全 文 ：HPLC法测定不同来源杠板归中咖啡酸的含量＊
鲍家科 1 ,许乾丽 1 ,茅向军 1 ,林瑞超 2 ,王刚力2 ,周宁3 ,冯泽熹 3
(1.贵州省药品检验所 , 贵阳 550004;2.中国药品生物制品检定所 ,北京 100050;
3.贵州同济堂制药有限公司 ,贵阳 550002)
摘要　目的:建立 HPLC法测定不同来源的杠板归药材中咖啡酸含量。 方法:采用 HypersilODS2 C18(4.6 mm×250 mm,
5 μm)色谱柱 , 以乙腈 -0.4%磷酸(9∶91)为流动相 ,流速 1.0mL· min-1 ,检测波长 323 nm。结果:咖啡酸进样量在 0.0225 ～
0.607 μg范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率(n=6)为 100.5%, RSD为 0.74%。结论:本法简便 , 准确 , 可作为该
药材的定量分析方法 。
关键词:HPLC;杠板归;咖啡酸;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)05-0903-03
HPLCdeterminationofcafeicacidinPolygonum
perfoliatumL.fromdiferentsource＊
BAOJia-ke1 , XUQian-li1 , MAOXiang-jun1 , LINRui-chao2 ,
WANGGang-li2 , ZHOUNing3 , FENGZe-xi3
(1.GuizhouInstituteforDrugControl, Guiyang550004, China;2.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiological
Products, Beijing100050, China;3.GuizhouTongjitangPharmaceuticalCo.Ltd., Guiyang550002, China)
Abstract　Objective:TodevelopanHPLCmethodtodeterminethecontentsofcafeicacidinPolygonumperfolia-
tumL.fromdiferentsource.Methods:HypersilODS2 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)wasadopted;Themobile
phaseconsistedofacetonitrile-0.4% phosphoricacid(9∶91 )attheflowrateof1.0 mL·min-1;Thedetection
wavelengthwas323 nm.Results:Thelinearrangeofcafeicacidwas0.0225-0.607 μg, therecovery(n=6)of
thismethodwas100.5% andRSDwas0.74%.Conclusion:Themethodisconvenient, accurateandcanbeap-
pliedinquantitativedeterminationofthemedicinalherb.
Keywords:HPLC;PolygonumperfoliatumL.;cafeicacid;assay
杠板归又名贯叶蓼 、蛇牙草等 ,为蓼科植物杠板
归(PolygonumperfoliatumL.)的干燥地上部分 ,为
贵州省少数民族用药 。中国药典 1977年版一部曾
经收载 ,无含量测定项目。杠板归具有利水消肿 、清
解热毒 、止咳的功效 ,用于肾炎水肿 、上呼吸道感染 、
百日咳 、泻痢 、湿疹 、疖肿 、毒蛇咬伤 [ 1] 。作为中国
药典 2010年版一部拟增加品种 ,我所根据中国药典
2010年版一部标准研究课题任务书要求 ,对杠板归
药材进行含量测定研究。据报道[ 2] ,杠板归中主要
含黄酮类 、苯丙酸类 、苦木素类 、蒽醌类和新苯丙素
蔗糠酯类等成分 ,黄酮类化合物报道了山萘酚 、蓄
苷 、山萘酚 -3-O-芸香糖苷 、芦丁 、槲皮素等 ,苯
丙酸类有咖啡酸 、绿原酸等。杠板归中化学成分的
含量测定 ,文献报道较少 ,有报道对其所含的槲皮素
含量采用薄层扫描法进行测定 [ 3] ,未见到对杠板归
中咖啡酸的 HPLC含量测定的报道。参考中国药典
2005年版一部[ 4]及有关文献 [ 5, 6]资料 ,采用高效液
相色谱法对杠板归中所含的咖啡酸含量进行测定 ,
并对测定方法进行验证 。
1　仪器与试药
TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪
器公司);岛津 LC-20A液相色谱仪 , LCsolution
色谱工作站 ,恒温柱箱 , 自动进样器 。 TCQ-250
超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。咖啡酸对照
—903—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
＊ 2008年度贵州省中药现代化科技产业研究开发专项(编号:黔科合社字 [ 2008] 5002号)
第一作者　Tel:(0851)6807591;E-mail:bjk2005@163.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.05.015
品(批号 110885 -200502)由中国药品生物制品
检定所提供 ,供含量测定用;乙腈为色谱纯 , 水为
重蒸馏水 ,其余试剂均为分析纯 。收集到 16批杠
板归样品(产地为贵州大方的 3批样品为自采 ,其
余 13批为购买),原植物由贵阳中医学院陈德媛
研究员鉴定 。
2　溶液制备
2.1　对照品溶液 精密称取咖啡酸对照品适量 ,加
80%甲醇溶解并制成浓度为 10 μg· mL-1的溶液 ,
即得。
2.2　供试品溶液的制备 取本品粉末(过 3号筛 ,
并同时测定水分),混匀 ,取约 0.5 g,精密称定 ,置
100mL具塞锥形瓶中 ,精密加入 80%甲醇 50 mL,
称定重量 ,加热回流 30 min,取下 ,放冷 ,再称定重
量 ,用 80%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续
滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过 ,即得。
3　色谱条件
色谱柱:HypersilODS2 C18(4.6mm×250 mm,
5μm),大连伊利特装填 ,柱号:E1916542;流动相:
乙腈 -0.4%磷酸(9∶91);流速:1 mL· min-1;检测
波长:323 nm;进样量:10μL。
在本文色谱条件下 ,对照品溶液及供试品溶液
色谱图见图 1。从图中可见 ,咖啡酸的保留时间约
为 14.8 min,和其相邻峰分离完全(分离度 >1.5),
理论板数以咖啡酸峰计算应不低于 2500。
图 1　咖啡酸对照品(A)和贵州大方 GBG02号样品(B)HPLC色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstanceofcafeicacid(A)andGBG02samplefromDafangofGuizhou(B)
1.咖啡酸(cafeicacid)
4　线性关系考察
精密称取咖啡酸对照品适量 ,加 80%甲醇溶解
并制成浓度为 22.48 μg· mL-1的对照品溶液 。分
别精密吸取上述对照品溶液 1, 3, 9, 15, 21 , 27 μL,
注入液相色谱仪 ,按上述 “ 3”项下色谱条件进样测
定 。以峰面积 Y对质量数 X(μg)进行线性回归计
算 ,得线性回归方程为:
Y=5.15×106X+1.60 r=0.9999
线性范围 0.0225 ～ 0.607μg。
5　精密度试验
精密吸取对照品溶液(11.24 μg·mL-1)10 μL
注入高效液相色谱仪 ,连续进样 6次 ,测定咖啡酸的
峰面积 。 6次测定结果的平均值为 592366, RSD为
0.79%。说明精密度良好。
6　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 10 μL,分别于 0, 2,
4, 6, 8, 10h各进样测定 1次 。 6次测定的峰面积平
均值为 593161, RSD为 0.44%。说明供试品溶液在
10 h内稳定性良好 。
7　重复性试验
精密称取同一批号的杠板归样品 6份 , 按
“2.2”项下方法制备供试品溶液 ,进样测定 。结果
咖啡酸平均含量为 1.140mg·g-1 , RSD为 2.1%。
8　加样回收率试验
分别精密称取 6份已测定含量的杠板归药材样
品(咖啡酸含量 1.140 mg· g-1)约 0.25 g,精密加
入用 80%甲醇制备的对照品溶液 (4.496 μg·
mL-1)50 mL,按 “2.2”项下方法制备所需溶液 ,依法
测定 ,结果平均回收率(n=6)为 100.5%, RSD为
0.74%。
9　样品测定
分别称取 16批不同来源的杠板归药材样品适
量 ,按 “2.2”项下的方法制备供试品溶液;按 “2.1”
项下的方法制备对照品溶液(测定含量较低的样品
时 ,再将此对照品溶液适当稀释)。依法测定 ,以外
标一点法计算含量 ,结果见表 1。
—904— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
表 1 杠板归药材中咖啡酸的含量(n=2)
Tab1 DeterminationofcaffeicacidinPolygonumperfoliatum
来源(source)　　　　 批号(LotNo.) 含量(content)/%
　贵州平坝(Pingba, Guizhou) 20070801 0.0016
　贵州开阳(Kaiyang, Guizhou) / 0.2383
　贵州贵阳(Guiyang, Guizhou) 20080801 0.0543
　山西广生(Guangsheng, Shanxi) 47 0.1007
　贵州平坝(Pingba, Guizhou) 20080801 0.2051
　贵州毕节(Bijie, Guizhou) 20080814 0.0677
　贵州毕节(Bijie, Guizhou) 200801008 0.1128
　贵阳花溪区(Huaxi, Guiyang) / 0.1261
　佳程药业(贵州)有限公司 [ JiachengCo.Ltd.(Guizhou)] / 0.0416
　四川绵阳(Mianyang, Sichuan) / 0.0960
　福建福州(Fuzhou, Fujian) / 0.0566
　贵阳济仁堂药业公司(GuiyangJirentangCo.Ltd.) / 0.1361
　贵州同济堂制药公司(TongjitangCo.Ltd.) / 0.0899
　贵州大方(Dafang, Guizhou) GBG01 0.2813
　贵州大方(Dafang, Guizhou) GBG02 0.1278
　贵州大方(Dafang, Guizhou) GBG03 0.2532
10　讨论
10.1　供试品溶液制备方法的确定 对加热回流
40 min和超声处理 40min2种提取方法进行对比 ,
结果加热回流提取测得的咖啡酸含量较高 ,且样品
分离效果较好 ,故本文采用加热回流提取的方法 。
对不同提取溶剂(甲醇 、80%甲醇 、50%甲醇 、30%
甲醇 、含 5%甲酸的甲醇)、不同加热回流提取时间
(20, 30, 40, 60 min)、不同取样量 (0.2, 0.3, 0.4,
0.5, 0.6, 0.8g)进行考察的结果表明:采用 80%甲
醇加热回流效果最好;加热回流 30 min即能提取完
全 ,且含量稳定 ,回流时间过长 ,含量反而下降;取样
量为 0.5 g,即可达到取样的代表性(重现性较好)。
10.2　色谱条件的确定 用紫外分光光度计测得咖
啡酸对照品甲醇溶液在 321.0 nm和 219.0 nm处均
有最大吸收 , 在 321 nm处是一较宽峰 , 涵盖了
323nm,结合本实验结果及文献 [ 4] ,选择 323 nm
作为检测波长 。曾考察了文献 [ 5]的流动相 ,并经
实验摸索 ,确定本文以乙腈 -0.4%磷酸(9∶91)为
流动相 。
10.3　小结 测定了不同产地和不同来源的 16批
杠板归药材的咖啡酸含量 , 其含量范围基本在
0.0016% ～ 0.28%之间 ,差别较大 , 可能与采收季
节 、采收时间 、保存方式等原因有关 ,有待进行深入
的研究 。
致谢:感谢四川 、福建 、山西等省药检所 , 贵州毕节地
区药检所及贵州同济堂制药有限公司 、贵阳济仁堂药业有限
公司 、佳程药业(贵州)有限公司等生产企业提供药材样品 。
参考文献
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3 XIEHui(谢辉), GUHan-chong(顾汉冲), XUJin-hong(许金
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6 TANMing-na(谭明娜), YUQing-feng(于清峰), XIAOYing
(肖莹), etal.Determinationofcafeicacidquercetinandberberine
hydrochlorideinLianpushuangqingtabletsbyRP-HPLC(RP-
HPLC测定连蒲双清片中咖啡酸 、槲皮素和盐酸小檗碱).Chin
TraditPatMed(中成药), 2007, 29(8):1161
(本文于 2010年 2月 2日修改回)
—905—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)