全 文 ：不同产地药用大黄中５种游离蒽醌的含量测定
刘远平，陈　粟
（重庆太极实业（集团）股份有限公司，重庆４０１１４７）
摘　要：目的：测定不同产地药用大黄中５种游离蒽醌的含量，用以评价不同产地的药用大黄的质量，为
实际生产和临床应用大黄药材的选择提供参考。方法：反相高效液相色谱法，Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８色谱柱
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－０．１％磷酸水＝７５∶２５等度洗脱；流速：１ｍＬ·ｍｉｎ
－１；柱温：
３５℃；检测波长２５４ｎｍ。结果：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚在进样量为２１．２～
１２７．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９）、３８．７～３８７．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９）、１７．３２～１７３．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９）、３４．６４～３４６．４（ｒ
＝０．９９９　９）和９１．４～３６５．６μｇ（ｒ＝０．９９９６）范围内线性关系良好。精密度和重复性考察中，各测定成分
的ＲＳＤ值均小于３％，表明仪器的精密度及方法的重复性良好。稳定性试验表明各测定成分在２４ｈ内
稳定性良好。加样回收试验中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚平均回收率分别为
９９．２９％、１００．７６％、９８．７２％、９９．０７％、１０１．０４％，ＲＳＤ％分别为１．７２％、１．４０％、１．７９％、１．８０％、
１．６１％。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚四川产含量依次为１．０９９　８ｍｇ·ｇ－１、
２．６９６　３ｍｇ·ｇ－１、０．７９６　４ｍｇ·ｇ－１、３．０９４　２ｍｇ·ｇ－１、１．００３　７ｍｇ·ｇ－１；陕西产含量依次为０．９９８　３ｍｇ·ｇ－１、
２．３９８　９ｍｇ·ｇ－１、０．６８４　７ｍｇ·ｇ－１、２．８９４　８ｍｇ·ｇ－１、０．８７４　８ｍｇ·ｇ－１；云南产含量依次为０．９９８　０ｍｇ·ｇ－１、
２．０９１　４ｍｇ·ｇ－１、１．００６　０ｍｇ·ｇ－１、２．５９３　９ｍｇ·ｇ－１、１．２８３　６ｍｇ·ｇ－１。结论：四川产的芦荟大黄素、大黄
酸、大黄酚的含量比陕西与云南的高；云南产药用大黄素与芦荟大黄素的含量较高。
关键词：药用大黄；游离蒽醌；ＨＰＬＣ；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）１５－００４２－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６１５０１７
收稿日期：２０１６－０３－０７
作者简介：刘远平（１９７４－），男，重庆太极实业（集团）股份有限公司主管中药师，研究方向为中药质量控制。
Ｆｉｖｅ　ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＲｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｆｒｅｅ　Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｒｈｅｕｍ
Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ　ｆｒｏｍ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｒｅｇｉｏｎｓ
Ｌｉｕ　ＹｕａｎＰｉｎｇ，Ｃｈｅｎ　Ｓｕ
（Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｔａｉｊｉ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（Ｇｒｏｕｐ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０１１４７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａｎ　ＨＰＬＣ－ＤＡＤ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｏｅ－ｅｍｏｄｉｎ，Ｒｈｅｉｎ，Ｅｍｏｄｉｎ，Ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ，Ｐｈｙ－
ｓｃｉｏｎ　ｉｎ　Ｒｈｕｂａｒｂ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　ａ　ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ　Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｂｉｌｅ
ｐｈａｓｅ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　１．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（Ａ）ａｎｄ　Ｍｅｔｈａｎｏｌ（Ｂ）ｆｏｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎｔ　ａｔ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅ
ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　２５４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｌｉｎｅｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆａｌｏｅ－ｅｍｏｄｉ，Ｒｈｅｉｎ，Ｅｍｏｄｉｎ，Ｃｈｒｙ－
ｓｏｐｈａｎｏｌａｎｄ　Ｐｈｙｓｃｉｏｎ　ｗｅｒｅ　２１．２～１２７．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９），３８．７～３８７．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９），１７．３２～１７３．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９），３４．６４～
３４６．４（ｒ＝０．９９９　９）ａｎｄ　９１．４～３６５．６μｇ（ｒ＝０．９９９　６）；ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｓｔｒｕ－
ｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｆａｖｏｕｒａｂｌｅ，ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　３％．Ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ｗｉｔｈｉｎ　２４ｈ；ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ　９９．２９％、１００．７６％、
９８．７２％、９９．０７％、１０１．０４％ａｎｄ　ｔｈｅ　ＲＳＤｓ　ｗｅｒｅ　１．７２％、１．４０％、１．７９％、１．８０％ａｎｄ　１．６１％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｌｏｅ－ｅｍｏｄｉｎ，ｒｈｅｉｎ，
ｍａｄｅ　ｉｎ　ｓｉｃｈｕａｎ　ｒｈｕｂａｒｂ　ｐｈｅｎｏｌ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｈｉｇｈ　ｆｏｒ　ｆｒｏｍ　ｓｈａａｎｘｉ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ａｎｄ　ｙｕｎｎａｎ；Ｙｕｎｎａｎ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｅｍｏｄｉｎ　ａｎｄ　ａｌｏｅ　ｅｍｏｄｉｎ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｈｅｕｍ　Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ　Ｂａｉｌ；Ｆｒｅｅ　Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ；ＨＰＬＣ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
—２４—
　　大黄是临床常用中药，别名川军、锦纹、将军等。２０１５
版《中国药典》［１］规定大黄为寥科植物掌叶大黄Ｒｈｅｕｍ　ｐａｌ－
ｍａｔｕｍＬ．、唐古特大黄 Ｒｈｅｕｍ　ｔａｎｇｕｔｉｃｕｍ　Ｍａｘｉｍ．ｅｘ
Ｂａｌｆ．或药用大黄Ｒｈｅｕｍ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ　Ｂａｉｌ．的干燥根和根茎
。药用大黄分布于四川、湖北、陕西南部、云南［２］，始载于
《神农本草经》，列为中品，因其色黄而得名。大黄具有活血
去疲、凉血解毒的作用。临床上常用于实热便秘、泻利不爽
、湿热黄疽等。大黄素、大黄酸 、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟
大黄素等蒽醌类成分不仅是大黄的有效活性成分还是评价
大黄质量的标志性成分［３］。本实验主要针对药典规定的药
用大黄进行分析，比较不同产地药用大黄中上述５种游离
蒽醌的含量，为临床应用等提供参考。
１　仪器与试药
１．１　仪器
高效液相色谱仪（安捷伦１２６０），ＤＡＤ检测器；ＢＰ２１１Ｄ
型电子天平（德国）；超声清洗器（必能信超声有限公司）；色
谱柱：ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）。
１．２　试剂
色谱乙腈和甲醇（色谱纯，美国天地），娃哈哈纯净水，
磷酸（色谱纯，成都金山化学试剂有限公司），其他试剂均为
分析纯。
１．３　对照品
大黄酸（批号：Ｃ－０２２－１４０７２６）；大黄素（批号：Ｃ－００６－
１４０５２０）；大黄素甲醚（批号：Ｃ－００８－１５０７１０）；芦荟大黄素（批
号：Ｄ－００５－１４０４２９）；大黄酚（批号：Ｃ－００８－１４０７２７－２）。
１．４　药材
药用大黄由公司采购，经鉴定，均符合２０１５年版《中国
药典》的要求。药用大黄的产地分别为四川、陕西、云南。
２　溶液制备
２．１　对照品以及混合对照品的制备
分别取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲
醚适量，精密称定，加甲醇制成每１ｍＬ分别含芦荟大黄素
０．２０ｍｇ、大黄酸０．１９ｍｇ、大黄素０．１８ｍｇ、大黄酚０．１７ｍｇ、
大黄素甲醚０．１６ｍｇ的对照品溶液。分别取上述对照品溶
液２ｍＬ置入１０ｍＬ容量瓶中制成混合对照品。
２．２　供试品溶液制备
依据文献［１］，取大黄药材粉粹（过四号筛），约０．５ｇ，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，称定重量，
加热回流１ｈ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇
匀，取续滤液即得。
３　色谱条件
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ× ４．６ｍｍ，５μｍ），柱温
３５℃，检测波长２５４ｎｍ，流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，流动相为甲醇－
０．１％磷酸水＝７５∶２５，等度洗脱 。在上述色谱条件下分别
取混合对照品、大黄样品采用自动进样１０μＬ，芦荟大黄素、
大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的保留时间分别为
８．５２１ｍｉｎ、１４．２１９ｍｉｎ、２２．０６２ｍｉｎ、２９．１６３ｍｉｎ、４７．９１０ｍｉｎ。
结果样品中各峰的分离度较好，该条件可以用作药用大黄
中５种游离蒽醌成分的测定。色谱见图１。
图１　混合对照品对照品（Ａ）、药用大黄（Ｂ）样品
ＨＰＬＣ色谱
４　方法学考察
４．１　线性关系考察
取各对照品，采用不同进样体积进样。以分析物的进
样量（Ｘ）为横坐标、峰面积（Ｙ）为纵坐标作标准曲线，各标
准曲线方程见表１。
表１　五种游离蒽醌的标准曲线及线性范围
分析物 标准曲线 ｒ 线性范围（μｇ）
芦荟大黄素 Ｙ＝７８８４．６ｘ＋４１０５．９　 ０．９９９　９　 ２１．２～１２７．２
大黄酸 Ｙ＝１９１　５．３ｘ～２　０１６．２　 ０．９９９　９　 ３８．７～３８７．２
大黄素 Ｙ＝８　６６９ｘ＋３３７．９８　 ０．９９９　９　 １７．３２～１７３．２
大黄酚 Ｙ＝６　５０５ｘ＋４００．８５　 ０．９９９　９　 ３４．６４～３４６．４
大黄素甲醚 Ｙ＝１１４．７ｘ～１３１５９　 ０．９９９　６　 ９１．４～３６５．６
４．２　精密度考察
在“３”项色谱条件下以混合对照品连续进样６次，记录
芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的峰面
积，计算ＲＳＤ％，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、
大黄素甲醚的 ＲＳＤ％分别为１．０２％、１．７０％、０．９９％、
１．２５％、１．５６％（ｎ＝６），均小于３％，表明仪器精密度良好。
４．３　重复性试验
取大黄样品６份，每份约２ｇ，按 “２．２”项下方法制备样
品，以“３”项色谱方法进行测定，计算芦荟大黄素、大黄酸、
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均含量为０．９８０　１ｍｇ·ｇ－１、
２．１２８　７ｍｇ·ｇ－１、０．７７１　６ｍｇ·ｇ－１、３．１０７　４ｍｇ·ｇ－１、
０．９９１　３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ％分别为１．１８％、１．３４％、１．８１％、
１．０９％和１．９６％，表明该方法重复性良好。
—３４—
４．４　稳定性试验
取同一供试品在０、２、４、８、１６、２４ｈ分别进样１０μＬ，记录
和芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的峰面
积，计算ＲＳＤ％，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、
大黄素甲醚的 ＲＳＤ％分别为０．７８％、１．１０％、０．６２％、
１．３９％、１．７１％，均小于３％，表明供试品在２４ｈ内稳定性良
好。
４．５　加样回收率试验
取已知含量的同一份药用大黄粗粉６份，每份约５ｇ，分
别按药材煎出量的１００％加入芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、
大黄酚、大黄素甲醚的对照品，按“２．２”项下供试品制备方
法制备供试品，按“３”项下的色谱条件进行测定，进样量为
１０μＬ。计算样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大
黄素 甲 醚 的 平 均 回 收 率 分 别 为 ９９．２９％、１００．７６％、
９８．７２％、９９．０７％、１０１．０４％，ＲＳＤ％ 值分别为 １．７２％、
１．４０％、１．７９％、１．８０％、１．６１％＜３％（ｎ＝６），表明该方法
准确度良好。
５　样品测定
取３个产地大黄样品，每个产地样品３份，每份约０．
５ｇ，按“２．２”项下方法制备供试品，按“３”项下色谱条件进行
检测，每份样品进样２次每次１０μＬ。按外标一点法计算各
样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的
含量。见表２。
表２　不同产地药用大黄中５种游离蒽醌的含量
产地 编号
含量（ｍｇ／ｇ）
芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
四川
１　 １．１０８　９　 ２．６７５　９　 ０．８１７　６　 ３．１１７　２　 １．０３０　２
１．０９２　３　 ２．７０１　３　 ０．７９８　８　 ２．９９９　９　 ０．９９９　８
２　 １．１３０　５　 ２．７１０　４　 ０．７８１　２　 ３．０９８　７　 １．００１４
１．１１０　６　 ２．６９０　６　 ０．７７６　９　 ３．１０１　１　 １．００８　９
３　 １．０８７　２　 ２．７００　３　 ０．８００　６　 ３．１４７　６　 ０．９８９　５
陕西
１．０６９　８　 ２．６９９　４　 ０．８０３　４　 ３．１００　５　 ０．９９２　５
平均（ｍｇ／ｇ） １．０９９　８　 ２．６９６　３　 ０．７９６　４　 ３．０９４　２　 １．００３　７
ＲＳＤ（％） １．９３　 ０．４４　 １．８９　 １．６０　 １．４６
１　 ０．９８４　８　 ２．４０５　９　 ０．６９８　１　 ２．９０１　８　 ０．８８９　１
０．９９７　６　 ２．４１６　７　 ０．７００　２　 ２．８９９　９　 ０．９００　１
２　 ０．９５４　３　 ２．３９９　９　 ０．６５４　７　 ２．９００　９　 ０．８７６　９
０．９８５　３　 ２．３８７　７　 ０．６６５　９　 ２．８９９　２　 ０．８５１　２
云南
３　 ０．９７８　１　 ２．４０３　７　 ０．６８９　９　 ２．８７９　９　 ０．８６０　１
０．９６９　８　 ２．３７９　８　 ０．６９９　６　 ２．８８７　６　 ０．８７１　９
平均（ｍｇ／ｇ） ０．９７８　３　 ２．３９８　９　 ０．６８４　７　 ２．８９４　８　 ０．８７４　８
ＲＳＤ（％） １．５２　 ０．５５　 ２．８６　 ０．３１　 ２．０６
１　 １．００３　４　 ２．０８３　７　 １．００３　２　 ２．６１２　１　 １．２６０１
１．０３０　１　 ２．１０９　８　 ０．９９７　８　 ２．５８９　９　 １．２８８　７
２　 ０．９８６　８　 ２．０６９　９　 １．００８　７　 ２．５６７　７　 １．３００　４
１．０００　６　 ２．０９８　４　 １．０３４　３　 ２．６０２　１　 １．２９８　１
３　 ０．９８９　９　 ２．０９６　８　 １．０００　７　 ２．５９１　８　 １．２６７　１
０．９７７　６　 ２．０８９　９　 ０．９９１　８　 ２．６００　２　 １．２８７　３
平均（ｍｇ／ｇ） ０．９９８　０　 ２．０９１　４　 １．００６　０　 ２．５９３　９　 １．２８３　６
ＲＳＤ（％） １．８３　 ０．６５　 １．４８　 ０．５８　 １．２８
６　结果与讨论
由表２可知，四川产芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚的含
量较陕西与云南的高，但总体差别不大。云南产药用大黄
素与芦荟大黄素的含量较高。
蒽醌类成分的含量测定文献报道较多，故大黄中游离
蒽醌的测定方法相对稳定成熟。三个产地药用大黄中五种
游离蒽醌的含量有所差别，可能是由于药用大黄的生长环
境、生长年限、存放时间［４］差别引起的。在后续的研究中会
进一步考察环境因素，例如肥料的使用及肥料种类、光照等
对大黄中游离蒽醌含量的影响。
参考文献：
［１］　国家药典委员会．中国药典（一部）［Ｓ］．北京：化学工业出版
社，２０１５：２４．
［２］　林瑞民，李磊，陈华山，等．不同品种不同产地大黄中五种蒽
醌类化合物的 ＨＰＬＣ测定［Ｊ］．中药材，２００５，２８（３）：１９７－
１９８．
［３］　戎筱卿，陈晓芳，殷建，等．不同产地大黄质量分析［Ｊ］．牡丹
江医学院学报，２００９，３０（５）：２９－３２．
［４］　李佳，李红磊，许珊．３种大黄饮片在贮存过程中５种蒽醌成
分的含量变化［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１７（１０）：９４－
９７． （编辑：宋勇刚）
—４４—