全 文 ：［12］ Hui KK，Kanungo AK，Elia AJ，et al． Caspase － 3 deficiency reveals
a physiologic role for Smac /DIABLO in regulating programmed cell
death［J］． Cell Death and Differentiation，2011，18(11) :1780 －
1790．
［13］ Chen Y，Yang SH，Hueng DY，et al． Cordycepin induces apoptosis of
C6 glioma cells through the adenosine 2A receptor － p53 － caspase －
7 － PAＲP pathway［J］． Chem Biol Interact，2014，216:17 － 25
［14］ Ham YM，Yoon WJ，Park SY，et al． Quercitrin protects against oxida-
tive stress － induced injury in lung fibroblast cells via upregulation of
Bcl － xL［J］． Journal of Functional Foods，2012，4:253 － 262．
［15］ Zhang S，Zhang Y，Zhuang Y，et al． Matrine induces apoptosis in hu-
man acute myeloid leukemia cells via the mitochondrial pathway and
Akt inactivation［J］． PLoS One，2012，7(10) :e46853．
［16］ Gillet JP，Gottesman MM． Mechanisms of multidrug resistance in
cancer［J］． Methods Mol Biol，2010，596:47 － 76．
［17］ González － Sarrías A，Li L，Seeram N P． Anticancer effects of maple
syrup phenolics and extracts on proliferation，apoptosis，and cell cycle
arrest of human colon cells［J］． Phytother Ｒes，2012，26(7) :995 －
1002．
收稿日期:2015 － 02 － 28
作者简介:汪文琪(1991 －) ，女，湖北孝感人，硕士研究生，研究方向:中
药质量控制。
通讯作者:孙毅坤(1965 －) ，男，北京人，教授，硕士研究生导师，博士，
研究方向:中药质量控制与体内药物控制，E － mail:sunyik@
163． com。
［18］ 况鹏，李雪飞，李冰，等． 人肺腺癌细胞株 A549 和 A549 /DDP 的
比较蛋白质组学研究［J］．肿瘤，2012，32(3) :170 － 176．
［19］ Kim M，Ｒeed D，Ｒejniak KA． The formation of tight tumor clusters
affects the efficacy of cell cycle inhibitors:A hybrid model study［J］．
J Theor Biol，2014，352:31 － 50．
［20］ Vikas Y，Sarwat S，Jyoti Y，et al． Gatifloxacin Induces S and G2 －
Phase Cell Cycle Arrest in Pancreatic Cancer Cells via p21 /p27 /p53
［J］． PLoS One，2012，7(10) :1 － 12．
［21］ Oh HL，Lee DK，Lim H，et al． A novel decahydrofluorene analog，
from Aralia continentalis，induces cell cycle arrest at the G1 phase
and cytochrome c － mediated apoptosis in human lung cancer A549
cells［J］． J Ethnopharmacol，2010，129(1) :135 － 139．
［22］ Liu Y，Wang W，Fang B，et al． Anti － tumor effect of germacrone on
human hepatoma cell lines through inducing G2 /M cell cycle arrest
and promoting apoptosis［J］． European Journal of Pharmacology，
2013，698 (1 － 3) :95 － 102．
［23］ Malumbres M，Barbacid M． CDKs and cancer:a changing paradigm
［J］． Nat Ｒev Cancer，2009，9(3) :153 － 166．
［24］ Alinari L，Prince C J，Edwards ＲB，et al． Dual targeting of the cyc-
lin /Ｒb /E2F and mitochondrial pathways in mantle cell lymphoma
with the translation inhibitor silvestrol［J］． Clin Cancer Ｒes，2012，18
(17) :4600 － 4611
［25］ Zhenlong W，Shunsheng Z，Qiang Y． The E2F family and the role of
E2F1 in apoptosis［J］． The International Journal of Biochemistry ＆
Cell Biology，2009，41(12) :2389 － 2397．
DOI∶10． 13192 / j． issn． 1000-1719． 2015． 08． 045
HPLC测定复方大血藤颗粒中红景天苷的含量
汪文琪，张志千，汤化琪，林宏英，孙毅坤
(北京中医药大学，北京 100102)
摘 要:目的:建立测定复方大血藤颗粒中红景天苷含量的方法。方法:采用 ＲH － HPLC法，色谱条件:Waters C18柱
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，以乙腈:0. 1%醋酸 8∶ 92 为流动相，检测波长 275 nm，流速 1. 0 mL·min －1。结果:在 0. 68 ～
3. 40 μg内红景天苷的线性关系良好(r = 0. 9997) ，平均回收率为 102. 0%(ＲSD = 2. 04%)。结论:该方法简单、准确可
靠，可用于复方大血藤颗粒中红景天苷的含量控制。
关键词:HPLC;复方大血藤颗粒;红景天苷
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标志码:A 文章编号:1000-1719(2015)08-1489-03
Determination of Salidroside in Fufang Daxueteng Granules by HPLC
WANG Wenqi，ZHANG Zhiqian，TANG Huaqi，LIN Hongying，SUN Yikun
(Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
Abstract:Objective:To establish a quantitative HPLC method for determination of Salidroside in Fufang Daxueteng Gran-
ules． Methods:The separation was performed on a Waters C18 column (4. 6 mm × 150 mm，5 μm)at a flow rate of 1. 0 mL·
min －1 using 8∶ 92 of acetonitrile and 0. 1% acetic acid． The detection wavelength was set at 275 nm． Ｒesults:The Salidrosides were
well separated by this HPLC method． Linearifies were good in the ranges of 0. 68 ～ 3. 40 μg (r = 0. 9997)． The average recoveries
were 102. 0% with ＲSD 2. 04% ． Conclusion:This method is proved to be convenient，reliable and accurate and it can be used for
quality control of Fufang Daxueteng Granules．
Key words:HPLC;Fufang Daxueteng Granules;Salidroside
复方大血藤颗粒由大血藤、延胡索、三棱等药味组 成，具有活血散瘀，行气止痛的功效。大血藤为方中君
·9841·辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 8 期
A．红景天苷标准品;B．复方大血藤颗粒;C．阴性
图 1 复方大血藤颗粒液相色谱图
药，现代研究表明，其主要成分有蒽醌、三萜类、甾体
类、木质素类等化合物，文献报道大血藤中含有红景天
苷，而红景天苷有抗疲劳、抗衰老、免疫调节、抗辐射、
抗肿瘤等多种药理作用，是大血藤的活性成分之一。
因此需要建立方法对红景天苷的含量进行测定，为该
中成药的质量控制提供客观的定量评价方法。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 Agilent 1100 液相色谱仪(安捷伦科技有
限公司) ，万分之一电子天平(北京赛多利斯科学有限
公司) ，KQ 5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声
波仪器有限公司) ;HH － S4 电热恒温水浴锅(北京科
伟永兴仪器有限公司)。
1. 2 试剂 红景天苷对照品(中国食品药品检定研
究所，批号 110818 － 201005) ;复方大血藤颗粒(自制，
批号:20140601、20140602、20140603) ，乙腈为色谱纯，
水为纯净水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱为 Waters C18柱(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm)分析柱;流动相为乙腈:0. 1%醋酸(8∶
92) ;柱温:25 ℃;流速:1 mL /min;检测波长:275 nm。
2. 2 对照品储备液的制备 取红景天苷对照品适量，
精密称定，用甲醇溶解，并稀释成 0. 34 mg·mL －1的对
照品溶液，既得。
2. 3 供试品溶液的制备 称取复方大血藤颗粒约
6. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 50 mL，
密塞，称定重量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，用甲
醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液 25 mL，蒸
干，残渣加水 25 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提
取 4 次，每次 25 mL，分取水饱和正丁醇液，蒸干，残渣
加甲醇使溶解，转移至 25 mL量瓶中并稀释至刻度，摇
匀，滤过(0. 45 μm滤膜) ，即得。
2. 4 阴性溶液的制备 阴性溶液的制备是按处方中
药味的比例，自配不含大血藤群药，按其工艺制成空白
制剂，再按供试品溶液的制备方法制备。
2. 5 专属性实验 将实验试剂分别按 2. 1 的实验条
件进行测定，结果红景天苷峰与其它组分峰分离度良
好，阴性对照无干扰。结果见图 1。
2. 6 线性关系考察 精密吸取取红景天苷对照品溶
液(0. 34 g·mL －1)2、4、6、8、10 μL，注入高效液相色谱
仪，记录峰面积，以红景天苷对照品进样量为横坐标，
质量为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:y =
276. 82x － 11. 972，相关系数 Ｒ = 0. 9997。结果表明，
红景天苷对照品在 0. 68 ～ 3. 40 μg范围内线性关系良
好，结果见表 1 及图 2。
表 1 线性关系考察
序号 1 2 3 4 5
红景天苷进样质量(μg) 0. 68 1. 36 2. 04 2. 72 3. 40
峰面积 180. 64 358. 24 548. 34 751. 08 925. 41
图 2 红景天苷标准曲线
2. 7 精密度试验 精密吸取同一标准品溶液，进样 5
μL，重复进样 6 次，求得相对标准偏差 ＲSD = 1. 14%，
结果见表 2。
表 2 精密度试验
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 378. 53 379. 04 388. 19 379. 87 387. 85 382. 38
平均值 382. 64
ＲSD(%) 1. 14
2. 8 中间精密度试验 在不同日期，精密吸取同一对
照品溶液，进样 5 μL，重复进样 6 次，求得相对标准偏
差 ＲSD =1. 16%，结果见表 3。
表 3 中间精密度试验
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 343. 43 349. 37 354. 79 351. 66 352. 87 347. 93
平均值 350. 01
ＲSD(%) 1. 16
2. 9 定量限 取红景天苷对照品溶液(0. 34 mg /
mL) ，多步稀释后进样，此时信噪比 S /N = 10. 3，经计
算，定量限为 16. 8 ng。
2. 10 检出限 取红景天苷对照品溶液(0. 34 mg /
mL) ，多步稀释后进样，此时信噪比 S /N = 3. 1，经计
·0941· 辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 8 期
算，检测限为 6. 7 ng。
2. 11 重复性 平行制备六份样品，分别吸取 10 μL，
按上述操作方法进行测定，样品中红景天苷平均含量
为 1. 631 mg /g，ＲSD为 1. 64%，结果见表 4。
表 4 重复性试验(mg /g)
次数 1 2 3 4 5 6
含量(%) 1. 673 1. 635 1. 645 1. 627 1. 607 1. 600
平均含量 1. 631
ＲSD(%) 1. 64
2. 12 稳定性 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，分
别于配制后 0、2、4、8、12、24 h，依法测定，求得相对标
准偏差 ＲSD =1. 30%，结果表明供试品溶液在 24 h 内
基本稳定，结果见表 5。
表 5 稳定性试验
放置时间 0 h 2 h 4 h 8 h 12 h 24 h
峰面积 531. 25 534. 79 534. 66 541. 66 524. 17 543. 12
平均值 534. 94
ＲSD(%) 1. 30
2. 13 加样回收率试验 取已知含量样品约 3 g，精密
称取 9 份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入浓度为
5. 86 mg·mL －1的红景天苷对照品 1 mL，甲醇 49 mL;
浓度为 4. 86 mg·mL －1的红景天苷对照品 1 mL，甲醇
49 mL;浓度为 4. 04 mg·mL －1的红景天苷对照品 1
mL，甲醇 49 mL，各制备 3 份平行样品。按供试品溶液
制备方法制备供试品溶液，分别精密量取 10 μL 注入
液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录红景天苷峰面
积，计算回收率，得平均回收率为 102. 0%，ＲSD =
2. 04%，结果见表 6。
上述结果表明，本测定方法的回收率良好。
2. 14 样品测定结果 按正文收载方法，测定三批复
方大血藤颗粒样品，结果见表 7。
3 讨论
3. 1 样品提取条件的选择 本实验通过设计三因素
三水平正交试验，考察了在不同提取溶剂、提取液体积
和提取时间的提取效率，通过分析，最终确立了最优提
取方法，即用甲醇 50 mL提取 1 h，并在此基础上对复
方大血藤颗粒的含量进行测定。
表 6 回收率试验
序号 样品取样量(g) 样品含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) ＲSD(%)
1 3. 0040 4. 90 5. 86 10. 90 102. 4
2 3. 0057 4. 90 5. 86 10. 97 103. 6
3 3. 0031 4. 90 5. 86 10. 96 103. 5
4 3. 0044 4. 90 4. 86 9. 82 101. 3
5 3. 0048 4. 90 4. 86 9. 84 101. 7 102. 0 2. 04
6 3. 0022 4. 90 4. 86 9. 86 102. 1
7 3. 0026 4. 90 4. 04 9. 01 101. 8
8 3. 0013 4. 89 4. 04 9. 12 104. 6
9 3. 0044 4. 90 4. 04 8. 83 97. 2
复方大血藤颗粒经甲醇提取后，其提取液色泽较
深，液相色谱图的基线背景较高，不利于准确测定和色
谱柱的保护，在进行净化方法研究时，主要采用了色谱
法和液液萃取法的比较，结果发现，因红景天苷水溶性
强且分子量小，在采用大孔吸附树脂柱进行净化时，
20%乙醇就可洗脱下，含有的杂质较多，色谱图改进不
大;后采用水饱和正丁醇进行液液萃取，效果有较大改
观，萃取 3 次后的残留液中，已经难以检出红景天苷的
色谱峰，回收试验也表明可达到 97%以上，为确保结
果不因分析人员的操作习惯的差异造成偏差，保证本
方法的耐用性，故将萃取次数定为 4 次。
表 7 样品测定结果
批号 20140601 20140602 20140603
含量(mg /g) 0. 895 0. 883 0. 741
3. 2 流动相的选择 文献报道中多以甲醇 －水作为
流动相，然而由于本药中药材种类较多成分复杂，并未
获得较好的分离效果。因此分别对甲醇 －水、乙腈 －
水、甲醇 － 0. 1%醋酸、乙腈 － 0. 1%醋酸的洗脱进行考
察，结果表明，以乙腈 － 0. 1%醋酸溶液 8∶ 92 等度洗脱
时峰峰形好，柱效高，可达到理想的分离度，所以确定
乙腈 － 0. 1%醋酸溶液为流动相。
参考文献
［1］ 中国药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］． 2010 版．北京:
中国医药科技出版社，2010．
［2］ 况艳，郑芳． ＲP － HPLC 法测定二子菊花颗粒中红景天苷的含量
［J］．中医药导报，2011，17(7) :84 － 86．
［3］ 王凤林，刘丹，李文艳，等． HPLC法测定景天祛斑颗粒中红景天苷
的含量［J］．辽宁中医杂志，2010，37(9) :1781 － 1782．
［4］ 施伶俐，桂双英，周金凤． HPLC法测定大血藤中红景天苷的含量
［J］．安徽医药，2011，15(4) :441 － 442．
［5］ 李辉，张艳，徐汉斌，等． HPLC测定女贞子及其制剂益肾灵颗粒中
红景天苷的含量［J］．中国现代药物应用，2011，5(18) :71 － 72．
［6］ 王曙东，苏华，陈翠，等． HPLC法测定益利康软胶囊中红景天苷的
含量［J］．中国药师，2012，15(8) :1140 － 1142．
［7］ 易跃能，赵勇，杨华．反相高效液相色谱法测定胃祥宁颗粒中红景
天苷的含量［J］．中南药学，2010(1) :36 － 38．
［8］ 付钰，王光义．中药大血藤对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞 MMP －
2，MMP －9 的影响［J］．贵州医药，2009，33(12) :1097 － 1099．
［9］ 马瑞丽，于小凤，徐秀泉，等． 大血藤的化学成分及药理作用研究
进展［J］．中国野生植物资源，2013，31(6) :1 － 5．
［10］ 田瑛，张慧娟，屠爱萍，等．中药大血藤的酚性化合物［J］．药学学
报，2005，40(7) :628 － 631．
［11］ 毛水春，顾谦群，崔承彬，等．中药大血藤中酚类化学成分及其抗
肿瘤活性［J］．中国药物化学杂志，2005，14(6) :326 － 330．
·1941·辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 8 期