全 文 ：收稿日期:2005 11 22
作者简介:迟霁菲(1978 ), 女(汉族), 辽宁沈阳人 , 硕士研究生 , E mail bb little@163.com;张国刚(1965 ), 男
(汉族),辽宁沈阳人 ,副教授 , 主要从事天然产物化学与抗病毒中药研究 , Tel.024 23986511 , E mail zggth@163.
com。
文章编号:1006 2858(2006)10 0653 05
粉葛的高效液相色谱指纹图谱
迟霁菲 , 张国刚
(沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 对不同来源的葛根药材指纹图谱进行比较 , 为葛根的质量控制提供可靠方法。方法
应用RP HPLC 法。色谱柱为 Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm), 流动相为甲醇 水 , 流速
0.5 mL·min-1 ,检测波长 250 nm ,柱温 30 ℃, 以葛根素为参照物。结果 通过对 11 批不同产地粉
葛药材的测定 ,初步建立了粉葛的 HPLC 指纹图谱 ,标定了 10 个共有峰。通过中药指纹图谱计算
机辅助相似度软件计算出其相似度均在 0.9 以上。结论 RP HPLC 法能较好地识别葛根药材 , 为
葛根的质量控制提供方法学依据。
关键词:葛根;指纹图谱;高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标识码:A
　　葛根为豆科植物野葛(Pueraria lobata
(Willd.)Ohw i)或甘葛藤(P.thomsonii Benth.,
习称粉葛)的干燥根。味甘 、辛 、凉 ,归脾胃二经 ,
具有解肌退热 、生津 、透疹 、升阳止泻之功效[ 1] 。
现代药理学研究表明 ,葛根总黄酮为其有效成分 ,
具有扩张冠状动脉 、减慢心率 、降低心肌耗氧量 、
改善心 、脑血液循环等作用[ 2] 。由于葛根药材生
长环境 、采收季节以及品种的不同 ,其中的有效部
位和有效成分含量差异很大[ 3] ,对中药材或中成
药的某个有效成分或指标进行定性 、定量分析并
不能有效控制中药材或中成药的质量。以往文献
大多是研究野葛的指纹图谱[ 4 ～ 6] ,而市售的葛根
药材基本为粉葛 。本实验中以葛根素为参照物 ,
对 11批不同产地的粉葛和 4批野葛药材进行测
定 ,初步建立了其指纹图谱 ,为粉葛标定了10个
共有峰。
1　仪器与材料
Agilent 1100 液相色谱仪(Agilent 1100 泵 、
Agilent 1100 DAD检测器 、Agilent 1100色谱工作
站 ,美国 Agilent科技公司)。
Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm ,
大连依利特公司)。
葛根素对照品(批号 0752 9907 ,中国药品生
物制品检定所),甲醇(色谱纯 ,天津康科德化学试
剂厂),乙醇(分析纯 ,天津市大茂化学试剂厂),二
次重蒸水(市售)。
葛根药材经沈阳药科大学路金才副教授鉴
定 ,11批为粉葛 , 4批为野葛 ,具体来源见表 1。
Table 1　Sources of samples
Sample S pecies Regions
1 Pueraria thomsoni i Benth. Hebei
2 P.thomson ii Benth. Liaoning
3 P.thomson ii Benth. Yunnan
4 P.thomson ii Benth. Mianyang , Sichuan
5 P.thomson ii Benth. Huangguagang Guangzhou
6 P.thomson ii Benth. Guangxi
7 P.thomson ii Benth. Shijiazhuang
8 P.thomson ii Benth. Xinyi , Jiangsu
9 P.thomson ii Benth. Jilin
10 P.thomson ii Benth. Shandong
11 P.thomson ii Benth. Yueyang , Hunan
12 Pueraria lobata(Willd.)Ohwi Zhejiang
13 Pueraria lobata(Willd.)Ohwi Linyi , Shandong
14 Pueraria lobata(Willd.)Ohwi Anhui
15 Pueraria lobata(Willd.)Ohwi Guangxi
2　方法与结果
2.1　色谱条件选择
色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm ,
5μm);流动相:甲醇 水(0 ～ 60 min , 25%～
第 23 卷 第 10 期
2 0 0 6 年 1 0 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.10
Oct.2006 p.653
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2006.10.011
100%);流速:0.5 mL·min-1;检测波长:250 nm;
柱温:30 ℃;进样量:20 μL。
2.2　对照品溶液制备
取葛根素对照品适量 ,精密称定 ,加体积分数
为30%的乙醇溶解制成70 mg·L-1的对照品溶液。
2.3　供试品溶液制备
精密称定过(355 ±13)μm 筛葛根粉末约
1.0 g ,置具塞锥形瓶中 ,加体积分数为 30%的乙
醇 50 mL ,密塞 ,超声提取 30 min ,放冷 ,滤过 ,药
渣和滤纸用适量体积分数为 30%的乙醇洗涤 ,合
并滤液 ,转移至 100 mL 量瓶中 ,加体积分数为
30%的乙醇稀释至刻度 ,摇匀。经 0.45 μm 微孔
滤膜过滤 ,取续滤液备用 。
2.4　供试品测定
取各供试品溶液 20 μL ,注入高效液相色谱
仪 ,记录色谱图 ,即得指纹图谱 。图 1为 11批粉
葛药材的指纹图谱。
Fig.1　Fingerprints of Pueraria thomsonii samples S1 S11
2.5　方法学考察
2.5.1　对照试验
取对照品溶液 20 μL ,注入色谱仪 ,葛根素对
照品色谱图见图 2 ,空白色谱图见图 3。
Fig.2　HPLC chromatogram of puerarin
Fig.3 　 Blank chromatogram of Pueraria thomsonii
Benth.fingerprint
2.5.2　精密度试验
取同一供试品溶液连续进样 5次 ,各共有峰
与内参比峰(葛根素)相对保留时间和相对峰面积
的 RSD<5%,表明精密度良好。
2.5.3　重复性试验
取同一产地供试品 5份 ,精密称定 ,按“2.3”条
654 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
方法制备供试品溶液 ,分别进样 ,测得各共有峰相
对保留时间和相对峰面积的 RSD<5%,表明其
重复性试验较好 。
2.5.4　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,室温放置 ,分别在 0 、2 、
4 、6 、8 、12 、24 h 进样 ,测得各共有峰相对峰面积
的 RSD<5%,表明样品溶液在 24 h内稳定 。
2.6　指纹图谱分析与评价
2.6.1　共有峰标定
根据 11批供试品溶液 HPLC 谱提供的相关
参数 ,比较各批样品的色谱图 ,其中共有峰 10个 ,
共有模式见图 4。
A —P.thomsonii;B— P.lobata
Fig.4　HPLC fingerprints of Pueraria thomsonii and Pueraria lobata
2.6.2　共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算
图 4中 s峰为葛根素 ,是葛根中的主要成分 ,
其峰面积占总峰面积的 60%,比较稳定。因此 ,
以葛根素作为内参比峰。共有峰相对保留时间和
相对峰面积见表 2 、3。共有峰总面积占总峰面积
的平均百分比为 96.9%, RSD 为 2.24%,符合指
纹图谱的有关规定。
Table 2　Relative retention times of HPLC f ingerprints of Pueraria thomsonii samples
Sample
Peak
1 2 3 4(s) 5 6 7 8 9 10
1 0.609 0.688 0.789 1.000 1.065 1.229 1.275 1.522 2.194 2.454
2 0.629 0.689 0.000 1.000 1.066 1.232 1.267 1.526 2.199 2.460
3 0.000 0.690 0.793 1.000 1.067 1.234 1.268 1.529 2.205 2.466
4 0.611 0.694 0.790 1.000 1.068 1.237 1.280 1.532 2.209 2.471
5 0.618 0.692 0.797 1.000 1.068 1.237 1.271 1.532 2.210 2.472
6 0.000 0.690 0.734 1.000 1.066 1.234 1.269 1.530 2.204 2.465
7 0.615 0.691 0.794 1.000 1.067 1.236 1.280 1.531 2.210 2.473
8 0.611 0.691 0.793 1.000 1.067 1.236 1.273 1.531 2.209 2.472
9 0.630 0.691 0.798 1.000 1.067 1.236 1.271 1.532 2.209 2.472
10 0.627 0.689 0.771 1.000 1.065 1.232 1.269 1.528 2.204 2.465
11 0.612 0.702 0.794 1.000 1.068 1.237 1.280 1.533 2.210 2.474
2.6.3　相似度评价
将测试数据导入中药指纹图谱相似度计算软
件 ,设定匹配模板 ,经过自动匹配 ,生成对照图谱。
与对照图谱比较 , 11批粉葛的相似度在 0.976 ～
0.997之间(表 4)。
2.6.4　不同植物来源的葛根指纹图谱比较
野葛与粉葛的指纹图谱见图 4。从图中可以
看出 ,野葛指纹图谱峰的数目明显比粉葛多 ,且各
峰面积也较粉葛大 。说明 ,野葛从组分结构和成
分含量上均与粉葛有显著差异 。
655第 10 期 迟霁菲等:粉葛的高效液相色谱指纹图谱　　　
Table 3　Relative peak area of HPLC fingerprints of Pueraria thomsonii samples
Sample
Peak
1 2 3 4(s) 5 6 7 8 9 10
1 0.010 0.011 0.000 1.000 0.000 0.432 0.072 0.097 0.131 0.015
2 0.000 0.009 0.000 1.000 0.056 0.242 0.061 0.075 0.147 0.013
3 0.000 0.009 0.000 1.000 0.021 0.209 0.055 0.061 0.144 0.013
4 0.000 0.000 0.000 1.000 0.087 0.106 0.065 0.059 0.259 0.020
5 0.005 0.011 0.003 1.000 0.051 0.223 0.051 0.080 0.192 0.012
6 0.000 0.011 0.000 1.000 0.041 0.221 0.054 0.075 0.134 0.007
7 0.013 0.020 0.004 1.000 0.080 0.270 0.063 0.072 0.072 0.005
8 0.047 0.020 0.011 1.000 0.082 0.221 0.075 0.073 0.122 0.013
9 0.000 0.009 0.003 1.000 0.000 0.190 0.051 0.062 0.204 0.011
10 0.000 0.008 0.000 1.000 0.042 0.186 0.056 0.062 0.166 0.013
11 0.041 0.032 0.008 1.000 0.111 0.129 0.085 0.062 0.198 0.025
Table 4　Similarity results of fingerprints of crude drugs
Sample Similarity Sample Similarity
1 0.976 7 0.994
2 0.993 8 0.996
3 0.990 9 0.997
4 0.981 10 0.991
5 0.997 11 0.984
6 0.994
3　讨论
a.色谱条件的选择 。本实验对色谱条件进
行了优化选择 ,采用甲醇 水线性梯度洗脱法 ,使
葛根中大部分黄酮类化合物得到了较好的分离 ,
得到较完整的 HPLC 色谱图 。比文献中使用的
多个梯度的流动相更为简单 ,便于重复[ 4～ 7] 。
b.提取方法的选择 。因为粉葛中淀粉含量
较高 ,加热回流后难于过滤。本实验中采用超声
提取 ,比文献中加热回流操作简单[ 4～ 7] , 便于过
滤 ,节省时间 ,且提取率相当。试验过程中选择了
水 ,体积分数为 30%、50%、70%、90%的乙醇 ,体
积分数为 30%的甲醇提取 。用体积分数为 30%
的乙醇提取 ,峰数较多 ,峰面积较大 ,峰形好。
c.粉葛与野葛指纹图谱的比较 。各产地的
粉葛药材指纹图谱比较相似 ,但色谱峰之间的相
对峰面积并不相同 ,由此可以看出粉葛和野葛之
间的内在质量是有差别的 。野葛和粉葛的指纹图
谱差异较大 ,说明种间的成分差别较大 。粉葛的
图谱更加简单 ,峰的数量少。指纹图谱说明了野
葛和粉葛无论从有效成分的总含量和组分结构上
都存在较大差异 。因此 ,作者进行粉葛指纹图谱
的研究是很有必要的 。
参考文献:
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656 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
HPLC fingerprints of Radix Puerariae
CHI Ji-fei , ZHANG Guo-gang
(School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , S henyang 　
110016 , China)
Abstract:Objective To make comparat ive study on HPLC-FPS of several kinds of Pueraria lobata and P.
thomsonii f rom different sources , and provide some useful information for quality evaluat ion.Methods A
Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm , 5μm)was used w ith a solvent sy stem consisting of methanol and
w ater in a g radient mode wi th a flow rate of 0.5 mL·min-1 , and the detecting w aveleng th w as set at 250
nm.The column temperature w as maintained at 30 ℃.Results The fingerprint of Radix Puerariae w as es-
tablished and 10 common peaks w ere pinpointed by the determination of the 11 P.thomsoni i Benth.sam-
ples gathered f rom dif ferent places.The similarities ,which w ere proved to be higher than 0.9 , were calculat-
ed with the help of the similarity calculation sof t of fingerprint chromatography of t raditional Chinese
medicine.Conclusions The method and data can be used to control the quality of Radix Puerariae.
Key words:Pueraria thomsonii Benth.;fingerprint;HPLC
(上接第 647页)
Chemical constituents from Epimedium koreanum
Nakai
CHENG Yan1 , WANG Nai-li1 , WANG Xin-luan1 , ZHANG Da-wei1 , HUANG Wen-xiu2 ,
YAO Xin-sheng1
(1.School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 　
110016 , China;　2.Department of Applied Biology and Chem ical Technology , The Hong Kong Poly-
technic University , Hong Kong , China)
Abstract:Objective To study the chemical consti tuents f rom Epimedium koreanum Nakai.Methods The
consti tuents in the w ater ex t ract of Epimedium koreanum Nakai w ere isolated by the combination of silica
gel ,Sephadex LH-20 and ODS chromatog raphy and their st ructures were identified by spect ral methods.
Results Eight known compounds were isolated f rom Epimedium koreanum Nakai.Their st ructures w ere i-
dentified as icariin(1),baohuoside-Ⅰ(2), sagit tatoside B(3),baohuoside-Ⅱ(4), astrag alin(5),3 ,5 ,7-t rihy-
droxy-4′-methoxy-8-preny lf lavone-3-O-α-L-rhamnopy ranosyl-(1※2)-α-L-rhamnopyranoside(6), 1 ,2 ,3 , 4-
tetrahydro-3 , 7-dihydroxy -1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-6-methoxy-2 , 3-Naphthalenedimethanol(7)
and epimedin C(8).Conclusions Compound 7 was isolated f rom the Epimedium genus for the fi rst time
and compound 8 was isolated f rom Epimedium koreanum for the first time.
Key words:Epimedium koreanum Nakai;chemical constituent;flavone g lycoside
657第 10 期 迟霁菲等:粉葛的高效液相色谱指纹图谱