全 文 ：中l习病理生理杂志 Ch i n es eJ o u n ral o f p at h o ph ys i o l o g y 10 9一; 7 ( l )
刀豆素 A对小鼠同种胰岛移植的影响
北京友谊医院生 理 研 究 室
北京市临床医学研究所病理 祝希媛 何 瑾 柏平 阿
摘 要 本文对刀豆素 A( CO n A)在小鼠胰岛移植模型上的杭排异作用进行了研究 。 用胶原酶消化
加手挑法获取 C刃B L / 6小鼠的胰岛 ,将 6。。一 70 个胰岛移植于链脉霉素复制成糖尿病的 B A L B /C小鼠肾
包膜 卜, 移植胰岛平均存活时间 (M S T )为 1 4 . 1 士 2 . 5天 。 实验组用C o n A对胰岛预处理后再移植 , M S T
延长为 2 5士 5 . 4天 , 与对照 比较有显著性 (P < 0 . 叨。 5 :) 给受鼠注射 C o n A 也使M S T显著延长 (P < 。 . 05) ,
用 C o n A对胰岛及受鼠联合处理 , M S T延长为 25 . 2 士 4 . 4天 (P < 。 . 0 0 5) ;实验证明C o n A有显著抑制排异
反 应的作用 。对c on A作用机理的初步研究表明 : 荧光素标记 的C o n A能与胰岛良好结 合 ,有可能覆盖组织
相容抗原 , 注射 C o n A后 , 小鼠淋巴细胞对同系小鼠淋转反应显示一定的抑制作用 。
主皿词 刀豆球蛋白 A , 胰岛 ; 淋巴细胞
国内外学者用体内及体外实验方法证明 : 下 。
C on A 预处理能延长小鼠移植皮肤 “ ’ , 大鼠移 血糖测定 : 从小鼠眶后静脉丛取血 , 用葡
植心脏 ` 2 》 、 狗移植肾脏 `” 及胰腺“ ’ 的存 活 时 萄糖氧化酶法 ( 北京化学试剂公司试剂 ) 测受
问 。 但是 , 迄今尚未见有 关 胰 岛 移植时使用 鼠不禁食血糖 。 受鼠在胰岛移植后 1 一 4 天 血
C on A 处理 的工作报告 。 考虑到糖尿病时使用 糖下降到正常水平 ( < 2 0 m g / dl )为移植成功 ,
类固醉缴素类免疫抑制剂会加重糖代谢障碍 、 血糖维持正常后再次上 升 到 > 2。。m g / dl 为 排
寻求新蛇抗排异措施对胰岛移植更有其特殊实 异开始 。
践意义 。 本文报告找们在小鼠胰岛移植模型上 实验分组 : 实验分 4 组以观察 C o n A 处理
用 C o n A 进行胰岛处理及受体处理 以延长移植 对胰岛移植的影响 。 第一组 (对照组 ) : 移植未
胰岛存活的实验结果 , 并对 C on A 的作用机理 经处理的新鲜胰岛 。 第 二 组 ( G T组 ) : 移植
进行了初步探讨 。 经C O n A处理过的肤岛 。 第三组 ( G R组 ) : 移
材 料 及 方 法 植未经处理的胰岛 ( 如第一组 ) , 但移植后给
动物 : C 5 7B L / 6 ( H 一护 ) 及 B A L B / C ( H 一 受鼠腹腔注射 C O n A ( 10 m g / k g 体重 ) , 从移
罗 ) 小 鼠均米白中画医学科学院 实 验 动 物 中 植当日起 , 每 日注射一次 , 连续注射一周 , 第
心 。 两个品系小 鼠 的 H一 七单型 ( ha lP ot y eP , 四组 ( G T 十 R T组 ) : 移植与 G T 组相同的经
H 一 : K + I 十 D ) 全不相同 。 C O n A处理过的胰岛 , 移植后给受 鼠注射与 R T
模型复制 : 给雄性 8 周龄 以上的 B A L B / C 组相同的C o n A 。
小鼠腹腔注射链脉霉素 ( at r e p t oz ot oC 扭 , ca l一 移植物的预处理 : 将纯净胰岛 6 0 一 7 0 个
b i o e h e m C O ) 2 4 0m g / k g 复制成糖尿病模型 。 放在加有 C o n A ( 2 5m s / L ) 的aH n k s 液中 , 4 ℃
血糖 > 30 om g / dl 的糖尿病小鼠用作移植受体。 作用 10 分钟 , 仔细洗净胰岛后用于移植 。
胰岛分离及移植 : 取 C盯 B L / 6小 鼠 (6 一 8 荧光素标记 C o n A制备`“ , : 先将 C o n A吸附
周龄 , 雌雄不拘 )胰腺 ,经胶原酶 s( 屯m a l型 )连 于 s eP h ad xe G 50 上 , 加异硫氰酸荧光素 ( IF -
续消化 ( ” , , 解剖显微镜下手法挑取获得纯净胰 T C ) , 照后洗脱 结 合 于 eS p h ad ex G 50 上 的
岛。 将 60 。一 7 0 个胰岛移植于受鼠左侧肾包膜 C O n A 一 F I T C , 透析浓缩后备用 。 试验时 , 取小
鼠胰 岛加 Co n A 一 FIT C, 温育后离心洗去游离的
C On A甲IT C , 放荧光显微镜下观察 。 对照用小
鼠胰岛先与不标记荧光素的C on A先温育 , 然后
加 C o n A 一 F I T C 染色 。
抑制性 T 细胞测定 : 给 B A BL / C小鼠腹腔
注射 C on A ( 如 R T组 ) , 对照组注射生理盐水
一周 , 然后分离脾淋巴细胞 , 经丝裂霉素处理
后用作抑制细胞 , 另取正常 B A BL / C 小鼠脾淋
巴细胞作效应细胞 , 将抑制细胞与效应细胞混
合加入 C o n A ( 卜g加 l ) , 3了℃ 5 % C o : 培养 7 2
小时 ,终止培养前 1 6小时加 3 H一 T d R ,测定效应
细胞摄取 , H一 T d R 产生的放射性 ( cP m值 ) 。
结 果
各组动物移植后排斥反应发生的时间及移
植胰岛平均存活时间均列于附表 。 各组动物的
移植胰岛存活率见 附图 。
ù欲é辞尼仁寄姿匀念
移 位后大狱
附图 小鼠同种移植存活情况
附表 C o nA 处理后小眼同种跳岛移植物存活时间
带P数岛植天移数物斥动排个岛胰每组别 处理
1 N O
动物数 移 植 胰平均存活夭
1 4
,
1 4
1 8
2 3
> 1 0 0 火 1 1 4 。 1 士 2 。 5
2 C o n A > 1 0 0 x Z 2 5 士 5 。 4 < 0 。 0 0 0 5
C O D A
C o n A
2 3 一 2 3
2 4
,
> 1 0 0 x 3
> 1 0 0 x 4
2 0
。
2 士 3 。 3
2 5
。
2 士 4 。 4
< 0
。
0 5
< 0
。
0 0 05
TGR
G T 十 R T
注 : 朴与对照组相比较
对照组的移植胰岛未经 C on A 处理 , 其 一平
均存活时间为 14 . 1 士 2 . 5天 ,在三个实验组中 ,
不论用 C O n A 单独处理胰岛或受体 , 及既处理
胰岛又处理受体 , 均可导致移植胰岛存活时间
显著延长 , G T 组平均存活时间为 25 土 5 . 4 天
( P < 0
.
0 0 0 5 )
, R T组为 2 0 . 2 士 3 . 3天 ( P <
0
.
0 5 )
,
G T
一卜 R T 组 为 公5 . 2 士 4 . 4 天 ( P <
0
。
0 0 0 5 )
。
将各实验组 的结果进行比较 , 则 R T 组与
G T + R T组的胰岛平均存活时间有显著性差别
( P < 0
.
05 )
,
G T组与 R T 组的差别显著性为
P = 。 . 0 5 , G T组与 G T 十 R T组间差别不显著 。
由此可见 , 在这三种 C on A 处理方式中 , C On A
对移植物的预处理作用最强 。
对照组移植胰岛的 10 0天存活 率 为 10 % ,
而 G T 组 、 R T组及 G T + R T 组的 10 0天存活率分
别为 25 % 、 3了. 5%及 40 % , 以移植物与受体联
合处理效果最佳 。
c on A J I T c 与胰岛共温育后 , 胰岛显示明
亮的荧光 , 若以不标记荧光素的 C on A 先与胰
岛作用 , 然后再加 C on A一 F I T C , 则胰岛不被荧
光着色 , 说明 C On A 确能与胰岛良好结合 , 特
异地封闭共结合部位 。
抑制性 T细胞测定结果表明 : 如注射C劝n A
组小 鼠的淋 巴细胞后 , 淋巴细胞增殖反应的平
均 “ pm 值为 1 6 8 4 0 . 9 士 3 6 1 , 与此同时 , 加对
照组小鼠的淋巴细胞后平均 cP m 值为 2 05 4 2 . (
士 5 2 8 9 , 注射 C on A 组小鼠淋巴细胞似有一益
程度的抑制效应 。
讨 论
我们的实验结果表明 : 移植前用 OC n A 又
胰岛进行预处理 , 或移植后给受体注射 C O n A
均能使移植物存活时间显著延长 , 对移植及弓
体联合处理显示 了一定的协同效果 , 从而证二
了 C O n A 在同种胰岛移植中的免痊抑制作用 `
COn A 在同种移植中的抗排异作用机理
·
5 6
不清楚 。 我们 的实验表明 , C O n A 确可与胰岛
良好结合 。 C On A 与细胞膜上受体结合时可能
覆盖组织相容抗原 , 从而障碍了受体免疫系统
对移植物的识别 `” 。 已有工作证明 : 用 co n A
对大鼠肾细胞进行预处理后 , 兔抗 鼠肾抗体即
不能再与鼠肾细胞结合 ` 8 ’ 。 这种覆盖作用在胰
岛移植中应显示得更为明显 , 因为分离的胰岛
比完整器官暴露的表面积更大 , 从而与 C O n A
接触的面积更大 , 有利于对较多的细胞表面抗
原覆盖 。
一普通认为 , 促发移植胰岛排异的主要免疫
细胞是带有 aI 抗原 的细胞 , 尤其是树突状细胞
( d e n t r i t i c c e l l )
。
C o n A也有可能通过作用于
这些细胞而消除排异反应 。
在我们实验中 , 给受体注射 C on A 也能显
著延长移植胰岛存活时间 。 推测可能是 C o n A
在体内激活 T 抑制细胞从而 减 弱 了 排 异 反
应 `” 。 W a s i k曾报告 ,给小鼠注射 C o n A后 , 能通
过诱导 T 抑制细胞生成而使M L C及 T 杀伤细胞
增殖被抑制 “ 。 ’ ,我们对 T 抑制细胞功能检测的
结果表明 , 注射 C O n A 后 , 小鼠淋巴细胞对反
应细胞呈现一定的抑制作用 , 但与 对 照 组 相
比 , 差别不够显著 , P 二 0 . 14 。 推测差别不显
著或许与实验数量较少有关 。 再者 , 作抑制细
胞功能检测一般需在体外用C O n A进行诱导 `。 ’ ,
可能应在检测方法上再作改进 , 才能更好地反
映出抑制效应 。 当然 , 如 T Ol ed 。 一erP ey ar 等所
指出 , C O n A 的作用十分复杂 , 它对机体免疫
功能有多方面的影 响 , 必须进行更多方面的工
作 , 才能阐明 C O n A抗排异作用 的机理 。
参 考 文 做
1
。
M a r k o w i tz H
, e t a l
.
I m m u n o s叩p r e s s l v e
a e t i v i t y o f e o n e a n a v a li n A
.
S e i en e e 1 9 69 ;
1 6 3 : 4 7 6
。
2
.
W e i l R
, e t a l
.
C o n e an a v a l in A
.
E f f e e t s o n
r at h e ar t a l lo g r a f t s 廷r v i v a l a n d im m u n e
r e s P o n s e s
.
T r a n s P l a n t a t i o n 1 9 7 4 ; 1 7 ; 6 0 0
。
3
.
T o l e d o
一
P e r e y r a L H
, e t a l
.
D e t e r m i n i n g
f a e to r s i n t h e P r o l o n g a t i o n o f k id n e y a l o g
·
r a f t s u r v i v 吐 by p r e t r e a tm e n t w i t h C o n
A
.
T r a s P l a n t a t io n 1 9 7 9 ; 2 7 : 1 4 6
。
4
.
C h e e M
, e t a l
.
Im P r o v e m e n t o f P a n c r e a s
a l lo g r a f t s u r v i v a l a f t e r P e r f u s io n w i t h e o n
-
e a n a v a l in A
.
J S u r g R e s 1 9 7 7 , 2 2 : 3 7 6
。
5
. 祝希媛 , 等 . 小鼠胰岛分离及实验性移植方
法 . 生理科学 2 9 5 5 . 5 : 3 8 6 .
6
. 朱正美 , 等 . 刀豆球蛋白 A 的荧光标记方法 .
生物化学与生物物理进展 1 9 8 1 ; 2 : 5 .8
7
.
R a y p
, e t a l
.
M a s k i n g o f e e l 以 a r h i s t o e o -m
p a t i b i l i t y a n t i郎 n s w i t h Ph y to m it i g e n s . J
l m n以u no l 1 9 7 3 ; 1 1 0 : 1 6 9 3
。
8
. 陈惠芳 . 器管移植前预处理的效果及 其 作用
机理的探讨 . 上海 医科大学博士研究生论文
1 9 8 5年 。
9
.
S im m o n s R L
, e t a l
.
M o d i f y i n g t h e im m u
-
n o g e n e e i t y o f e e l l m e mb
r a n e 乙a n t i g e ns .
A爪 J C l i n P at h 1 9 7 5 ; 6 3 : 7 1吐。
1 0
。
W a s i k M
, e t a l
.
l m nt u no suP P r e昭i v e e f f e e t
o f e o n e a n a v a l in A
. 赶 e h I t Q幻以u no l T h e r a P
E x P 1 9 7 8 ; 2 6
: 3 2 7
。
( 1 9 8 9年 5月 2 6日收稿 , 1 9 9 0年 3月 1 4日修回 )
E f fe e t o f e o n e a n a v a l i n A o n m ou
s e i s l e t t r a n s P l a n at t i o n
Z h u X i
一
Y u a n , H e J i n
, e t a l
D e p a r t nr e n t o f P a t h o p h y s i o lo g y
,
B e i ji n s F r i e n d s h i P oH
s p i t a l
,
B e i ji n g
A b s t r a e t T o t e s t w he the r C
o n A h a s a n t i r e je e t i o n e f f e e t o n m o u s e i s l e t a l l o g ar f t
,
6 o c一 7 0 0 h a n d p i c k ed i S l et s o f c 5 7B L / 6 m i e e w a s t r a n s p l a n t ed b e n e a t h the k id en y c a p s u le o f
t he S t r印 t o z o t o c i n i n d u c e d d i a b e t i c B A L B / C r ec i p ie n t s . I n co n t r o l g r o u p t he m ea n s u r v i v a l
t im e (M S T ) of t h e g r a f t s w a s 1 4
.
1 士 2 . 4 d a y s . T代a tm e n t w i t h C o n A s ig n i f i e a n t l y p r o -
l o n g t h e M S T O f t h e i s l e t a l l呀 r a f t s . I n g r o u p w i t h c o n A t r e a t m e n t of t h e d o n o r i s le t s
` 7 5.
P r i o r to th
e tr an s pl n a ta ti o n th e M sr w a s 2 5士 5. 4 d a y s .T h e M ST i n e r e a se d si gi f i e an tz y
af te r iP i n je e ti o n o f Co n A to r e e i P ie n tmi e e
.
T h e e o m b
i n e d tr e a tme n to f i sl e tn a dr e e i P i e n t
w i th Co n A r e su l te di n aP r o l o n g a ti o n o f M ST to 2 5
.
2士 4 . 4 d a y s .T h e e x P e r i me n ts
e
on
e e r n i n g th
e me e h an i s m so f th e an ti r e j
e c ti o n e fe e to f Co n A
sh o w e d th a tCo n A w a s
al be to e o mi bn e w i th th e i sl e te e l l me m br n ae w 日 1 m a sk i n gP e r h a p s th e h i s to e m p a ti i l bi ty
an ti ge n
.
Fu r th e r mo r e the l y mP h
o e y te o sf mi c e af te r i
·
P Co n A i n je e ti o n su P P r e s se d the
l y m ph o e y te P r o l if e r a tio n r e c a ti o n o f th e s yn e r i gc mi c e to mi to ge n
·
M e H SCo n c an a v al i n A ;I sl an d so f l an ge r h an s ;L y mP h o c y te s
用 肝 细 胞 生 长 素 治 疗
鼠 实 验 性 肝 损 伤
空军广州医院科研室 孔祥平
肝刺激因子能刺激肝细胞 D N A 合成 。 我们参考
L a br e q u e 方法并加 以改进 , 于 1 9 8 8 年 从乳猪新鲜肝
脏提取能促进活体大鼠肝细胞 D N A 合成的小分子多
肤一肝细胞 生 长 素 ( H G )F 。 治 疗 C cl 4 及 D 一半乳
锗胶 (D 一 G A L N ) 诱发的鼠肝损害 , 探讨其 疗效 。
材 料 与 方 法
一 、 模型 (一 )动物 : 1 . N IH 纯系小鼠 , 体 重
1 5~ 2 0 9
, 雌雄各半 。 2 . S D 大鼠 , 体重 1 8 0一 Z J Og ,
雄性 。 均由中山医科大学动物室提供 。 ( 二 ) 药物 :
z
。
4 0 % C C l’ 液 体 石腊液 。 2 . D 一 G A L N 。 ( 三 ) 诱
发 : 动物于 Z r ~ 2 2 ℃室 温 安静饲养一周后 , 于实验
第 1 、 4 天 以 1· 5川 / g 体重于小鼠腹腔 注射 4 。% C cl `
液体石腊液 。 第 2 次注射后 24 h 杀鼠 , 查 A L T ( 改
良赖氏法 ) 及肝脏病理 。 S D 大 鼠禁食 12 h 后 , 参考
F ar cn a vi l a 方法 , 据预实验结果按 Z m g范 体重一次
性腹腔注射 D 一 G A L N 。 s h 后恢复饮食 , 4 8 h 杀鼠 3
只 , 查 A L T 及病理 。
二 、 治疗方案 ( 一 ) H G 尸 : 多肚含量 20 m g /瓶 ,
干粉 , 4 ℃保存 。 ( 二 ) 联苯双醋 ( 中国 医科院天然
植物药物研 究 所 药 厂 ) 。 ( 三 ) 方法 : 1 . 将 小 鼠
分 3 组 , 每 组 6 0 只 。 ( 1 ) H G F 组 , 以 0 . lm g / g 体
重每 日腹腔 注射一 次 。 (2 ) 联 苯 双 醋 组 , 每 次 以
O
。
1 5m g /g 体重灌胃 , 每日三次 。 ( 3) 盐 水组 , 每 日
腹腔注射生理盐水 0 。 5成 /只 。 以上各组于第 2 次 C C !’
处理后 24 h 行上述治疗 , 连续 12 天 。 期间每日杀鼠 5
只 , 做有关检查 。 2 . 将 D 一 G A L N 处 理 48 h 后存活
的 6 6只大鼠平均随机 分 两 组 , 一组将 H G F 溶于生
郑 国池 张宜俊 陈尤明 扬 富强
理盐水中 , 以 。 . 抓m名/ g 体重 , 一次注入腹腔 。 另一
组注射同量生理盐水 , 观察 30 天 。 期间根据不卜同时间
杀鼠 , 做有关检查 , 不列入存活率 。
结 果
一 、 C C I` 组小鼠 于 第 2 次注射 C C 14 后 2 4 h ,
A L T 17 8 士 2 1 . 4 U /d l ( 健康 班 H 小鼠 1 0只 , A L T又
士 S D 28 . 8 士 7 . I U / dl ) 。 组织像呈大部分肝细胞明显肿
胀 , 较多肝细胞坏死 , 肝小叶结构不清 , 间质可见炎
细胞浸润 。 S D 大鼠在 D 一 G A L N 处理 48 h , A L T又
士 S D 2 2 . 8 士 2 7 . 4U /d l ( 健康 S D 大 鼠 1 0只 , A L T
又 士 T D 3 3士 9 . OU d/ 1 ) 。 肝脏主要呈肝小叶静脉及肝
窦扩张 , 重度淤血 , 肝索结构破坏 , 伴有大量肝细胞
坏死 , 汇管区少许淋 巴细胞浸润 。 表明已进入暴发性
肝衰竭 ( F H )F 状态 。
二 、 C C I` 组小鼠治疗后 A L T 及 肝 组织病变动
状态变化 。
H G F 与联苯双醋组于用药第 3 天 , A L T 活力分
别为 5 2 士 6 . 2U / dl 和 5 0 . 5 土 5 . 7 U /dl 而 盐 水 组为
12 2
.
4 士 8 . 8 U d/ I , 两者 有 显 著 差 异 ( P < 0 . 05 ) 。
H G F 组 于第 6 天 、 联苯双醋组于第 10 天 、 盐水组于
第 12 天小鼠肝脏病变恢复正常 。 H G F 组 较其它两组
肝脏病变明显轻微 。
三 、 F H F 大 鼠 , H G F 组 3 0天 存 活率 4 7 。 8 %
( 1 2 / 2 3 )
, 盐水组仅为 1 7 . 3% ( 4 / 2 3 ) , 两组有显
著差异 ( P < 。 . 0 5 ) 。 H G F 组治疗后第 2 天 , 肝组织
像显示 , 小叶中央静脉扩张 , 肝细胞轻度空泡变性 ,
( 下辱争第62 页 )