91±0.45 10.58±0.75 12.17±0.86 — —
S.aureus
A209
8.92±0.47 11.92±0.55 16.17±0.61 20.08±0.78 — —
E.coli
ATCC25922
7.67±0.36 9.08±0.45 10.58±0.82 12.16±0.86 — —
F检验 P<0.05 P<0.05 P<0.01 P<0.01
表 2　砂生槐子生物碱的最低抑菌浓度
strain
concent ration
(CFU·ml-1)
MIC
(mg·ml -1)
S.aureus CMCC(B)26003 5.5×105 9.47
E.coli CMCC(B)44102 5.5×105 28.94
S.aureus A209 5.5×105 9.47
E.coli ATCC25922 5.5×105 28.41
表 3　砂生槐子生物碱对二甲苯诱发小鼠耳肿胀的影响
( x±s)
croup=(mg/ kg) Number Swelling
degree(mg) Inhibition(%)
Control(0.2ml) 12 7.31±3.28
Alkaloids 80 10 7.15±2.16 2.19
Alkaloids 40 13 6.48±3.03 11.35
Alkaloids 10 12 7.31±2.05 0.00
　　F-test:F=0.268, P>0.05
2.2　对二甲苯诱发小鼠耳肿胀的影响
砂生槐子生物碱(LD50207.81±20.82mg·kg-1已另
文报道)对二甲苯诱发的小鼠耳肿胀无抑制作用(P >
0.05),肿胀抑制率最高是 11.35%,结果见表 3。
图 1　砂生槐子生物碱抑菌的量效曲线图
3　讨论
实验首次从砂生槐种子中提取亲脂性总生物碱 ,
进行体外抑菌活性研究。实验表明砂生槐子生物碱具
有抑制G+金黄色葡萄球菌 、G-大肠埃希菌生长繁殖
的药效 ,尤其对金黄色葡萄球菌的抑制作用更显著 ,这
种抑菌的差异性可能与 G+葡萄球菌与 G-大肠埃希
菌细胞结构不同有关 ,浓度与抑菌效应呈正相关 ,而其
最低抑菌浓度亦较大 ,提示砂生槐子总生物碱中所含
的有效抑菌成分含量较少。在 10mg·kg-1 ～ 80mg·
kg-1剂量时 ,砂生槐子生物碱对二甲苯诱发的小鼠耳
·24· ACMP.October, 2004 , Vol.32 , No.5
图 2　砂生槐子生物碱抑菌图
肿胀炎症无抑制作用 。崔建芳[ 8]等人用薄层光密度法
分析砂生槐种子至少含有四种生物碱:1.64%氧化苦
参碱 、05%氧化槐果碱 、0.172%苦参碱 、0.005%槐果
碱。有关来源于其它植物的四种生物碱活性研究已经
有多篇报道 ,具有抗肿瘤 、抑病毒 、调节 myc/ ras的表
达 、调节免疫及心血管功能等多种药理学作用 ,砂生槐
种子生物碱抑菌效应是否与这些生物碱有关 ,各成分
之间有无协同 ,有待将生物碱分离纯化后进一步研究
其有效成分及抑菌的机理 。
参考文献:
[ 1] 　中国科学院青藏高原综合科学考察队.西藏植物志(第二卷)
[M] .北京:科学出版社 , 1985.717.
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ciprofloxacin, andnorfloxacin ingenetically related strains of staphyloccus
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报, 1993 , 8(5):75-79.
[ 8] 　崔建芳 ,章现德.苦参等四种槐属植物药中生物碱的分析.中药通
报, 1986 , 2(11):38-39.
鱼腥草素同系物对小鼠免疫影响的研究
袁吕江1 ,李学刚1 ,何红梅2
(1.西南农业大学基础科技学院药用资源化学研究所 ,重庆 北碚 400716;
2.西南农业大学食品安全检测中心 ,重庆 北碚 400716)
摘　要:鱼腥草素同系物(烷酰基乙醛亚硫酸钠)的浓度增加以及鱼腥草素同系物碳原子数增加都提高
小鼠的碳廓清指数K;同时 ,还使小鼠脾脏 NK细胞活性增加 ,且随烷基碳原子数的增加顺序增强;对免
疫器官重量无影响。在相同浓度下 ,小鼠的碳廓清指数 K和鱼腥草素同系物碳原子数呈线性关系(K=
aX+b ,X=carbon number 2)。鱼腥草素同系物能够提高小鼠血清中溶菌酶的活力 ,随浓度增加增幅加
大 ,最大可达 20%。体外试验结果表明:鱼腥草素同系物低浓度时提高溶菌酶活力 ,高浓度时抑制酶活
力。研究结果表明:延长鱼醒草素碳链的长度可以寻找到有高免疫促进作用的新型鱼腥草素衍生物 。
关键词:鱼腥草素同系物;碳廓清指数K;NK细胞活性;溶菌酶活性
中图分类号:R825.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2004)05-0025-04
收稿日期:2004-05-06
　　鱼腥草(Houttuynia Cordata Thunb)具有清热解毒 、
消痈排脓 、利尿通淋的功效 ,为常用的食药两用型中草
药。现代药理研究发现 ,鱼腥草抗菌谱广 ,不但具有抗
生素的抗菌作用 ,更具有抗生素没有的抗病毒 、提高免
疫力 、镇咳祛痰 、解热镇痛等作用 ,且没有耐药性 、菌群
失调 、肝肾功能受损等毒副作用 ,因而对于病毒引起的
诸多疾病有独特的疗效。临床应用于呼吸系统疾病 ,
诸如上呼吸道感染 、流行性感冒 、急慢性支气管炎 、肺
炎等 。
鱼腥草的主要抗菌活性成分为鱼腥草素((癸酰乙
醛),由于癸酰乙醛不仅不溶于水 ,而且不稳定;常常转
化为既有一定水溶性又稳定 ,而且抗菌活性不变的“葵
酰乙醛亚硫酸盐”使用[ 1] 。根据鱼腥草素的分子结构 ,
合成的“新鱼腥草素”(十二酰乙醛亚硫酸盐)也具有类
似鱼腥草素的活性。由于合成鱼腥草素和新鱼腥草素
具有的抗菌消炎和提高免疫等多种生物学功能 ,现在
·25·中医药学报 2004 年第 32卷第 5 期
ABSTRACTS FROM ORIGINAL ARTICLES
Clinical study of stroke disease treated by huang long tong luo cap-
sule
ZHANG Gui-bo , CHENG Wei-ping , YV Xiao-xi
Abstract:Objective:TO Observe clinical curative effect of Huang long
Tongluo capsule to cerebral apoplexy.Methods:Random contrast experi-
ment was adopted to observe 120 patients.Treatment group of Huang
long Tong Luo capsule was 90 cases and contxast group of zhong feng
Hui chun Tablet was 30 cases , Time of treatment of two group was 28
days all.Results:Apparent rate of Huang long tong luo capsule group
was 72.2% and total effective rate was 93.33%, Apparent rate of zhong
feng Huichun Tablet group was 40% and total effective rate was
83.33%.Conclusion:Huang Long Tongluo capsule had effeet of absorb-
ing clots and activating cannals , supplementingqi and activating blood
cirulation.It could evidently better patients clinicalsymptom , physical
sign and lower viscosity of blood plasma , pressure volume of RBC , fi-
brous proteinogen.It could adjust confusion of lipid metabolism , better
state of hy pertension.It was a effective medicine to cerbral apoplexy.
Author s address:Heilongjiang University of TCM , Harbin 150040 ,
China
Key words:Huang long Tong luo capsule;Stroke Disease;Deficiency of
qi and blood stasis;Clinical study;
(Original article on page 9)
The study on bacteriostasis and anti-inflammatory activity of al-
kaloids from sophora moorcroftiana seeds
MAXing-ming , LI Hong-yu , YIN Shao-fu
Abstract:Objective:In order to sdudy alkaloidsfrom sophora moorcrof-
tiana seeds bacteriostasis and anti-inflammatory effect.Methods:The
bacteriostasis activity of alkaloids in vitro were tested with KB method
and minimal inhibitory concentrations(MIC).Using the models of
dimethy lbenzene-induced mouse ear swelling , the anti-inflammatory
effect of alkaloids were evaluated.Results:There is a dramatic bacte-
riostasis activity of alkaloids(2-16mg·0.01ml-1)on Staphyloccus au-
reus , Escherichia coli and Patina aerugionsa.The more concentrations of
alkaloids are , the more bacteriostasis loop diameter is.It has no suppres-
sive effect on mouse ear swelling by dimethylbenzene-induced(P >
0.05).Conclusions:Alkaloids from Sophora moorcroftiana seeds have
bacteriostasis activity on Staphyloccus aureus , Escherichia coli and
Patina aerugionsa in vitro , and no anti-inflammatory effect on mouse
ear swelling.
Author s address:Lanzhou University , Lanzhou 730000 , China
Key words:Sophora Moorcroftiana;Alkaloid;Bacteriostasis;Anti-in-
flammatory
(Original article on page 23)
Effeets of houttuyfonate homologues on immnunity of mouse
YUAN Lv-jiang , LI Xue-gang , HE Hong-mei
Abstract:Carbon granular expurgation index K and NK cellular activity
increases with the augmentation of both concentrations and carbon num-
bers of Houttuyfonate homologues , and the correlation of K to carbon
number can expressed quantitatively as K=aX+b(X=carbon number
2)when tests at a fixed concentration.Lysozymease activity in serum
and natural killing cellular activity behave an improvement trend in the
experiment.Further research in vitro confirms that the activity of
ly sozymease can be enhanced by -Houttuyfonate at low concentration
and inhibited at higher concentration.The weight of immune organs of
mouse shows no notable changs during the experiment.The experimental
results indicate that a new compound with higher immunization activity
may be discovered by prolongation of C-chain of Houttuyfonate homo-
logues.
Author s address:1.Institute of Chinese Herb Resource , Southwest A-
gricultural University , Chongqing 400716 , China;2.Inspection center of
food safety , Southwest Agricultural University , Chongqing 4007l6 , China
Key words:Houttuyfonate homologues;Carbon granular expurgation in-
dex K;NK cellular activity;Lysozymease activity
(Original article on page 25)
The similar function as insulin of the chalcone in Cortex cinnamomi
LI Zong-xiao;WEN Pu-hong;YUAN Mei-juan
Abstract:In order to further reveal the chemical substance basis of the
activated ingredient in Cortex cinnamomi , the scientists from different
countries have done much systematic research on it resent years , aiming
at exploiting Cortex cinnamomi synthetically.As a result , expcept for
Cinnam aldchyde , cinnamy l acetate , Cinnamic acid , flavore etc., they
found that there was another HCP compound which function is as similar
as insulin occurring in the process of inhibiting 3T3-L1 adipocytes.
Author s address:Province Key Laboratory of Phytochemistry , Baoji U-
niversity of Arts and Sciences , Baoji 721007 , China
Key words:MHCP;Insulin;Simiiar function
(Original article on page 29)
Rapid identification of Chinese medicinal material Piper willichii
and it s substitutes with RAPD
LU Heng , WANGHe-yong , SUN Min
Abstract:Objective:To establish a new method for the identification of
Piper willichii(Miq)Hand-Mazz and its substitutes.Methods:The ran-
dom primers , which identified accurately Piper wiilichii and its substi-
tutes , were screened by PCR amplineation of RAPD technique.Results:
Screening from 62 random primers , there were 4 ones which could be
used to identify Piper willichii and its substitutes accurately and very re-
peatedly.Conclusion:It is an effective way that RAPD is applied toiden-
tify Piper willichii and its substitutes in DNA molecular level.
Author s address:1.Department of Pharmacology , Xuzhou Medical
College , Xuzhou 221002 , China;2.The Key Laboratory of Gene Engi-
neering of Ministry of Education , Schooi of Life Science , ZhongShan U-
niversity ,Guangzhong 510275 , China;3.School of Life Science , South-
west Normal University , Chongqing 400715 , China
Key words:RAPD;Piper wiilichii(Miq)Hand-Mazz;Substitute
(Original article on page 33)
Studies on powdered emodin from Polygonum cuspidatumn sied
J IANG Bo
Abstract:With 10% sulfuric acid aqueous solution imitates with the
CHCl3 for melting agent , proceed to the Polygonum cuspidatum Sied
powder the heat return to withdraw , withdrawing the thing flick the melt-
ing agent empress , using the benzene deliquescence , often ranning over
after urging , the fallen-liquid mixed with the Column-Chromatogra-
phy , drying by air even powder , one by one in order eluted with C6H6(A.R), CH3COOC2H5-C6H6(2∶8)to give 8 constitutents.
Author s address:Deparument of Chem.&Chem.Eng.Baoji Universi-
ty of Arts ang Sciences , BaoJi 721007 , China
Key words:Polgonum Cuspidatum Sied;Column-Chromatography on
Sigel;Chemicalconstitutents
(Original article on page 40)