全 文 ：UPLC法测定洋铁酸模中大黄素和大黄酚
蔡广知 ,王莎莎 ,孙全乐 ,沈晓君 ,郭云龙 ,贡济宇＊
(长春中医药大学 药学院 ,吉林 长春 130117)
　　摘　要:目的 建立洋铁酸模中大黄素和大黄酚的定量分析方法 。方法 采用超高效液相色谱法(UPLC
法)。结果 大黄素和大黄酚的质量浓度与峰面积间呈良好的线性关系 。平均回收率大黄素为 98.7%, RSD为
1.38%;大黄酚为 100.4%,RSD为 0.98%(n=6)。结论 本方法简便 、快速 ,重现性和精密度均较好 ,优于常规
液相色谱(HPLC),可用于洋铁酸模中大黄素和大黄酚的含量测定 。
　　关键词:UPLC法;洋铁酸模;大黄素;大黄酚
　　中图分类号:R285.2　　　　　　文献标志码:A　　　　　　文章编号:1007-4813(2010)01-0121-02
　作者简介:蔡广知(1977-),男 , 博士研究生。研究方向:中药鉴定和中药分析的教学 、科研研究。
＊通讯作者:贡济宇 ,女 , 教授 ,硕士研究生导师。 Tel:0431-86172207 , E-mail:gjy0431@126.com
　 　 洋 铁 酸 模 (Rumex patientia L.var.callosus
F.Schm.et Maxim)为蓼科酸模属植物巴天酸模[ 1]
(Rumex patientia L.)的变种 ,又名洋铁叶 ,产于我国北
方。对该植物的研究 ,报道很少。但其同属其它植物
有研究报道 ,如:南方所产羊蹄[ 2-3](Rumex japonieus)、
北方所 产 巴 天 酸 模 (R.patientia)、毛 脉 酸 模
(R.gmelini)和新疆产皱叶酸模(R.crispus)。酸模属
植物的根中含有大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚等蒽醌
类有效成分[ 4] ,具有抑菌 、止血及止咳的功效。以治
疗皮肤疾患和止血著称。本文采用超高效液相色谱
法测定了洋铁酸模中大黄素和大黄酚的含量 。
1　仪器与试药
Waters Acquity 超高效液相色谱 、紫外检测器和
Empower工作站软件。大黄素 、大黄酚对照品购于中
国药品生物制品检定所:批号分别为 110756-200110
和110796-200110。洋铁酸模药材样品采于吉林省内
各地 ,经长春中医药大学张亚芝教授鉴定。乙腈为色
谱纯 ,水为重蒸水 ,其它试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:ACQUITY UPLC TM BEH C18
(1.7μm ,2.1 mm×50mm),流动相:乙腈-0.1%磷酸(60∶
40);流速:0.25mL/min;柱温:30℃;检测波长:254 nm 。
2.2　对照品混合溶液的制备　精密称取大黄素对照
品适量 ,加甲醇溶解 ,制成 1.00 mg/mL的大黄素对照
品储备液;精密称取大黄酚对照品适量 ,加甲醇溶解 ,
制成 0.53 mg/mL 的大黄酚对照品储备液;分别精密
吸取 0.3 mL的大黄素和大黄酚对照品储备液 ,置同
一10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并定容至刻度 ,混匀 ,即
得每毫升含大黄素 30 μg 和大黄酚 10.75μg 的对照
品混合溶液 。
2.3　供试品溶液的制备[ 5-7] 　取洋铁酸模药材粉末
0.5 g ,精密称定 ,置 50 mL 容量瓶中 ,加乙醇 40 mL ,
超声提取30 min ,放冷 ,加乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,即得。
2.4　标准曲线的制备[ 8-10] 　分别精密吸取大黄素 、大
黄酚对照品储备液0.18 ,0.27 ,0.36 ,0.45 ,0.54mL ,置同
一 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀释并定容至刻度 ,摇匀 ,得
不同浓度的大黄素和大黄酚混合对照品溶液。依次吸
取上述混合对照品溶液 5μL ,注入超高效液相色谱仪 ,
按上述色谱条件测定 ,记录峰面积积分值和保留时间 ,
计算得大黄素回归方程:Y=6×106X-301 050 , r =
0.999 9 ,表明大黄素在 0.09 ～ 0.27μg 范围内与峰面积
积分值具有良好的线性关系;大黄酚回归方程:Y=3×
10
7
X-434 912 , r =0.999 9 , 表明大黄酚在 0.03 ～
0.09μg范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。
2.5　精密度试验　取同一供试品溶液 ,重复进样 5
次 ,测定大黄素 、大黄酚的峰面积值 ,计算 RSD 分别
为 0.12%和 0.11%,表明仪器的精密度良好。
2.6　重现性试验　取同一样品 5份 ,精密称定 ,依样
品溶液的制备方法制得供试品溶液 ,分别进样 5 μL ,
测得大黄素及大黄酚峰面积值 , 计算 RSD 分别为
0.19%和 0.15%,表明方法的重现性良好。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于 0 , 2 ,
4 ,8 , 12 , 24 h ,注入液相色谱仪 ,测定并记录大黄素 、
大黄酚的峰面积值 , 计算 RSD 分别为 0.18%和
0.16%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
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第26卷第1期
2010 年 2月
长 春 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine
Vo1.26
2 , 2010
DOI :10.13463/j.cnki.cczyy.2010.01.077
2.8　加样回收率试验 　取同一已知含量的样品 6
份 ,精密称定 ,精密加入大黄素和大黄酚对照品溶液 ,
依2.3项下方法分别制得供试品溶液 ,测定大黄素和
大黄酚的峰面积值 ,计算回收率 ,大黄素和大黄酚的
平均回收率分别为 98.7%和 100.4%,计算 RSD分别
为1.38%和0.98%,表明方法的准确度良好 。
2.9　样品测定　取各批次洋铁酸模样品 ,按 2.3项
下方法制得供试品溶液 ,进样量 5 μL ,测定并记录大
黄素 、大黄酚的峰面积积分值 ,计算大黄素及大黄酚
的含量 ,结果见表 1 ,图 1 、图 2。
图 1　大黄素 、大黄酚标准品液相色谱图
图 2　洋铁酸模的超高效液相色谱图
表 1　洋铁酸模中大黄素 、大黄酚的含量
序号 采集地点/吉林
生长
环境
测定
部位
大黄素
含量/ %
大黄酚
含量/ %
1 通　化 山上 根 0.24 0.15
2 丰满区 山上 根 0.13 0.11
3 五里河 河边 根 0.14 0.12
4 蛟　河 路边 根 0.09 0.12
5 龙潭区 河边 根 0.46 0.31
6 净月区 路边 根 0.07 0.07
7 磐　石 山上 根 0.07 0.07
8 左　家 路边 根 0.01 0.01
9 丰满区 路边 根 0.05 0.07
10 净月区 河边 根 0.19 0.15
11 左　家 山上 根 0.04 0.06
12 蛟　河 路边 茎 0.03 -
13 蛟　河 路边 叶 0.01 -
14 蛟　河 路边 花及果实 0.01 -
3　讨论
相对于常规高效液相色谱法(HPLC)而言 ,超高
效液相色谱法(UPLC)[ 11]有高分离度 、高速度 、高灵敏
度等优点。AQUITY UPLC 系统可以实现样品的高
效 、快速分析 。本文中样品采用 UPLC 法分析检测时
间仅为HPLC的 1/4 ,适当增加流速可以使检测时间
缩短为 HPLC 的 1/6。UPLC使用 1.7μm 粒径的色谱
柱填料 ,使色谱柱的柱效极大提高 ,色谱峰变窄 ,峰容
量增加 。此外 ,UPLC进样量为 5μL时 ,最高峰的吸收
值为 0.20 AU ,HPLC进样量 5 μL 时 ,与 UPLC中对应
峰的吸收值为 1.7 AU ,检测灵敏度提高了 8倍以上 ,
UPLC的优势明显 。UPLC 在样品分析测定中的优越
性 ,可以大大提高工作效率 。
实验结果表明 ,不同地区洋铁酸模中游离大黄素
和大黄酚的含量差异较大 ,这可能与采收时间 ,药材
的生长环境等因素不同有关;生长在山上及河边潮湿
地区的洋铁酸模药材 ,其游离大黄素和大黄酚的含量
要高于生长在路边干燥地区的药材 。洋铁酸模的茎 、
叶 、花及果实中只含有少量的大黄素 ,未检测出大黄
酚 。本文首次采用超高效液相色谱法测定了吉林省
不同产地洋铁酸模中游离型大黄素和大黄酚的含量 ,
为充分开发利用该种药用资源提供了依据 ,为 UPLC
在中药分析中的深入应用积累了条件。
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(收稿日期:2009-10-20)
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第26卷第1期
2010 年 2月
长 春 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine
Vo1.26
2 , 2010