全 文 ：瘤小鼠的生命延长率为 45%以上，且两种芦荟多糖的抗肿瘤
作用无明显差异，和文献报道相似，不同的是，已有文献报道
的有效剂量多为 100 mg /kg·d［3］。实验还发现，模型组小鼠
体重显著增加，5-FU可使荷瘤小鼠体重明显降低，可见 5-FU
在发挥抗肿瘤作用的同时可能影响机体的生长从而给机体
造成损伤。芦荟多糖发挥明显抗肿瘤作用的同时，对小鼠体
重影响不明显，芦荟多糖给药组小鼠体重变化和空白组小鼠
的变化相似。提示两种芦荟多糖抗肿瘤作用的同时，对机体
的生长影响较小，对机体的损伤小，或优于 5-FU。
对荷瘤小鼠免疫器官重量的检测结果显示，荷瘤小鼠的
胸腺指数有增加的趋势，但脾指数显著降低，提示荷瘤小鼠
的免疫功能可能出现紊乱。5-FU 可显著降低荷瘤小鼠胸腺
和脾脏的重量，使胸腺指数和脾指数明显降低，加重荷瘤机
体的免疫损伤。而两种芦荟多糖可降低荷瘤小鼠的胸腺指
数，增加荷瘤小鼠的脾指数，逆转荷瘤小鼠的免疫器官指数
的改变，和 5-FU组比较具有显著差异。提示改善荷瘤机体
免疫功能紊乱可能是芦荟多糖抗肿瘤作用的重要机制。
本次实验提示，75. 6%和 88%的库拉索芦荟多糖和木立
芦荟多糖有效抗肿瘤剂量较以往文献报道的剂量明显降低，
可能与多糖的纯度提高有关。此外，芦荟多糖对免疫系统的
作用不能简单地用增强免疫系统功能来描述，因为两者均可
抑制荷瘤小鼠的胸腺指数的增加，这一结果和已有的研究结
果不同［3］;低剂量库拉索芦荟多糖则可明显增加荷瘤小鼠脾
指数，其他各给药组也表现一定的增加趋势。因此，推测恢
复荷瘤机体的免疫功能紊乱可能是其发挥抗肿瘤作用机制
的一个重要方面，特别是两者对脾脏功能的影响可能是其发
挥抗肿瘤作用的主要免疫机制，相关进一步的研究观察工作
正在进行。
参考文献:
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饿蚂蝗抗氧化活性研究
张前军1， 刘瑜新2， 康文艺2， 李传宽1
(1.贵州大学化学化工学院，贵州 贵阳 550025;2.河南大学天然药物研究所，河南 开封 475004)
收稿日期:2009-09-18
基金项目:贵州省科技厅中药现代化项目(黔科合中药字［2010］5029)
作者简介:张前军(1965 －)，女，博士，教授，研究方向:天然产物化学。Tel:(0851)8292058 E-mail:qianjunzhang@ 126. com
关键词:饿蚂蝗;DPPH;ABTS;FRAP;抗氧化
摘要:目的:研究饿蚂蝗的体外抗氧化作用。方法:运用 DPPH、ABTS 和 FRAP 3 种分光光度法进行体外抗氧化活性筛
选。结果:饿蚂蝗茎和叶的乙醇提取物均具有很好的清除 DPPH·和 ABTS· +能力及还原 TPTZ 的能力，在 DPPH 和
ABTS方法中，两者的抗氧化活性相差不大(IC50分别为:12. 06 μg /mL和 11. 02 μg /mL，5. 94 μg /mL和 6. 49 μg /mL)，均
高于阳性对照药 BHT(IC50分别为:18. 72 μg /mL和 6. 64 μg /mL)。在 FRAP方法中，饿蚂蝗叶的乙醇提物的抗氧化活性
(RACT50 = 617. 51 μmol /g)较茎的醇提物高(RACT50 = 269. 91 μmol /g)，两者均小于阳性对照药。结论:饿蚂蝗醇提物
具有明显的抗氧化活性。茎和叶的抗氧化性相差不大。
中图分类号:R285. 5 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)11-1980-03
饿蚂蝗 Desmodium sambuense(D. Don)DC.，为豆科山
蚂蝗属植物，生长在山坡草地或林边，分布广西、贵州、云南、
福建、台湾等地。该药以根或全株及种子入药。性味甘，凉，
具清热解毒，消食，止痛的功能。民间用于治疗胃痛，小儿疳
积，腮腺炎，淋巴结炎，毒蛇咬伤，脘腹疼痛，创伤，肠胃炎、乳
腺炎、尿道炎、痢疾等疾病［1］。山蚂蝗属植物在全世界约有
350 种，分布于热带和亚热带地区，我国约 27 种，主产西南
部至东南部。目前国内外对该属植物的化学成分及活性研
究仅局限广金钱草(Desmoium styracifolium)、葫芦茶(Desmo-
dium triquetrum)、排钱草(Desmodium blandum)、椴叶山蚂蝗
(Desmodium tiliaefolium)、大叶山蚂蝗(Desmodium gangetic-
um)等少数品种。该属植物的主要成分有黄酮类、生物碱
类、酚类、三萜类及酸类化合物，具有消炎、抗菌、止痛、抗氧
化、保肝、抗肿瘤、扩张血管和对胰岛素分泌的影响等活
性［2-6］。本实验应用多种体外抗氧化方法对饿蚂蝗的叶和茎
的醇提物进行抗氧化研究，为开发和利用山蚂蝗属植物提供
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科学依据。
1 材料与方法
1. 1 材料与仪器
饿蚂蝗于 2008 年 8 月采自贵州省贵阳市，经贵阳中医
学院陈德媛教授鉴定为豆科山蚂蝗属植物饿蚂蝗 Desmodi-
um sambuense(D. Don)DC.。二苯代苦味酰基自由基(DP-
PH，日本东京化成工业株式会社);Fe3 + -三吡啶三哑嗪
(TPTZ，比利时 Acros organics 公司);6-羟基-2，5，7，8-四甲基
苯并二氢吡喃-2-羧酸(Trolox，美国 Aldrich 公司);［2，2′-连
氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐］(ABTS，美国 Fluka
公司);没食子酸丙酯(PG，比利时 Acros organics 公司)，丁
基羟基茴香醚(BHA，比利时 Acros organics 公司)，二丁羟基
甲苯(BHT，比利时 Acros organics 公司)。甲醇，醋酸钠，
FeCl3·6H2O，冰醋酸，过二硫酸钾均为分析纯。UV-2000 型
紫外可见分光光度计(上海尤尼可仪器有限公司)，电子天
平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，旋转蒸发仪(东京理
化)。
1. 2 方法
1. 2. 1 醇提物的制备
取饿蚂蝗干燥叶和茎粉碎，以 1 ∶ 10 料液比(即 1 g原料
加 10 mL液体)加入 70%乙醇，于圆底烧瓶中经回流提取 1
h，同法重复提取 3 次。合并提取液，浓缩得醇提物浸膏，再
经 70 ℃烘干，检测水分小于 5%，称重，干燥器内保存备用。
1. 2. 2 DPPH方法
参照文献［7］，选择 0. 06 mmol /L DPPH 乙醇溶液，将一
定浓度的待测定样品对半稀释，取 0. 1 mL 加入到 3. 5 mL
DPPH溶液中，充分混合均匀，在室温下静置 30 min 后，在
515 nm 波长下检测 DPPH 吸光度值，同时设置阳性与阴性
对照，通过如下公式计算得到样品清除自由基的能力:
清除率(%)=［(AControl － ASample)/AControl］× 100%
Acontrol为 DPPH 本身在测定波长的吸收度，Asample为样品
对 DPPH作用后的吸收度数值(除去样品自身吸收)。同时
将样品清除自由基的能力与 Trolox清除自由基的能力比较，
确定其相对抗氧化活性，当 Trolox 浓度在 25 ～ 400 μmol /L
时，与 DPPH自由基清除率有很好的线性关系，R2 =0. 999 9。
1. 2. 3 ABTS方法
参照文献［8］，ABTS· + 贮备液制备:5 mL 7 mmol /L
ABTS的水溶液，加入 88 μL 浓度为 140 mmol /L potassium
persulphate(比例为:1 ∶ 0. 35)，混合液使用前在常温下暗室
放置 12 ～ 16 h。ABTS + 贮备液用甲醇稀释(比例约:
1 ∶ 88)，得到在 734 nm 处吸光度为 0. 80 ± 0. 02，并在 30 ℃
得到平衡。
方法:1 mL ABTS 加入 50 μL 提取物，在试管中混匀。
试管在 30 ℃下保温 2. 5 min 或者 5 min或 10 min，在 734 nm
处测吸光度。Trolox 的抗氧化活性:5 mmol /L Trolox 甲醇贮
备液加入此系统中，制定一个标准曲线(Trolox 的终浓度为 0
～ 20 μmol /L)。
清除率(%)=［(AControl － ASample)/AControl］× 100%
式中，Acontrol为 ABTS自由基本身在测定波长的吸收度，
Asample为样品对 ABTS 自由基作用后的吸收度数值(除去样
品自身吸收)。同时将样品清除自由基的能力与 Trolox清除
自由基的能力比较，确定其相对抗氧化活性，当 Trolox 浓度
在 25 ～ 400 μmol /L时，与 ABTS自由基清除率有很好的线性
关系，R2 = 0. 999 0。
1. 2. 4 FRAP方法
参照文献［9］，贮备液制备:0. 3 mol /L醋酸钠缓冲液，pH
3. 6(3. 1 g CH3COONa·3H2O，16 mL CH3COOH);10 mmol /
L TPTZ溶液用 40 mmol /L 的盐酸配制;20 mmol /L FeCl3·
6H2O溶液。TPTZ工作液由上述 3 者按体积比为 10 ∶ 1 ∶ 1
组成。TPTZ 工作液需要新鲜制备，0. 2 mL 样品溶液加入
3. 8 mL TPTZ溶液;0. 1 mL样品溶液加入 3 mL TPTZ 溶液;
0. 15 mL样品溶液加入 2. 85 mL TPTZ溶液。上述混合液在
37 ℃水浴中反应 30 min，在 593 nm处测定吸光度。
2 结果与讨论
2. 1 结果 见表 1。
表 1 显示，在 DPPH方法中，饿蚂蝗叶的醇提物清除 DP-
PH的活性稍大于茎的醇提物。与阳性对照相比，两者清除
DPPH的活性约为 PG的 1 /10，BHA的 1 /5，均高于阳性对照
药 BHT，可见饿蚂蝗具有较好的清除 DPPH自由基能力。从
表中还可看出，饿蚂蝗叶和茎的醇提物对 ABTS自由基的清
除能力相差也不大，与清除 DPPH 活性不同的是，茎的醇提
取物清除 ABTS的能力稍大于叶的醇提物。与阳性对照相
比，两者清除 ABTS自由基的能力约为 PG的 1 /9，BHA的 1 /
4，均大于 BHT。在 FRAP 方法中，饿蚂蝗茎和叶还原 Fe3 + -
三吡啶三哑嗪(TPTZ)的能力相差较大，以叶的还原能力较
好，两者还原 TPTZ 的能力远小于 PG 和 BHA，且均小于
BHT。
表 1 饿蚂蝗醇提物抗氧化活性
抗氧化活性物种类
DPPH方法
IC50 /(μg /mL) RACT50 /(μmol /g)
ABTS方法
IC50 /(μg /mL) RACT50 /(μmol /g)
FRAP方法 RACT50
/(μmol /g)(珋x ± s)
PG 1. 12 12 108. 35 0. 71 14 685. 71 11 554. 78 ± 501. 34
BHA 2. 27 5 973. 57 1. 74 5 908. 46 6 633. 40 ± 114. 04
BHT 18. 72 724. 36 6. 64 1 548. 19 1 581. 68 ± 97. 41
饿蚂蝗醇提物(茎) 12. 06 1 124. 38 5. 94 1 730. 64 269. 91 ± 1. 23
饿蚂蝗醇提物(叶) 11. 02 1 230. 49 6. 49 1 583. 98 617. 51 ± 25. 34
图 1 显示，饿蚂蝗醇提物随着浓度的增加，其清除 DPPH 自由基的活性增加，当浓度为 30 μg /mL时，其对 DPPH自由
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基的清除能力趋于饱和(清除率为 90%)，再增加提取物浓
度清除率也不再增加，说明饿蚂蝗醇提物对 DPPH 的清除能
力具有剂量依赖性。从图中还可以看出，在相同浓度下，饿
蚂蝗提取物清除 DPPH 自由基的能力均大于阳性对照药
BHT。说明饿蚂蝗乙醇提取物具有较好的清除自由基的能
力。
图 1 不同浓度样品对 DPPH自由基的清除能力
图 2 显示，饿蚂蝗茎和叶的乙醇提物的清除 ABTS 自由
基的能力基本一致。随着浓度的增加，其清除 ABTS 自由基
的能力增加，当样品浓度达到 25 μg /mL 时，其清除 ABTS 自
由基的能力达到饱和(清除率为 100%)，说明饿蚂蝗提取物
对 ABTS自由基的清除能力也具有剂量依赖性。从图中还可
以看出，当样品浓度大于 5 μg /mL 时，其清除 ABTS 自由基
的活性大于 BHT，说明虽然两者的 IC50值与 BHT 相差不大，
但是在相同浓度下，其清除 ABTS自由基的能力大于 BHT。
图 2 不同浓度样品对 ABTS自由基的清除能力
2. 2 讨论
DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自由基，若受试
物能将其清除，则表明受试物具有降低羟基自由基、烷基自
由基或过氧化自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应
的作用［10］。DPPH·在 515 nm 附近有强吸收。当有供氢能
力的抗氧化剂存在时，孤对电子被配对，吸收消失或减弱，而
吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈定量关系。实
验结果说明饿蚂蝗茎和叶的醇提物具有较好的降低羟基等
自由基的有效浓度和打断脂质过氧化的能力，作者认为这可
能与饿蚂蝗所含黄酮类成分有关。
ABTS是一种水溶性的自由基引发剂，经活性氧氧化后
生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS· +。向其中加入被
测物质，当待测物质中含有抗氧化物时，该物质会与ABTS· +
发生反应而使反应体系颜色褪去，在 734 nm 处有最大吸收
即可反映物质的抗氧化活性［11］。本实验中饿蚂蝗的醇提物
具有较好的清除 ABTS· +能力，显示较好的抗氧化活性。
在低 pH值的溶液中，Fe3 + -三吡啶三哑嗪(tripyridyl-tria-
zine，TPTZ)可被抗氧化剂还原为二价铁形式，呈现出明显的
蓝色，并在 593 nm处有最大吸收，根据吸光度的大小计算出
抗氧化活性的强弱。它反映的不是样品针对某一种自由基
的清除活性，而是样品总还原能力，一些学者因此认为该法
测定结果可用来反映样品总抗氧化活性［12］。从实验结果看
出，饿蚂蝗茎和叶的醇提物总还原能力较弱，可能与饿蚂蝗
所含成分有关。
通过 3 种方法对饿蚂蝗的茎和叶的醇提物进行抗氧化
活力研究，发现饿蚂蝗乙醇提取物清除 DPPH 和 ABTS 自由
基的能力比阳性对照 BHT 好，饿蚂蝗乙醇提取物还原 Fe3 +
的能力不如阳性对照药;研究结果表明，饿蚂蝗茎和叶的醇
提物都具有较好的抗氧化能力。
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