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土圞儿石油醚萃取物的GC-MS分析



全 文 :壁逼尿肌 M受体过度兴奋的后果[1]。膀胱过度活动
症以尿急为特点,伴或不伴急性尿失禁、日夜排尿次
数增多。膀胱过度活动症多由逼尿肌活动过度所致,
以膀胱充盈期逼尿肌不自主收缩为特征,常见于
BPH引起的膀胱出口梗阻。BPH 伴有 LUTS 即膀胱
储尿期和排尿期症状,储尿期症状对生活质量影响更
大,特别是夜尿次数增多为患者最突出的主诉,严重
影响着该类病人,特别是老年患者的生活质量[2,3]。
经研究证明尿道壁张力和 BPH 患者的尿道压力
是由 α 受体介导机制调控的[4]。膀胱体、膀胱颈、三
角区及近端尿道有丰富的 α1 受体分布,α1 受体有
α1A、α1B、α1D 3 个亚型。膀胱逼尿肌中 α1D占 66%,
α1A占 34%。坦索罗辛能选择性地阻断 α1A、α1D受
体[5]。因此,α受体阻滞剂,能有效地降低尿道和前
列腺平滑肌张力,增加尿流率,从而缓解排尿期症状。
储尿期症状由不能控制的逼尿肌收缩引起。人类膀
胱的收缩功能主要由 M 受体介导,M 受体拮抗剂治
疗膀胱过度活动症已被广泛应用。索利那新是选择
性毒覃碱 M3 受体拮抗剂,能竞争性抑制乙酰胆碱并
与之结合,从而抑制膀胱不自主收缩,达到治疗目
的[6]。新近证明,该药不会增加膀胱过度活动症男
性患者尿潴留的发生率[7]。本组 51 例前列腺增生症
致顽固性 LUTS患者经坦索罗辛单一治疗后 IPSS 和
QOL评分较治疗前降低、Qmax 值增高,但无统计学
意义。对于 BPH 的 LUTS 较轻者,单用高选择性 α
受体阻滞剂治疗有较好效果。因坦索罗辛能改善因
膀胱顺应性下降所致的储尿困难、尿频、尿急等相关
症状。本配伍组 53 前列腺增生症致顽固性 LUTS 症
状患者,经坦索罗辛同索利那新配伍,用药 4 周 IPSS、
QOL评分较治疗前降低、Qmax 增高,差异有显著意
义。两组病例在治疗过程中未出现严重不良反应,而
且两药物不良反应无显著性差异。坦索罗辛同索利
那新配伍较坦索罗辛单药更能全面地缓解具有 LUTS
患者的症状,尤其适合在单独使用坦索罗辛疗效欠佳
的病例从而能有效地提高此类病人的生活质量。
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(收稿:2012 - 04 - 06)
(修回:2012 - 04 - 20)
基金项目:浙江省科技厅基金资助项目(2010F10033)
作者单位:310007 杭州,浙江省中医药研究院
通讯作者:程林,电子信箱:lemon2193@ 163. com
土圞儿石油醚萃取物的 GC -MS分析
胡轶娟 程 林 浦锦宝 梁卫青 郑军献 魏克民
摘 要 目的 采用 GC - MS 定性分析土圞儿石油醚萃取物中的化学成分组成和相对含量。方法 石油醚萃取物样品经
BSTFA∶ TMCS(99∶ 1)衍生化后,采用 GC - MS 法测定,通过 NIST 数据谱库检索,结合人工解析,鉴定多种化学成分。在此基础
上,测定了各组分的相对含量。结果 从石油醚萃取物中检出 16 个色谱峰,鉴定出 11 个化合物,占石油醚萃取物总量的
68. 75%。结论 土圞儿石油醚萃取物中主要含脂肪酸类成分,共有 6 个(54. 54%) ,其他有氨基酸 1 个(9. 09%) ,α - D -葡萄
糖苷 1 个(9. 09%) ,肌醇的 3 种同分异构体(27. 27%)。
关键词 土圞儿 石油醚萃取物 GC - MS
·97·
医学研究杂志 2012 年 12 月 第 41 卷 第 12 期 ·论 著·
Analysis of the Petroleum Ether Extract From Apios Fortunei Maxim. by GC - MS. Hu Yijuan,Cheng Lin,Pu Jinbao,Liang Weiqing,
Zheng Junxian,Wei Kemin. Zhejiang Traditional Chinese Medicine Academy,Zhejiang 310007,China
Abstract Objective To analyze the chemical compositions and their contents in the petroleum ether extract from Apios fortunei
Maxim. Methods The chemical compositions from Apios fortunei Maxim. were analyzed by gas chromatography /mass spectrometry after
trimethylchlorosilane derivatization. Results The chemical compositions were identified by comparison of the authentic sample and NIST
database. 16 chromatographic peaks were detected and among them 11 compounds were identified,which were 68. 75% of the petroleum
ether extract. Conclusion The main constituents of the petroleum ether extract were fatty acids,which were 54. 54% of the total composi-
tions. Among identified compounds,tryptophan,α - D - glucoside and three isomers of inositol were isolated.
Key words Apios fortunei maxim;Petroleum ether extract;GC - MS
土圞儿为豆科植物土圞儿 Apios fortunei Maxim.
的干燥块根,浙江省民间用药。其性凉,味甘、微苦,
性平,无毒,具有清热解毒、活血止痛、祛风化痰、消肿
等功效。土圞儿中的化学成分有生物碱、淀粉等,其
中生物碱是一类重要的生理活性物质。《贵州民间
草药》:“散积,理气,解毒,补脾”。《全国中草药汇
编》:“清热解毒,化痰止咳”。《贵州药植调查》:“治
蛇咬伤,并治疗癀,去毒”[1]。可用于感冒咳嗽,百日
咳,咽喉肿痛,疝气,痈肿,瘰疬。由于其为地方药材,
到目前为止,对它进行的研究并不多。在已见的报道
中,主要对土圞儿的原植物形态、药材性状、显微特征
等进行了初步研究。本研究采用系统溶剂萃取法,
从土圞儿植物块根中得到石油醚萃取物,并用气相色
谱 -质谱联用仪对土圞儿块根石油醚萃取物化学组
分进行定性研究。分析鉴定了 11 个化学成分,为其
药效评价和应用提供科学依据。
材料与方法
1.仪器和试药:美国 Varian 公司 450GC - 240MS 气相色
谱 - 质谱联用仪,Varian CP Sil 24CB 气相色谱柱(30m ×
0. 25mm,0. 25μm) ,土圞儿采自浙江磐安,经鉴定为豆科植物
土圞儿 Apios fortunei Maxim的干燥块根。石油醚(60 ~ 90℃)
为国产分析纯试剂,BSTFA∶ TMCS(99∶ 1)购于美国 REGIS公
司(批号:CFCQ - 270121)。
2.方法[2 ~ 11]: (1)石油醚萃取物的制备:取土圞儿药材
6kg,粉碎成粗粉,加 8 倍量 95%乙醇加热回流提取 3 次,每次
2h,提取液减压回收乙醇至无醇味,加热水至 2L成混悬液,用
石油醚(60 ~ 90℃)萃取 3 次,每次 2L,回收石油醚,得石油醚
萃取物 86. 86g。收率为 1. 45%。(2)供试品溶液的制备:取
石油醚萃取物适量,加环己烷溶解成 6mg /ml 溶液,取 5ml 置
具塞试管中,氮吹至干,加入 BSTFA ∶ TMCS(99 ∶ 1)试剂
0. 5ml,加盖密封后,振摇 30s,于 80℃烘箱反应 1h,取出,放
冷,即得。(3)GC - MS 条件:毛细管色谱柱(30m × 0. 25mm,
0. 25μm)。汽化温度 250℃;程序升温,初始温度 50℃,保持
2min,以 4℃ /min的速度升温至 200℃,保持 10min,再以 5℃ /
min的速度升温至 250℃,保持 20min;载气为高纯氦气,流量
1ml /min;进样量 1μl;分流比 1∶ 20。EI 电离源,70eV;离子源
温度 220℃;扫描质量范围(m/z)50 ~ 1000。(4)石油醚萃取
物的化学成分分析:对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得
到质谱图,通过工作站 N IST标准质谱图库进行检索,并结合
有关文献进行人工检索和解析,确认各化合物。通过工作站
数据处理系统,按峰面积归一化法计算各化合物在挥发油中
的相对百分含量。
结 果
本实验对未衍生化前的石油醚萃取物进行 GC
分析,结果检测到的色谱峰较少,且强度低,表明石油
醚萃取物中的各化学成分主要为非挥发性成分,运用
BSTFA∶ TMCS(99∶ 1)衍生化后,挥发性增强,检测到
较多的色谱峰,且强度增大,见图 1。
图 1 衍生化前(上图)后(下图)土圞儿
石油醚萃取物的 GC色谱图
比较了 Varian CP Sil 5CB (30m × 0. 25mm,
0. 25μm)、8CB(30m ×0. 25mm,0. 25μm)、24CB(30m ×
0. 25mm,0. 25μm)和 HP - INnowax Polyethylene Glycol
色谱柱(30m × 0. 32mm,0. 25μm)4 种色谱柱,结果
Varian CP Sil 24CB 的分离效果最佳。对气相色谱程
序升温条件进行了考察,最终确定上述程序升温条件
下分离度较好,峰数较多。通过 GC - MS 联用技术分
析了土圞儿石油醚萃取物中的成分,通过计算机质谱
·08·
·论 著· J Med Res,Dec 2012,Vol. 41 No. 12
库检索,共鉴定出 11 个化合物,采用峰面积归一定量
法,求得各化合物的相对百分含量。土圞儿石油醚萃
取物中主要成分及相对含量见表 1,总离子图见图 2。
表 1 土圞儿石油醚提取物中的化学成分及相对含量
编号
保留时间
(min)
化合物名称 分子式
相对分
子质量
相对含量
(%)
1 10. 029 丙酸 C3H6O3 90 0. 19
2 10. 994 色氨酸 C3H7NO2 89 0. 29
3 20. 257 2 -吡啶甲酸 C6H11NO2 129 0. 27
4 32. 857 scyllo -肌醇 C6H12O6 180 1. 26
5 33. 683 Myo -肌醇 C6H12O6 180 3. 57
6 36. 188 allo -肌醇 C6H12O6 180 1. 84
7 39. 06 十六酸(棕榈酸) C16H32O2 256 9. 72
8 45. 362 9,12 -十八碳二烯酸 C18H32O2 280 14. 81
9 46. 452 α -亚麻酸 C18H30O2 278 4. 63
10 54. 35 α - D -葡萄糖苷 C12H22O11 342 57. 18
11 56. 895
2 -羟基 -4 -羰基 -
十九酸
C19H36O4 328 2. 83
图 2 土圞儿石油醚萃取物的总离子图
讨 论
从石油醚萃取物中检出 16 个色谱峰,鉴定出 11
个化合物,占石油醚萃取物总量的 68. 75%。其中,
有机酸类成分 6 个(54. 54%) ,肌醇的 3 种同分异构
体(27. 27%) ,另外还有 α - D -葡萄糖苷(9. 09%)、
色氨酸(0. 29%)。在鉴定的成分中,α - D -葡萄糖
苷的相对含量最高,占 57. 18%。可能是土圞儿中淀
粉和多糖类成分含量较高,萃取过程中有部分淀粉和
多糖带入萃取物中。在鉴定出的 11 个成分中,6 个
为有机酸类成分,其中 2 个为不饱和脂肪酸,9,12 -
十八碳二烯酸的相对含量较高,为 14. 81%。从石油
醚萃取物中检测出肌醇的 3 种同分异构体,广泛分布
在动物和植物体内。肌醇(MYO)是环已六醇中 9 种
立体异构体的一种,属于维生素 B 族。MYO 在细胞
形态发生和生成、脂质合成、细胞膜的结构以及细胞
生长方面起着极其重要的作用[12]。从石油醚萃取物
中检出 16 个色谱峰,鉴定出 11 个化合物,另外 5 个
色谱峰在 10 ~ 40min 之间,在 N IST标准质谱图库未
能找到相应的化合物,有待于进一步的研究。通过与
空白图谱对照,表明在 50 ~ 70min之间未鉴别的色谱
峰为 BSTFA∶ TMCS(99∶ 1)衍生剂的络合物。本实验
对土圞儿石油醚萃取物进行了体外抗肿瘤实验,发现
浓度为 50μg /ml、100μg /ml 时对 HepG2 细胞株的抑
制率分别为 31. 8%、52. 4%,有一定的抑制作用。其
他的生物活性还有待于进一步研究。
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