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第 1 8 卷 第 1 期
2016 年 1 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 18 No. 1
Jan .，2016
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巴天酸模（Polygonum Rumex Patientia L.）系蓼
科酸模属植物，又名洋铁酸模、牛西西、土大黄等，在
我国东北、华北及西北各省区均有分布。其根肥厚，
显黄色，是常用的中草药，具凉血止血、清热解毒、杀
HPLC-MS/MS 法测定巴天酸模中 7 个蒽醌类成分含量
王鹏 1，2，王晓明 1，潘桂湘 1，冯红 1
（1.天津中医药大学，天津市现代中药国家重点实验室，天津 300193；2.天津国际生物医药联合研究院，天津 300457）
摘 要：目的：采用HPLC-MS/MS法测定巴天酸模中7个蒽醌类成分的含量。方法：采用SB-C18 色谱
柱（4.6 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）。梯度洗脱程序为：0~8.5 min，95%~95% A；
8.5~8.51 min，95%~40% A；8.51~12 min，40%~40% A。流动相流速为0.4 mL/min，柱温为20 ℃，进样量为10 μL。
结果：大黄酸、芦荟大黄素在2.5~50 ng/mL，大黄素、大黄素甲醚在10~250 ng/mL，大黄酚在25~1000 ng/mL，大黄
素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷在10~500 ng/mL范围内，进样量与峰面积具有良好线性关系（r2
均>0.98）。同时，其平均加样回收率在90.32%~106.75%（n=6）。结论：该方法简便、准确、灵敏，可用于巴天酸模中
蒽醌类成分的含量测定。
关键词：液质联用；巴天酸模；蒽醌；含量
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 01- 0059- 03
收稿日期：2015-07-15
基金项目：国家自然基金项目（81173523、81303182）；国家科技支撑计划项目（2011BAI07B08）
作者简介：王鹏（1988-），男，河北石家庄人，硕士，研究方向：药物分析。
通讯作者：潘桂湘（1976-），男，福建泉州人，副研究员，博士，研究方向：药物分析。
Determination of Seven Anthraquinones Constituents in
Polygonum Rumex Patientia L. by HPLC-MS/MS
WANG Peng1，2，WANG Xiaoming1，PAN Guixiang1，FENG Hong1
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin State Key
Laboratory of Modern Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin
International Joint Academy of Biomedicine，Tianjin 300457，China）
Abstract：Objective：To establish a HPLC-MS/MS method for determining the content of seven
anthraquinones constituents in Polygonum Rumex Patientia L. Methods：A SB-C18 column（4.6
mm×100 mm，1.8 μm）was used with a mobile phase of acetonitrile（A）-0.1% acetic acid in water
（B）. The gradient elution program was as follows：0~8.5 min，95%~95% A；8.5~8.51 min，95%~40%
A；8.51~12 min，40%~40% A. The column temperature was set at 20 ℃ . The flow rate was kept at 0.4 mL/
min and the sample volume was 10 μL. Results：All calibration curves had good linearity（r2>0.98）
over the concentration ranges of 2.5~50 ng/mL for rhein and aloe rhein，10~250 ng/mL for emodin and
physcion，25~1000 ng/mL for chrysophanol，10~500 ng/mL for emodin-8-O-glucoside and physcion-8-
O-glucoside. And the average recoveries were all ranged in 90.32%~106.75%（n=6）. Conclusion：The
method is simple，accurate and sensitive for the determination of anthraquinones constituents in Polygonum
Rumex Patientia L..
Keywords：HPLC-MS/MS；Polygonum Rumex Patientia L.；anthraquinones；content
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 8 卷
虫等功效 [1]，现代药理研究发现巴天酸模具有抗菌、
抗病毒、抗炎、抗氧化和免疫调节等作用，可用于治
疗多种皮肤病、出血症和各种炎症等疾病 [2-4]。
巴天酸模含有蒽醌、黄酮、萘及萘醌、二苯乙烯
类等成分 [5]。其中蒽醌类成分（如大黄素、大黄酚等）
具有抑菌消炎、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、止血等多种药
理活性，为巴天酸模的主要药效物质，常以游离蒽醌
和结合蒽醌形式存在 [6-9]。
目前，巴天酸模中蒽醌类成分的含量测定报道
不多 [10-15]，有的侧重游离蒽醌的测定，有的侧重结合
蒽醌的测定。结合蒽醌口服给药后，存在生物转化
成游离蒽醌的现象 [16]，提示在进行药材质量控制时
有必要对两种类型蒽醌进行同时测定。
因此，本实验建立了 LC-MS/MS 的方法，同时测
定巴天酸模中 7 种蒽醌类成分（大黄酸、大黄素、芦
荟大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素 -8-O- 葡萄
糖苷、大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷）的含量，以期为
巴天酸模的质量控制提供参考依据。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1200 高 效 液 相 色 谱 仪（美 国 Agilent 公
司），API 3200 三重四级杆质谱仪（美国 AB SCIEX
公 司），3K15 高 速 离 心 机（美 国 Sigma 公 司），KQ-
250E 超声波清洗器（中国昆山市超声仪器有限公
司），BP121S 万 分 之 一 天 平（德 国 Sartorius 公 司），
XW-80A 旋涡混合器（中国上海沪西分析仪器厂），
Mill-Q Ⅱ型超纯水器（Millipore 公司）。
1.2 试药
巴天酸模采自天津市蓟县下营镇，经天津中医
药大学李天祥副教授鉴定。大黄酸、大黄素、芦荟大
黄素、大黄酚、大黄素甲醚、华法林标准品（中国药
品生物制品检定所，纯度 >98%），大黄素 -8-O- 葡
萄糖苷、大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷为自制，并经
过检测纯度 >98%。乙腈（色谱纯，Fisher），甲酸（色
谱纯，Tedia），超纯水为 Millipore 超纯水净化系统制
得。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
安 捷 伦1200高 效 液 相 色 谱 仪，Agilent Zorbax
SB-C18 色 谱 柱（4.6 mm×100 mm，1.8 μm），Agilent
Zorbax SB-C18 保护柱（4.6 mm×12.5 mm，5 μm）；流动
相为乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），流速为0.4 mL/ min；
柱温为 20 ℃，进样量为 10 μL，分析时间为 12 min。
梯度洗脱程序见表 1。
表 1 梯度洗脱程序
时间（min） A（%） B（%）
0 95 5
8.5 95 5
8.51 40 60
12 40 60
2.2 质谱条件
API 3200™三重四级杆质谱仪，TurboIonSpray®
离子源，负离子分析模式，MRM 扫描方式。参数设
置：气帘气（CUR）：15 psi；碰撞气（CAD）：5；离子
喷雾电压（IS）：4000 V；温度（TEM）：350 ℃；气流
1（GS1）：40 psi；气流 2（GS2）：50 psi；加热（Ihe）：
On。各化合物的 MRM 方法参数见表 2。
表 2 各标准品的 MRM 方法参数
成分
母离子
Q1
子离子
Q3
驻留时间
Dwell Time
（ms）
去簇电压
DP（V）
入口电压
EP（V）
碰撞能量
CE（V）
碰撞室出口电压
CXP（V）
大黄酸 282.9 210.9 200 -24 -5 -38 -2
大黄素 269.1 182.0 200 -44 -5 -50 -1
大黄酚 252.9 224.8 200 -50 -4 -41 -2
大黄素甲醚 282.9 240.1 200 -46 -5 -36 -3
芦荟大黄素 268.9 239.1 200 -41 -5 -40 -2
大黄素 -8-O-
葡萄糖苷
431.1 269.0 200 -50 -4 -42 -7
大黄素甲醚
-8-O- 葡萄糖苷
445.1 282.9 200 -21 -7 -26 -3
华法林 307.0 116.9 200 -40 -5 -50 -2
注：MRM 交替时间：5 ms；分辨率：Q1、Q3 皆为单位分
辨率。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备
分别精密称取大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大
黄酚、大黄素甲醚、大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素
甲醚 -8-O- 葡萄糖苷、华法林（内标物）标准品适量，
置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解，使其成浓度均
为 100 μg/mL 的标准品储备液，置于 4 ℃冰箱中，备
用。
2.3.2 供试品溶液的制备
取巴天酸模药材粉末（过 10 目筛）约 0.5 g，精密
称定，置于 25 mL 容量瓶中，再加入 0.25 mL 内标溶
液（华法林 5 μg/mL），后加甲醇定容至刻度，超声提
取 1 h，静置，取上清液 0.22 μm 微孔滤膜过滤，滤液
作为供试品溶液，备用。
2.4 线性关系
精密移取各对照品溶液适量，用流动相稀释
配制成系列浓度的混合对照品溶液，并加入浓度
为 50 ng/mL 的内标溶液，涡旋混匀，以峰面积比值
（Y）为纵坐标，以各待测物浓度（X）为横坐标，权
重系数 1/X2，作线性回归。7 个蒽醌类成分的线性
关系考察见表 3，结果表明大黄酸、芦荟大黄素在
2.5~50 ng/mL，大黄素、大黄素甲醚在 10~250 ng/mL，
大黄酚在 25~1000 ng/mL，大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、
大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷在 10~500 ng/mL 范围
内线性良好。
表 3 线性关系考察
化合物
线性范围
（ng/mL）
回归方程 相关系数R2
大黄酸 2.5~50 Y=0.00422X+0.00336 0.9811
大黄素 10~250 Y=0.00928X+0.0557 0.9912
芦荟大黄素 2.5~50 Y=0.000616X-0.0000839 0.9908
大黄酚 25~1000 Y=0.00065X+0.0022 0.9872
大黄素甲醚 10~250 Y=0.000874X-0.00112 0.9872
大黄素 -8-O- 葡萄糖苷 10~500 Y=0.000408X+0.000592 0.9878
大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷 10~500 Y=0.000363X-0.00167 0.9864
2.5 精密度与准确度
分别取低、中、高 3 个浓度的样品，按照“2.4 线
性关系的考察”中标准曲线的方法进行操作，记录
待测物大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄
素甲醚、大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素甲醚 -8-O-
葡萄糖苷与内标华法林的峰面积比值，代入标准曲
线中，计算浓度。精密度为测得浓度的变异值，以
RSD 表示，准确度用 RE 表示。批内精密度为平行处
理 6 个样品，批间精密度为连续测定 3 批样品。结果
表明 7 个化合物的批内、批间精密度 RSD<15%，准
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1 8 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
确度均在 100%±15% 范围内。
2.6 加样回收率的考察
称取已知含量的巴天酸模药材适量，分别精
密加入一定量的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄
酚、大黄素甲醚、大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素甲
醚 -8-O- 葡萄糖苷与内标华法林，平行操作 6 份，按
照“2.3.2 供试品溶液的制备”项下方法进行处理，
精密吸取处理好的样品，以（测得值 - 基础值）/ 加标
值 ×100% 计算回收率。各化合物回收率分别为大
黄酸 106.2%、大黄素 95.33%、芦荟大黄素 90.32%、
大黄酚 99.13%、大黄素甲醚 91.48%、大黄素 -8-O-
葡 萄 糖 苷 94.00%、大 黄 素 甲 醚 -8-O- 葡 萄 糖 苷
106.75%。
2.7 最低定量限
将各对照品溶液用甲醇溶液稀释至一定浓
度，进样测定各化合物的最低定量限。7 个化合
物的最低定量限分别为，大黄酸、芦荟大黄素：
0.025 ng，大黄素：0.01 ng，大黄酚、大黄素甲醚、大
黄素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖
苷：0.1 ng。
2.8 样品稳定性
取处理好的样品溶液，于室温下分别放置 0、1、
2、4、8、10 h，测定样品的稳定性，结果显示 RSD<5%，
表明样品溶液在室温条件下稳定。
2.9 样品含量测定与重复性考察
分 别 精 密 称 取 巴 天 酸 模 药 材 适 量，按 照
“2.3.2 供试品溶液的制备”项下的方法，平行操作
6 份，进行重复性考察和样品的含量测定，结果见
表 4。
表 4 巴天酸模中 7 个蒽醌类成分的含量（n=6）
化合物 含量（mg/g）
大黄酸 0.00017
大黄素 0.02320
芦荟大黄素 0.00432
大黄酚 0.07185
大黄素甲醚 0.04510
大黄素 -8-O- 葡萄糖苷 0.02475
大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷 0.00225
3 讨论
3.1 电离方式的选择
质 谱 条 件 的 优 化 是 通 过 将 1 μg/mL 的 大 黄
酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄
素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷的
标准品溶液经由蠕动泵 10 μL/min 连续进样，并对
各质谱参数进行考察，以待测物响应值目标。由于
测定的 7 种蒽醌易产生 [M-H]- 离子，所以试验中选
择负离子方式进行扫描。
3.2 流动相pH的选择
大 黄 酸、大 黄 素、芦 荟 大 黄 素、大 黄 素 甲
醚、大黄酚、大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、大黄素甲
醚 -8-O- 葡萄糖均含有羟基，呈弱酸性，对 pH 值
较敏感。当 pH 值低于化合物 PKa 时，会以分子态
存在；当 pH 值高于 PKa 时，则以解离态存在。调
节流动相的酸度，使蒽醌成分以其中一种形式存
在，可获得良好的峰形，故在流动相中加入适量
HCOOH，以提高响应、改善峰形。试验考察了流
动相中不含及含有 0.05%、0.1% 的 HCOOH 对于
分析物响应及峰形的影响，发现 HCOOH 浓度较
高响应较好，峰形也好，故确定流动相中添加的
酸浓度为 0.1% HCOOH。
4 结论
在实验建立的 HPLC-MS/MS 法，可同时准确地
对巴天酸模中的 7 个蒽醌类成分进行含量测定。巴
天酸模中主要蒽醌成分的含量按高低顺序排列，依
次为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素 -8-O- 葡萄糖苷、
大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚 -8-O- 葡萄糖苷、
大黄酸。◆
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