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· 实验研究 ·
常压柱色谱与快速制备色谱分离纯化洋铁酸模中蕙醒成分
孙全乐 蔡广知 殷 丹 贡济宇
长春医学高等专科学校 , 吉林 长春
【摘要 」目的 比较常压柱 色谱 与快速制备 色谱分 离洋铁酸模 葱醒成 分纯化程度 。 方法 常压柱 色谱柱采 用硅胶 一 目 , 流速
快速制备 色谱法柱采用 硅胶柱 柱规格 , 流速 。 两 方法均以石 油 醚 一 乙酸乙醋 为洗脱剂 , 检测波长
。 结果 洋铁酸模 乙 酸乙醋苹取物经 两种 色谱法分离后得到葱醒类成 分之大黄素 , 经超高效液相 分析 , 纯度差异不大 。 常压柱 色
谱 中 , 分离过程溶剂经洗脱再回 收利用后 消耗量大 , 耗时较长 。 与快速制备 色谱相 比 , 该法快速 、 准确 、 灵敏度高 。 结论 快速制备色
谱法可准确 、 快速 、 高效分 离洋铁酸模葱醒成 分 , 适合在工作量较 大的分 离纯化项 目中应 用 但快速制备分离色谱通常难 以胜任对 药
物 复杂体系如较多类物质的分离 。
【关键词 」洋铁酸模 快速液相 色谱法 大黄素
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
洋铁酸模作为一种古老的中草药 , 在民间应用已有上千年的历
史 , 多采该药治疗皮肤疾患和止血 `一 , 临床应用比较广泛 , 有着确
切疗效。 洋铁酸模在我省广泛分布 , 资源丰富。 开发潜力巨大 , 应用
前景广阔 。 洋铁酸模乙酸乙醋萃取物经常压柱色谱与快速制备色谱两
种色谱法分离后得到蕙醒类成分之大黄酚 , 经超高效液相分析 , 纯度
差异不大 。 常压柱色谱中 , 分离过程溶剂经洗脱再回收利用后消耗量
大 , 耗时较长 。 与快速制备色谱相 比 , 该法快速 、 准确 、 灵敏度高 。
结论 快速制备色谱法可准确 、 快速 、 高效分离洋铁酸模蕙醒成分 ,
适合在工作量较大的分离纯化项 目中应用 。
仪器与试药
自动快速制备色谱 一 , 常压柱 手动装柱硅
胶柱 , 超高效液相色谱仪 。
大黄素对照品 批号 巧 一 , 含量 , 洋铁酸模根
部粉末 采集于吉林 , 石油醚 , 乙酸乙醋 , 乙醇均为分析纯 。
方法与结果
供试品与对照品溶液的制备
供试品溶液
洋铁酸模药材粗粉 , 乙酸乙醋回流提取两次 , 每次 , 合并提
取液 , 过滤 , 减压回收乙酸乙醋 提取物选用 型大孔树脂柱层析
达到初分离的目的 , 洗脱剂以 乙醇、 乙醇 、 乙醇进行梯度
洗脱 。 所得 乙醇洗脱液 , 作为两种柱色谱待分离的供试品液 。
对照品溶液
精密称取大黄素标准品适量 , 加 甲醇溶解 , 制成 的大
黄素标准品储备液 , 备用 。
实验方法
将 乙醇洗脱液供试品液以干法上样 , 以石油醚一乙酸乙醋不同
比例进行梯度洗脱。 常压柱色谱柱与快速制备色谱法柱各参数比较 ,
见表 。
表 常压 色谱法与快速制备 色谱法比较
结果
色谱行为
常压柱色谱洗下的洗脱液结合薄层色谱进行检识 , 将同 值的斑
点合并 快速制备色谱法采用软件分析 , 直接将在 下有吸收的
洗脱液按峰值合并 。 自动快速色谱分离制备色谱中洗脱液按 一 号
试管合并 , 结果见图 。
扮` 矛 ` 一 —一〕 二墓
快速制备色谱法
所用硅胶粒度
所用硅胶体积
柱体积
流速
收集体积
收集瓶规格
所耗溶剂量
常压色谱法
一 目
巧 止
止 瓶
毗锥形瓶箱 瓶 止
一 以
〕
〕 管
〕 试管
瓶 止
图 自动快速 色谱分离制备色谱
方法学验证
经两种色谱方法处理所得洗脱液的合并液中 , 均得到与大黄素标
准品 值一致的斑点 , 将此部分洗脱液回收溶剂后 , 利用超高效液
相色谱仪分析分析其纯度 。 色谱柱
夕 口 , 火 , 流动相 乙睛 一 磷酸
流速 止 柱温 ℃ 检测波长 。
线性范围和最低检测限 分别吸取对照品溶液 、 、 、 、 、
、 口 注人超高效液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 记录峰面积
积分值和保留时间 , 计算得大黄素回归方程 一 “ 一 ,
。 , 表明大黄素在 司 口 范围内与峰面积积分值具有良好
的线性关系 。
精密度 取对照 品溶液 口 注人超高效相色谱仪 , 重复进样
次 , 为
重复性和溶液稳定性 取常压柱色谱所得大黄素供试品注人高效相
色谱仪 , 重复进样 次 , 平均含量为 , 为 。 另取常压
和快速制备液相色谱分别在室温放置 琶测定。 后主峰峰面积减
失百分率 , 结果表明供试品溶液在 内较稳定。
样品测定
分别取常压柱色谱和快速制备色谱所得大黄素供试品 , 用超高效
液相法测定 , 外标法计算含量 。 结果进行配对脸验 , 两种色谱所得大
黄素的含量结果相近 。
DOI :10.15912/j.cnki.gocm.2013.33.451
3 讨 论
在常压柱色谱应用中 , 样品通常与硅胶的固体载体一起置于柱顶
端。 然后在柱顶端灌置溶剂 混合溶剂 , 依靠重力进行溶剂洗脱 。
但此方法本身固有的缺点不可忽视 低柱效 收集组分耗时 对复杂
样品效果不好或需反复操作 柱间重现性不好 只限于等度或分阶式
洗脱 没有在线监测 , 只能手动结合 薄层检识 。
而在快速色谱中 , 柱子是用更细的填料如硅胶填充 , 通常柱系统
在中压下运行的分离效率更高 。 计量泵用于传输溶剂 , 取代正压空气
驱动 系统装置在线检测器及专用的组分收集器 。 我们只需借助功能
键 , 纯化就可开始 , 组分将会得到只能化切分 , 分离过程十分省时。
本实验采用 开发出 砚自动快速色谱分离制备系列
产品 一 , 其具有克自动识别所装色谱柱尺寸并自动选择最佳柱效
的运行程序 双泵全梯度能力 , 梯度控制更加精确灵活 , 泵可与任何
实验室用溶剂容器相连 实时的方法控制设定参数一包括形成曲线梯度
用高通量 。 峰切割软件得到纯化化合物 , 当化合物被检测到未完时自
动运行所有峰的扩展收集等特点 。
实验研究 ·
传统的柱色谱基本上是使用长柱和常压驱动的色谱过程 。 分离效
果对洗脱速度敏感 , 相对快的洗脱速度对于分离效果是有利的。 随着
药物研发和有机化学研究的发展 , 对通量的要求加大 , 而手动操作的
柱色谱不能满足 日益增加的纯化要求 , 自动快速色谱系统便成为解决
纯化瓶颈问题的流行技术 。 但快速制备分离色谱通常难以胜任对药物
复杂体系如较多类物质的分离 。
参考文献
【 国家中医药管理局 《中华本草 》 编委会中华本草 上海上海
科学技术出版社 , 一
常新全 丽霞中药活性成分分析手册 北京学苑出版社 ,
一
祁红大黄素的抗炎作用 中草药, ,
」 周雄 , 宣利江 , 张书伟 中药羊蹄 的化学成分研究 【 中药
材, , 一
」 , ,
〕 」 , ,
双黄连口服液抗炎解热作用的实验研究
郭 娟
长春中医药大学附属医院 , 吉林 长春
【摘要 」目的 探讨双黄连 口服液的抗炎解热作用 。 方法 采用角又菜胶所致的 大 鼠足拓肿胀模型研 究双黄连 口服液的抗炎作用 , 采用细菌
内毒素所致的 大 鼠发热模型研 究双黄连口服液的解热作用 。 结果 与空 白对照 组相 比 , 双黄连 口服液能有效抑制 角又菜胶所致的 大 鼠足拓
肿胀性炎性反应 , 并能显著降低细菌内毒素所致的 大 鼠体温升高。 结论 双黄连口服液具有较强的抗炎 、 解热作用 , 而且其效果与非街体
类抗炎药阿司匹林的作用相 当 。
【关键词」双黄连口服液 抗炎 解热
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
双黄连口服液主要成分是由黄琴 、 连翘 、 金银花 、 甘蔗和香精等
组成。 其主要功效是清热解毒 , 疏风解表 。 临床上主要用于细菌 、 病
毒引起的感冒 、 咳嗽 、 咽痛 、 发热以及扁桃体炎 、 肺炎 、 气管炎等症
的治疗 , 效果明显 。 本文通过对双黄连口服液的抗炎解热作用进行实
验研究 , 旨在为临床治疗应用提供理论依据 。
材 料
药物与试剂
双黄连 口服液 哈药集团三精制药股份有 限公司 , 国药准字
复方阿司匹林片 角叉菜胶 美国 公司 细菌
内毒素 湛江博康海洋生物有限公司 。
实验动物
雄性 大鼠 , 体质量 巧 一 。 均由实验动物中心提供。
仪器
一 型足趾容积测量仪 成都泰盟 科技有 限公司
型电子数字式体温计 深圳市福达康实业有限公司 。
方 法
双黄连口服液对角叉菜胶所致的大鼠足拓肿胀模型的影响
取 只大鼠 , 随机分为 组 , 每组 只 。 即空白对照组 等剂量
氯化钠溶液 、 复方阿司匹林对照组 阿司匹林 、 双
黄连口服液大剂量组 止瓜 、 小剂量组 止瓜 , 分别连续
灌胃给药 , 每天 次 , 空白对照组给予等剂量 氯化钠溶液 。 末
次给药半小时前 , 用足拓容积测量仪测量各组大鼠左后足容积 , 并做
好记录 。 末次给药半小时后 , 于每只大鼠左后足拓部皮下注射浓度为
的角叉菜胶 止 , 并于致炎后 、 、 、 、 进行测量和
记录各鼠左后足容积 。 计算足拓肿胀率 , 足拓肿胀率 【 致炎
后足容积一致炎前足容积 致炎前足容积 」火 。
双黄连口服液对内毒素所致的大鼠发热模型的影响
将 只大鼠随机分为 组 , 每组 只 。 即双黄连口服液大剂量组
毗瓜 、 小剂量组 毗瓜 、 复方阿司匹林对照组 阿司匹
林 ` 、 空白对照组 等剂量 氯化钠溶液 , 均每天灌胃
给药 次 , 连续给药 , 空白对照组给予等剂量 氯化钠溶液 。 末
次给药半小时前 , 用数字温度计插人大鼠肛门内测定其体温 , 连续测
量 次 , 取平均值作为基础体温 。 末次给药半小时后 , 于大鼠背部皮
下注射浓度为 止瓜 的细菌内毒素溶液 , 并于致热后 、 、 、
、 各测量 次肛温 , 观察各组大鼠体温变化情况 。
结 果
双黄连 口服液对角叉菜胶所致的大鼠足拓肿胀模型的影响与空白
对照组相比 , 双黄连口服液大 、 小剂量组均可有效抑制 角叉菜胶导
致的大鼠足拓肿胀性炎性反应 , 并且双黄连口服液大剂量组抗炎作用
明显优于小剂量组 。 双黄连口服液抗炎效果与复方阿司匹林对照组相
比没有明显差异。
双黄连 口服液对内毒素所致的大鼠发热模型的影响与空白对照组
相比 , 双黄连口服液大 、 小剂量组均可显著抑制细菌内毒素导致的大
鼠体温升高 , 并且双黄连口服液大剂量组解热作用优于小剂量组 。 双
黄连口服液解热效果与复方阿司匹林对照组相比没有显著差异。
讨 论