全 文 ：作者简介:苏碧丽，女，在读硕士研究生，从事天然药物化学研究。E － mail:912637905@ qq. com
通信作者:庞文生，E － mail:pws@ fjtcm. edu. cn
不同产地粉葛四种异黄酮含量比较
苏碧丽1 胡 娟1，2 庞文生1，3*
1． 福建中医药大学药学院，福建 福州 350122;2． 福建中医药研究院，福建 福州 350003;
3． 福建省第二人民医院，福建 福州 350003
【摘 要】 目的:考察不同产地粉葛中葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，为制定粉葛药材质量标准提供参考依据。
方法:采用 ＲP － HPLC法，色谱柱 Hypersil C18色谱柱 (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相:乙腈 － 0. 2%磷酸，梯度洗脱;流速 1. 0 ml /min，
柱温 30℃，检测波长 250 nm。结果:葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的线性范围分别为 12. 4 ～ 620ng、1. 52 ～ 76ng、2. 4 ～
120ng、3. 28 ～164 ng，四种成分的平均加样回收率分别为 101. 1%、99. 86%、101. 78%、103. 39%，ＲSD 分别为 1. 43%、1. 29%、0. 95%、
1. 21%。结论:该方法简便快速，重复性良好，结果准确可靠，可用于不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分的含量测定。
【关键词】 HPLC;葛根素;3＇－甲氧基葛根素;大豆苷;大豆苷元
【中图分类号】Ｒ284. 1 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2016)03 － 0010 － 02
Comparison the content of four kinds of isoflavonoids in different habitats of radix puerariae thomsonii
SU Bili1 HU juan1，2 PANG Wensheng1，3*
1． FuJian University of Traditional Chinese Medicine of Pharmacy，Fuzhou 350122，China;
2． FuJian Academy of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350003，China;
3． Fujian Seeond Peopleis Hospitied，Fuzhou350000，China
Abstract:Objective To determine the content of puerarin，3 － methoxy puerarin，daidzin，daidzein in different habitats of radix
puerariae thomsonii，and provide reference for establishing its quality standards． Methods HPLC determination was performed on a Hy-
persil C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)and detected at 250 nm． The mobile phase was consisted of Acetonitrile and 0. 2% Phos-
phate acid solution with gradient elution． The flow rate was 1. 0 ml·min －1 and column temperature was kept at 30℃． Ｒesults The meth-
od was proved to be linear in the ranges of 12. 4 ～620，1. 52 ～76，2． 4 ～120，3. 28 ～164 ng for the four isoflavonoids，puerarin，3 －
methoxy puerarin，daidzin，daidzein，respectively． The average recoveries were 101. 1% (1. 43%) ，101. 78% (0. 95%) ，103. 39%
(1. 21%) ，respectively． Conclusion Ｒesults obtained showed that the method is convenient，accurate and reliable，can be applied to
the determination of the content of Ｒadix Pueraria thomsonii from different sources in four isoflavonoids．
Key words:HPLC;puerarin;3 － methoxy puerarin;daidzin;daidzein
粉葛为豆科植物甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth的干燥
根，载于《中国药典》［1］，具有解肌退热、生津止渴的功
效、临床主要用于外感发热头痛、项背强痛、口渴等症状。
粉葛的主要化学活性成分有葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大
豆苷、大豆苷元等异黄酮类化合物［2］，具有降血压、降血
糖、保护肝脏、治疗颈椎病等作用［3 － 4］;同时粉葛富含淀
粉，因此具有较高的医用和食用价值。近年来，文献报道
对粉葛异黄酮多指标成分的含量测定［5 － 8］，但是随着粉葛
栽培面积的不断扩大，出现了许多栽培品种，因此不同产
地药材之间的有效成分含量存在着一定的差异，进而影响
了药材的质量。研究采用高效液相色谱法同时对广东、广
西、安徽粉葛中四种异黄酮成分的含量，为粉葛药材质量
控制提供方法和依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters2695 高效液相色谱系统 (2998 型二极管
阵列检测器);KQ3200DE型数控超声波清洗器 (昆山市超
市仪器有限公司);Thermo 超纯水设备;电子分析天平
(梅特勒 －托利多仪器上海有限公司) ;FW135 中草药粉碎
机 (天津市泰勒特仪器有限公司)。
1. 2 药品与试剂 3 ＇ － 甲氧基葛根素对照品 (批号:
141217，成都普菲德生物技术有限公司);葛根素对照
品 (批号:10752 － 201313)、大豆苷对照品 (批号:
111738 － 201302 )、大 豆 苷 元 (批 号: 111502 －
200402)均购自中国食品药品检定研究院;粉葛 (批
号:150420，安 徽 本 草 国 药 饮 片 有 限 公 司;批 号:
150302，安徽省金芙蓉中药饮片有限公司;批号:
1504005，江西樟树天齐堂中药饮片有限公司);甲醇、
乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取各对照品适量，分别用
甲醇制成每毫升中含有葛根素 0. 062 mg、3＇－甲氧基葛根素
0. 0076 mg、大豆苷 0. 012 mg、大豆苷元 0. 0164 mg即可。
2. 2 供试品溶液的制备 取不同产地的粉葛粉末 (过三号
筛)约 1. 0 g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加
入 30%乙醇 100 ml，称定重量，超声提取 30 min，放冷，
再称定重量，用 30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，
取续滤液，过 0. 45 μm微孔滤膜，即得。
2. 3 色谱条件 色谱柱 Hypersil C18色谱柱 (4. 6 mm × 250
mm，5 μm);检测波长:250 nm;柱温:30 ℃;流速:1. 0
ml /min;进样量:10 μl;梯度洗脱条件见表 1。色谱见图 1。
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表 1 梯度洗脱条件
时间 (t /min)
流动相组成 (%)
乙腈 0. 2%磷酸
0 8 92
15 15 85
28 25 75
30 30 70
35 15 85
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性范围考察 分别精密吸取上述对照品溶液 0. 2、
0. 5、1、2、5、10 ml，置于 10 ml 容量瓶内，以甲醇定容
至刻度，摇匀，0. 45μm微孔滤膜滤过。分别按“2. 3”项
下条件测定，以峰面积 (A)为纵坐标，进样量为横坐标
(X，ng)绘制标准曲线，得到葛根素、3＇－甲氧基葛根素、
大豆苷、大豆苷元的回归方程，见表 2。
表 2 四种异黄酮类成分线性关系考察 (n = 3)
成分 回归方程 r 线性范围 (ng)
葛根素 Y = 3893. 4X － 5852. 2 0. 9999 12. 4 ～ 620
3＇－甲氧基葛根素 Y = 2944. 2X － 3609. 8 0. 9997 1. 52 ～ 76
大豆苷 Y = 3769. 7X + 22. 898 0. 9995 2. 4 ～ 120
大豆苷元 Y = 5796. 4X + 1504. 9 0. 9997 3. 28 ～ 164
2. 4. 2 精密度试验 取混合对照品溶液，按“2. 3”项色
谱条件重复测定 6 次，测得葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大
豆苷、大豆苷元的峰面积 ＲSD 分别为 0. 52%、1. 36%、
1. 00%、0. 35%，结果表明仪器精密度良好。
2. 4. 3 重复性试验 取同一来源的粉葛 6 份，分别按
“2. 2”项下制备供试品溶液，按“2. 3”项下色谱条件进
行测定，记录峰面积，计算葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大
豆苷、大豆苷元的平均含量分别为 0. 29%、0. 04%、
0. 04%、0. 03%，ＲSD 分别为 1. 61%、1. 98%、1. 50%、
1. 62%。结果表明本方法重复性良好。
2. 4. 4 稳定性试验 取同一来源的供试品溶液，按“2. 3”
项下的色谱条件，分别用于 0、2、4、6、8、12 h 进样 10
μL分别测定葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷
元的 峰 面 积， ＲSD 分 别 为 1. 02%、1. 98%、1. 15%、
1. 54%，结果表明供试品溶液在 12 h内稳定性良好。
2. 4. 5 加样回收率试验 精密称取同一粉葛根粉末约 0. 5 g，
置于锥形瓶中，精密加入适当量的对照品溶液，按“2. 2”
项下制备供试品溶液，平行制备 6 份。按“2. 3”项下色谱
条件测定，计算平均回收率和 ＲSD，葛根素、3＇－甲氧基葛
根素、大豆苷、大豆苷元的平均回收率分别为 101. 1%、
99. 86%、 101. 78%、 103. 39%， ＲSD 分 别 为 1. 43%、
1. 29%、0. 95%、1. 21%。结果表明该方法准确可靠。
2. 5 样品含量测定 取不同产地的粉葛，分别按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液，按“2. 3”项下色谱条件测定，
记录各个成分的峰面积，以外标法计算样品中各成分的含
量，结果见表 3。
表 3 不同产地粉葛样品中四种异黄酮类成分含量测定 (n = 3，%)
来源 葛根素 3＇－甲氧基葛根素 大豆苷 大豆苷元
广东 0. 344 0. 020 0. 049 0. 038
安徽 0. 286 0. 044 0. 039 0. 034
广西 0. 270 0. 003 0. 039 0. 035
3 讨论
不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分含量比较，葛
根素:广东 ＞安徽 ＞广西;3 －甲氧基葛根素:安徽 ＞广东
＞广西;大豆苷:广东 ＞安徽或广西;大豆苷元:广东 ＞
广西 ＞安徽;不同产地之间含量相差较大的是 3＇ －甲氧基
葛根素，进一步的说明不同产地的环境、气候、土壤、降
水等条件对粉葛根药材有效成分还是存在一定的影响。
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·11·中国民族民间医药 2016年 2月第 25卷第 3期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 3
2. 4 线性关系的考察 精密吸取混合对照品溶液 0. 5、
1. 0、3. 0、5. 0、7. 0、9. 0 ml分别置于 10 ml 量瓶中，加甲
醇至刻度，制成系列质量浓度的混合对照品溶液，按照上
述色谱条件，每个质量浓度分别测定 3 次，每次进样 10μl，
记录峰面积。以峰面积的平均值 Y 为纵坐标，进样量 x
(μg)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果没
食子酸的回归方程为:Y = 3. 415 × 106x + 5. 146 × 104，r =
0. 999 9，橙皮苷的回归方程为:Y = 2. 046 × 106x + 3. 367 ×
104，r = 0. 9997。表明没食子酸进样量在 0. 128 ～ 2. 302 μg
范围内，橙皮苷进样量在 0. 099 ～ 1. 777 μg范围内线性关系
良好。
2. 5 仪器精密度试验 精密吸取“2. 4”项下中间质量浓
度的混合对照品溶液 10μl，在上述色谱条件下，重复进样 6
次，记录色谱峰峰面积，结果没食子酸、橙皮苷峰面积的
ＲSD分别为 1. 2%、0. 9%。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液 (批号:20130101)，
按上述色谱条件，分别于配制后 0、2、4、8、12、24h 进
样，记录色谱峰面积，结果没食子酸、橙皮苷峰面积的
ＲSD分别为 1. 6%、1. 3%，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 7 重复性试验 称取同一批样品 (批号:20130101)
0. 5 g，平行称取 6 份，按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶
液，在上述色谱条件下测定，测得没食子酸平均含量为
6. 44 mg /g，ＲSD为 1. 5%;橙皮苷平均含量为 4. 83 mg /g，
ＲSD为 1. 3%。
2. 8 回收率试验 精密称取已知含量的同一批号样品 (批
号:20130101 )约 0. 25g，平行称取 9 份，置 25 ml 量瓶
中，分别加入没食子酸和橙皮苷混合对照品溶液 (含没食
子酸 0. 3268mg /ml、含橙皮苷 0. 2434mg /ml)适量，按
“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，
计算回收率。结果没食子酸平均回收率为 99. 64%，ＲSD为
1. 2%;橙皮苷平均回收率为 99. 84%，ＲSD为 0. 8%。
2. 9 样品测定 取 5 批正胃片，按“2. 2. 2”项下方法制
备供试品溶液，按“2. 1”项色谱条件测定，将测得峰面积
代入标准曲线，计算样品中没食子酸、橙皮苷含量，结果
见表 1。
表 1 样品测定结果 (n = 5)
批号 没食子酸 /mg /g ＲSD /% 橙皮苷 /mg /g ＲSD /%
20120706 6. 28 0. 9 4. 38 1. 6
20120815 6. 19 1. 2 4. 75 0. 8
20130101 6. 44 1. 5 4. 83 1. 3
20130326 6. 58 1. 4 4. 96 1. 6
20130514 6. 37 1. 1 4. 74 1. 5
3 结果与讨论
3. 1 提取条件的选择 实验对不同浓度的甲醇和乙醇进行
了提取效率的比较实验，结果表明甲醇提取效果优于乙醇。
采用不同浓度的甲醇提取，考察结果表明:采用 50%甲醇
提取，提取效率最高。另对比了不同提取方法 (超声、回
流、索氏提取)对正胃片的提取效果，结果表明:超声提
取的效率高，方法简便。
3. 2 提取时间的选择 以没食子酸、橙皮苷为指标，对提
取时间进行了考察，结果表明:提取 30min 后有效成分峰
面积达到最大，确定提取 30min作为提取时间。
3. 3 检测波长的确定 分别取没食子酸、橙皮苷对照品溶
液在 200 ～ 400nm波长范围进行紫外光谱扫描，结果显示没
食子酸和橙皮苷分别在 272nm 和 283nm 处有最大吸收。为
提高分析灵敏度和准确度，宜尽量选择在最大吸收波长下
测定没食子酸和橙皮苷的含量。实验采用程序波长切换技
术，根据各组分的出峰顺序，在不同时间段分别用其相应
的最大吸收波长同时测定含量。
3. 4 流动相的选择 参考药典及相关文献中没食子酸、橙
皮苷的含量测定方法［6 － 7］，采用等度洗脱法进行实验，但
分离结果均不理想，故考虑梯度洗脱。实验分别考察了甲
醇 －水、乙腈 － 水、甲醇 － 0. 2% 磷酸水溶液、乙腈 －
0. 1%磷酸水溶液等不同比例的流动相，最终采用甲醇 －
0. 2%水磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱，可将 2 个组分
完全分离，且基线稳定，峰形好，出峰快。
参考文献
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酸与槲皮素的含量 ［J］． 中国实验方剂学杂志，2013，19 (9):126 － 127．
(收稿日期:2015. 12. 17
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 11 页)
本实验通过高效液相色谱法建立对不同产地的粉葛多指标
成分的含量测定，能够更全面的控制粉葛饮片的质量，为
粉葛药材的选择提供了一定的依据。
参考文献
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(收稿日期:2015. 12. 19)
·31·中国民族民间医药 2016年 2月第 25卷第 3期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 3