全 文 ：北方园艺 2008(3):199 ～ 201 ·生物技术 ·
第一作者简介:王蕾(1984-),女 ,硕士 ,主要从事园林植物组织培
养研究。
通讯作者:顾德峰。 E-mail:gu.df@163.com。
收稿日期:2008-01-22
银 柳 胡 颓 子 茎 尖 组 织 培 养 的 研 究
王 　蕾1 , 李 东升2 , 顾德 峰1
(1.吉林农业大学园艺学院 ,吉林长春 130118;2.德惠市农业开发总公司 ,吉林德惠 130300)
　　摘　要:以银柳胡颓子(Elaeagnus angust i folia L.)茎尖为外植体 ,MS为基本培养基 ,添加不
同比例的植物生长调节剂 ,进行了离体培养。结果表明 ,茎尖初代培养基最佳组合为:1/2 MS+
BA 3.0mg/L+IAA 0.01mg/L+蔗糖20 g/ L+琼脂 10 g/ L;芽继代增殖的最适培养基为:MS+
KT 1.0 mg/L +蔗糖20 g/ L+琼脂 7.5 g/ L;无根苗转移到 1/2 MS+NAA 0.1 mg/ L+蔗糖
20 g/L+琼脂 7.5 g/L的培养基上 ,生根率达 100%。
关键词:银柳胡颓子;茎尖;组织培养;离体快繁
中图分类号:S 793.904　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2008)03-0199-03
　　银柳胡颓子(Elaeagnus angusti folia L.)属胡颓子
科胡颓子属落叶灌木或小乔木 ,宜作盐碱和沙荒地区的
绿化用[ 1] 。但易受季节 、气候 、地点等因素的限制 ,繁殖
效率低 ,难以满足生产和市场的需求。关于银柳胡颓子
的茎尖组织快繁工作尚未见详细的报道。据资料记载 ,
以茎尖作为外植体更有利于离体扩繁[ 2] ,因此 ,通过组
织培养进行无性繁殖 ,可为银柳胡颓子的繁殖方法开辟
一种新的途径。
1　材料与方法
1.1　试验材料
夏季 ,采自吉林农业大学校园内多年生银柳胡颓子
树 ,取当年抽出的嫩枝为试验材料。
1.2　方法
1.2.1　初代培养　将材料冲洗干净后浸入 70%的酒精
30 s ,无菌水冲洗3次 ,再用 1∶1稀释好的“84”消毒液灭
菌 ,其中加入少量吐温 80 ,灭菌时间见表2。最后用无菌
水冲洗 5～ 6次 ,浸泡 30 min[ 3] 。剪切成 0.5 ～ 1.0 cm的
小块 ,接入初代培养基中培养(见表 1)。培养温度(27±
1)℃,光照 16 h/d ,光强 1 000 ～ 3 000 lx[ 4] 。20 d后观察
记录愈伤组织的诱导情况。
1.2.2　继代培养　初代培养 30 ～ 40 d后 ,愈伤组织上
的丛生芽长至 0.5 ～ 1.0 cm 时 ,可将其切成 0.5 cm×
0.5 cm的小块 ,转入继代培养基WL1 、WL2 、WL3 、WL4
和WL5中(见表1),培养 30 d后 ,芽体长高变成单株 ,然
后转入WL6 、WL7和WL8中进行二次继代培养 ,再经 20
d培养后 ,观察植株的生长状况。
1.2.3　移栽　当试管苗高达5 cm以上 ,生长健壮 ,便可
移栽。移栽前 ,在温室内去掉培养瓶上的塑料套练苗
3 ～ 7 d(见图1 ,图 2)。
　　表 1　　　　培养基的种类及成分
初代培养 继代培养
培养基编号 成分 培养基编号 成分
X1 1/2 MS+BA 3.0+NAA 0.01 WL1 1/2 MS+BA 0.5
X2 1/3 MS+BA 1.0+IBA 0.2 WL2 1/2 MS+BA 1.0
A11 MS+BA 2.0+NAA 0.02+ZT 0.1 WL3 1/2 MS+BA 3.0
Z1 MS+BA 5.0+IBA 0.01+GA 0.5 WL4 MS+KT 1.0
ZB1 MS+BA 5.0+NAA 0.01 WL5 MS+KT 2.0
ZB2 MS+BA 8.0+NAA 0.01 WL6 MS+NAA 0.1
WL7 1/2 MS+IAA 0.01
WL8
MS+6-BA 2.0+NAA
0.1+ZT 0.1+GA 0.2
2　结果与分析
2.1　灭菌时间的长短对外植体成活率的影响
银柳胡颓子的茎尖非常幼嫩 ,对灭菌剂的反映十分
敏感。能否进行有效的灭菌处理 ,是其组织培养迈向成
功的关键一步。为了提高其成活率 ,分别进行了5种时
间的灭菌试验(见表 2)。从表2中可以看出灭菌时间越
长 ,成活率越低。当灭菌 3.5min时 ,外植体的成活率最
高 ,达90.9%。而其它处理成活率较低 ,可见灭菌时间
不宜过长。
　　表 2　灭菌时间对银柳胡颓子茎尖成活率的影响
灭菌时间/ min 外植体数/个 变褐数/个 成活率/ %
20
10
5
4
3.5
8
18
27
23
11
6
4
7
18
1
25.0
78.0
74.0
65.0
90.9
2.2　培养基对愈伤组织及不定芽诱导的影响
199
·生物技术· 北方园艺 2008(3):199～ 201
初代培养约15 d ,外植体开始萌动;20 d后茎尖颜色
变绿 ,基部逐渐膨大 ,茎尖开始肿胀 ,有愈伤组织形成;
40 d后形成丛芽。试验观察表明 ,银柳胡颓子茎尖初代
培养 20 d后 ,在不同的培养基上愈伤组织及不定芽的诱
导状况不同(见表 3 ,表4)。从表 3中可以看出 X1培养
基中愈伤组织诱导率最高(100%),长势也最旺盛 ,并最
先萌发出幼芽。而其它几种培养基内 ,愈伤组织的生长
状况均不如 X1 。
　　表 3　银柳胡颓子培养20 d后愈伤组织诱导情况
培养基 接种数量/瓶 愈伤组织诱导情况 愈伤组织诱导率/ %
X1
X2
A11
Z1
33
24
27
26
愈伤组织已显现、长势茂盛 、外植体
生长良好 、为绿色 ,基部膨大。
愈伤组织较少 、泛黄 、植株顶端变
黄 、有萎蔫的现象 、基部膨大。
和 X2相似、长出的愈伤组织泛黄、
面积较小。
愈伤组织显现 、面积小 、植株基部开
始膨大 、并且有裂缝的迹象。
100
75
80
42
　　表 4 茎尖培养 40 d和 60 d后不定芽诱导情况
培养
基
培养40 d后芽的诱导情况 培养60 d后芽的诱导情况
外植体数/个 发芽数/个 诱芽率/ % 外植体数/个 发芽数/个 诱芽率/ %
X1 33 30 91 32 30 93
X2 10 6 60 10 6 60
A11 14 6 40 14 6 40
Z1 26 20 77 25 20 80
ZB1 7 5 57 5 2 40
ZB2 7 3 43 7 3 43
　　由表4可知 ,培养 40 d和60 d后 ,X1培养基中诱芽率
均超过90%,远远高于其它处理 ,并且幼芽的生长状况正
常。而其它几种培养基的幼芽诱导率较低 ,幼芽的状态也
不及X1 ,出现畸形苗 ,苗丛密集 ,过度微型化。由此认定 ,
X1培养基最适宜于银柳胡颓子的茎尖初代培养。
2.3　继代培养中植株生长状况
继代培养中植株生长状况见表5 ,可以看出 ,WL4和
WL6培养基中植物生长正常 ,成苗率高 ,生根率为 100%
(见图3 、图4)。这2种培养基较适宜于幼芽的增殖和生
根培养。而在其它几种培养基中 ,幼苗均有不同程度的
畸形现象。
　　表 5 银柳胡颓子在继代培养基上的生长状况
培养基编号 生长状况
WL1 苗高5～ 7 cm、但茎较细、有的叶片泛白
WL2 苗高5 cm左右、茎尖有萎蔫现象
WL3 植株低矮 、只有 2～ 3 cm、基部膨大 、成苗率低
WL4 苗高6 cm左右、生长直立 、茎叶保持绿色、成苗率达 80%
WL5 苗高6～ 8 cm ,生长情况和 WL4相似、但茎较细 、移栽成活率会低
WL6 形成完整植株 、苗在6 cm左右 、较粗壮直立 、基部长有小叶 、愈伤组织变黑、根系生长旺盛 、每根苗均长有8 ～ 12条粗壮根
WL7 形成完整植株 、苗高在 10 cm左右 、有的较细弯曲、部分片显白色 、但植株保持绿色、个别苗长有2～ 3条细细的白根
WL8 不形成完整植株、愈伤组织大面积繁殖 、先长出的已变黄、不长根长苗
　　　图 1　银柳胡颓子的移栽苗　　图 2　银柳胡颓子组培苗的练苗　　图 3　培养基 WL6 中根的生长情况　图 4　培养基 WL4 中生长的组培苗
参考文献
[ 1] 　陈有民.园林树木学[ M] .北京:中国林业出版社 , 1988:593-594.
[ 2] 　Sanatombi K , Sharma G J.In vit ro regeneration and mass mul tiplica-
t ion of Cap sicum annuum L [ J] .Journal of Food, Agriculture &Environ-
ment ,2006 ,4(1):205-208.
[ 3] 　陈芳 ,陈子牛 ,陆斌 ,等.印楝茎尖组织培养的研究[ J] .云南林业科
技 ,2003(1):8.
[ 4] 　刘文萍,孙英兰.沙棘的组织培养[ J] .北方园艺, 1999 , 126(3):69.
200
北方园艺 2008(3):201 ～ 203 ·植物保护 ·
黄瓜霜霉病抗性与生理生化性状相关关系的遗传研究
刘 玉石 , 丁九敏
(连云港职业技术学院 ,江苏连云港 222006)
　　摘　要:通过对抗病性及生理生化性状的遗传分析表明:抗性及生理生化性状的一般配合力
和特殊配合力均重要 ,但是一般配合力数值远大于特殊配合力数值。例如病情指数的一般配合
力与特殊配合力的比值为 99 ,说明一般配合力比特殊配合力更重要。抗性及其相关性状的狭义
遗传力和广义遗传力均较高 ,这与配合力的遗传分析结果具有一致的趋势。除此之外 ,在抗病性
杂种优势的分析中 ,不同抗性亲本配制的F1代 ,杂种优势均不强。
关键词:黄瓜;霜霉病;抗性;叶绿素;可溶性糖;遗传特性
中图分类号:S 436.421.1+1　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2008)03-0201-03
1　材料
抗病亲本:M3 、M6是经过多代选择抗性稳定的自交
系。感病亲本:M9 、M10是遗传性稳定的感病自交系。以
上所有试材均由沈阳农业大学园艺学院遗传育种教研
组提供。试验采用 Griffing 半轮配的杂交试验设计 ,以
人工授粉的方法进行杂交获得 F1代。
2001年5月将亲本试材播于直径 3 ～ 5 cm 的穴盘
中 ,每份试材播60株 ,子叶平展时分苗于直径 20 cm的
营养钵内 ,采用常规的栽培管理措施 ,于三叶一心期进
行喷雾接种 ,以喷清水者为对照 ,随机同时抽取同一部
位的功能叶片 ,进行生理生化指标的测定。
　　2001年9月将亲本及F1同时播于同等大小的穴盘
第一作者简介:刘玉石(1973-),女 ,辽宁铁岭人 ,本科,讲师 ,从事
园艺专业教学工作。
收稿日期:2007-09-13
中 ,每份试材播 60株 ,子叶平展时分苗于直径 20 cm营
养钵内 ,采用常规的栽培管理措施 ,于三叶一心期进行
喷雾接种 ,以喷清水者为对照 ,采用同样的取样方法进
行生理生化指标的测定。
2　方法
供接种用的病菌 ,来自沈阳农业大学蔬菜基地及苏
家屯大棚内种植的黄瓜植株的病叶 ,经保湿后重新长出
新鲜孢子囊 ,加灭菌水配制成孢子囊悬浮液。接种量按
低倍镜(120倍)下每个视野平均 15 ～ 20个孢子囊计算。
接种前用载玻片萌芽法测定孢子囊的活力 ,孢子囊萌芽
率达到70%以上者方可接种。在黄瓜幼苗三叶期傍晚7
时左右进行喷雾接种 ,接种瓜苗在100%RH 、约 20℃下
保湿 16 h左右 ,然后放在白天22 ～ 25℃、夜间 18 ～ 20℃
环境下生长 ,以喷清水为对照 ,发病后逐株进行调查 ,记
录病情指数。将病情指数分级如下:0级:叶片无病斑;
1级:叶片有轻微病斑 ,病斑面积不超过叶面积的1/ 10;
Study on Elaeagnus angustifolia Shoot-tip Tissue Culture
WANG Lei1 , LI Dong-sheng2 , GU De-feng1
(1.College of Horticulture , Jilin Agricultural University , Changchun , Jilin 130118 , China;2.Dehui Agricultural Development of a Co rpora-
tion , Dehui , Jilin 130300 , China)
Abstract:The experiment took Elaeagnus angusti folias shoot-tip as explants , which w as based on the MS nutrient
media , added different concentration plant grow th regulator , took carried on the rapid reproduction in vitro.The experi-
mental results indicated that the best nutrient media in the first generation culture w as 1/2 MS+BA 3.0 mg/L+IAA
0.01 mg/L+sucrose 20 g/L +agar 10 g/ L.The bud subculture of multiplication the most suitable nutrient medium
was:MS+KT 1.0 mg/ L+ sucrose 20 g/ L+agar-agar 7.5 g/ L.When rate of take root was 100%, the nutrient medi-
um was:1/2 MS+NAA 0.1 mg/ L+sucrose 20 g/L+agar 7.5 g/ L.
Keywords:Elaeagnus angusti folia;Shoot-tip;Tissue culture;Rapid reproduction in vitro
201