全 文 ：洋铁酸模提取物体外抑真菌作用活性部位筛选研究
孙全乐 ,蔡广知 ,殷　丹 ,沈晓君 ,贡济宇＊
(长春中医药大学 ,吉林 长春 130117)
　　摘　要:目的 研究洋铁酸模提取物体外抗真菌活性 ,筛选其抗真菌作用活性部位。方法 本实验采用滤纸
片法 、连续稀释法 ,测定洋铁酸模提取物对36株临床常见皮肤癣菌的最小抑菌浓度(MIC)值 。结果 洋铁酸模
乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的生长有较明显的抑制作用 ,最小抑菌浓度为 30 mg/mL;对白色念珠菌的抑制作
用很弱 ,最小抑菌浓度为 120 mg/mL。抑菌成分在 40 ,60℃下(处理 2 h)较稳定 ,在 80℃以上热稳定性较差。结
论 洋铁酸模提取物可抑制真菌生长 ,筛选出的活性部位为乙酸乙酯层。
　　关键词:洋铁酸模;乙酸乙酯提取物;抑菌作用;最小抑菌浓度
　　中图分类号:R285.2　　　　　文献标志码:A　　　　　文章编号:1007-4813(2010)04-0493-02
　作者简介:孙全乐(1983-),女 , 在读硕士研究生。研究方向:中药学 、中药活性物质分析与结构。
＊通信作者:贡济宇 ,女 , 教授 ,硕士研究生导师 , Tel:0431-86172207 , E-mail:gjy0431@126.com。
　　中药洋铁酸模作为一种古老的中草药 ,在民间
应用已有上千年的历史 ,临床应用该药治疗皮肤疾患
和止血 ,疗效确切。洋铁酸模在我省广泛分布 ,资源
丰富 。开发潜力巨大 ,应用前景广阔 。因此 ,本试验
对洋铁酸模的抑菌活性进行研究 ,以白色念珠菌 、红
毛癣菌为例 ,旨在为其药用提供理论依据与技术支
持 ,以期充分开发利用我省的该种药用资源。
1　材料与仪器
1.1　材料 　实验用洋铁酸模药材均于 2007年采于
吉林省 ,经长春中医药大学药用植物教研室张雅芝教
授鉴定为洋铁酸模(Rumex patlent L.var.eallosus
F.Sehm.etMaxim)。两种真菌即红毛癣菌(Trichophy-
ton rubrum)20 株 、白色念珠菌(Candida allbicans)16
株 ,均由吉林大学基础医学院病原微生物教研室真菌
菌种保藏中心提供。实验前均经活化接种。
1.2　仪器与设备　C52 型医用超净工作台 、DHG-
9132A型电热恒温培养箱 、DHS 型隔水式电热恒温培
养箱;YXQ.SG41.80型高压蒸汽灭菌锅 、HH.SI1-2型
电热恒温水浴锅 、R51型旋转蒸发器。
2　实验方法
2.1　供试菌的准备　将白色念珠菌 、红毛癣菌分别
接入斜面培养基中 ,28℃培养 72 h 。再移种至沙氏培
养基中 ,在 28℃培养 24 h ,取出备用 。
2.2　平板的制备　配制好培养基 ,沙氏培养基(蛋白
胨10 g ,葡萄糖 40 g ,琼脂 15 g ,加入无菌水 1 000 mL ,
搅拌加热煮沸至完全溶解)经高压蒸汽消毒灭菌后 ,
冷却至 50℃左右 ,无菌操作下倒入干热灭菌好的培
养皿内 ,每皿约 15 ～ 20 mL ,即培养皿内培养基的厚
度约 2 ～ 2.5 mm ,准备够充足数量 。
2.3　样品溶液的制备　洋铁酸模药材分别以石油
醚 、乙酸乙酯 、正丁醇提取 、水提取 ,精密称取 4种提
取物分别将各部位以 DMF(N ,N 二甲基甲酰胺)为溶
剂均配制成 10 g 生药/mL ,分别于 115℃,高压灭菌
30 min备用。
2.4　供试菌菌悬液的制备　将测试菌于 25℃环境
下活化 ,用接种环挑取少许菌加入生理盐水充分振
荡 ,制备菌悬液 ,采用麦氏比浊法调菌悬液浓度达
0.5 Mcfarland 单位 ,即含 1.5×107 ～ 108cfu/mL , 稀释
10倍 ,备用。
2.5　抑菌滤纸片的制备　使用内径为 6 mm 的打孔
器在定性滤纸上均匀打孔 ,将滤纸片装入 50 mL 的三
角锥形瓶中 ,塞上棉塞 ,121℃高压灭菌20 min后冷却
备用。在医用型超净工作台中 ,分别将相应数量的无
菌滤纸片浸泡在装有供试液相应锥形瓶中 ,浸泡 3 h
后作为抑菌滤纸片备用。
2.6　抑菌试验　在无菌条件下用微量移液器吸取菌
悬液 100 μL ,滴在平板培养基上 ,用涂布器涂匀 。分
别将 4种提取物抑菌滤纸片以三点法放在涂有菌液
的培养基上 ,重复做 3次 ,做好标记;另外同时将 4种
提取物放于同一培养皿中 ,重复做 3次 ,做好标记 ,将
抑菌平皿倒置于恒温培养箱中 。另设对照组 ,对照组
分别加入 DMF , 28℃培养 72 h 后 ,取出测定抑菌圈直
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第26卷第4期
2010 年 8月
长 春 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine
Vo1.26
8 , 2010
DOI :10.13463/j.cnki.cczyy.2010.04.071
径大小 ,根据抑菌圈大小计算出抑菌率[ 1-2] 。
2.7　统计学方法　利用 SPSS 13.0软件进行统计学
处理[ 2] ,各组总体均数用单因素方差分析比较(ANO-
VA),分别比较洋铁酸模的 4种提取物于同一皿中的
抑菌效果 ,采用 t 检验 。
2.8　最小抑菌浓度的确定　采用连续稀释法[ 3-4] 。
在灭菌的培养管中加入 2 mL经灭菌的液体沙氏培养
基 ,用微量移液器吸取洋铁酸模提取物原液 ,使洋铁
酸模提 取物浓度倍 比稀释为 120 , 60 , 30 , 15 ,
7.5 mg/mL系列浓度 ,各加入 20μL 菌悬液 ,于 28℃培
养72 h后 ,以未接种的培养液加空白溶剂为对照 ,测
定乙酸乙酯提取物对 36株临床常见皮肤癣菌的最小
抑菌浓度(MIC)值。
2.9　温度对提取物抑菌活性的影响　洋铁酸模乙酸
乙酯提取物分别经 40 ,60 ,80℃处理 2 h后 ,检测其抑
菌活性。
3　结果与分析
3.1　洋铁酸模提取物对真菌的抑菌效果　见表 1 ,
表2 。
表 1　洋铁酸模提取物对真菌红毛癣菌抑菌效果 mm
测试菌种 4个部位 对照组
石 油醚部位 6.34±0.12 6.0
乙酸乙酯部位 16.40±0.08 6.0
正 丁醇部位 10.32±0.14 6.0
水 部 位 7.02±0.06 6.0
表 2　洋铁酸模提取物对真菌白色念珠菌抑菌效果　　mm
测试菌种 4个部位 对照组
石 油醚部位 6.17±0.04 6.0
乙酸乙酯部位 9.68±0.16 6.0
正 丁醇部位 8.91±0.18 6.0
水 　部 　位 6.82±0.18 6.0
　　注:表中数据为抑菌圈直径大小 , 6.0表示滤纸片外无透明抑菌圈
3.2　洋铁酸模提取物对真菌的抑菌率　见表 3。
表 3　洋铁酸模提取物对真菌的抑菌率
测试菌种 乙酸乙酯部位 抑菌率/ % 正丁醇部位 抑菌率/ %
红 毛 癣菌 16.02±0.06 63 7.86±0.14 63
白色念珠菌 9.82± 0.18 39 7.28± 0.10 18
3.3　温度对乙醇乙酯提取物抑菌活性的影响　见表
4。
表 4　温度对乙酸乙酯提取物抑菌活性的影响
测试菌种 样品处理温度/ ℃ 抑菌圈直径/mm
40 10.76±0.12
红 毛 癣菌 60 9.40±0.24
80 8.52±0.16
40 8.36±0.04
白色念珠菌 60 7.04±0.02
80 6.0
3.4　最小抑菌浓度　见表 5。
表 5　乙酸乙酯提取物对真菌的最小抑菌浓度
测试菌种 样品浓度/(mg/mL)
7.5 15 30 60 120
红 毛癣 菌 ++ ++ - - -
白色念珠菌 +++ ++ ++ + -
　　注:“ +～ +++”表示真菌生长由少到多;“-”表示肉眼看不见真
菌生长。
4　讨论
4.1　洋铁酸模的 4种粗提液与对照组比较 ,洋铁酸
模石油醚提取物 、洋铁酸模乙酸乙酯提取物 、洋铁酸
模正丁醇提取物 、洋铁酸模水提物的抑菌效果均强于
对照组 。
4.2　洋铁酸模的 4个部位比较 ,其中乙酸乙酯部位 、
对红毛癣菌的生长均有一定的抑制作用 ,而正丁醇部
位抑菌作用不理想 ,其他两个部位无明显作用 。
4.3　洋铁酸模 2个部位对红毛癣菌的生长有较明显
的抑制作用 ,而对白色念珠菌的抑制作用很弱 。
4.4　洋铁酸模乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的最小抑
菌浓度为 30 mg/mL;而对白色念珠菌的最小抑菌浓
度为 120 mg/mL。
4.5　该提取物的抑菌成分在 40 ,60℃下(处理 2 h)较
稳定 ,但在 80℃以上温度时 ,稳定性较差。
本实验研究结果验证了洋铁酸模可抑制真菌生
长 ,同时筛选出的活性部位为乙酸乙酯层 。笔者认为
乙酸乙酯提取物的主要成分尚待进一步分离 、鉴定 。
如能进一步分离具体的抑菌成分 ,有望开发洋铁酸模
相关抑菌产品[ 5-6] 。
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CLSI , 2002:119. (收稿日期:2010-04-06)
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第26卷第4期
2010 年 8月
长 春 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine
Vo1.26
8 , 2010