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HPLC法测定杠板归不同药用部位槲皮素的含量



全 文 :China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 39 中国药房 2011年第22卷第39期
0.17%~3.66%之间,远远低于药典标准。
对于枳实,《中国药典》规定辛弗林的含量不少于 0.3%。
从测定结果可以看出,辛弗林在枳实2个种间的差异也非常明
显。但是,除了样本ZSHS-007、ZSHS-009和ZSHS-010之外,
所有枳实样品的辛弗林含量都高于药典标准。一般来说,辛
弗林含量会随药材的生长程度呈规律性变化,即果实越趋成
熟,辛弗林含量越低[7]。因此,其原因可能与产地、生长年限、
采收期、加工方法等因素有关,有待进一步研究。
4.4 通过柚皮苷和辛弗林的含量差异分析枳实药材的复杂性
从本质来看,枳实和枳壳虽然只是大小和生长期的差别,
但是通过本次研究发现,枳实药材远比枳壳药材复杂。橙的
柑果分酸橙和甜橙,酸橙味酸带苦,不宜食用,多用于制成枳
实和枳壳等药材;鲜食水果则以甜橙为主。在幼果期,柑橘类
植物会产生自然落果,或农民进行科学疏果以保证柑橘质量,
为了增加收入,农民往往将这类落果或疏出的幼果制成甜橙
枳实。与酸橙枳实比较,这类枳实的个头多数很小,其所含的
辛弗林含量较高。这使得枳实包含了酸橙和甜橙两大类,有
可能还包含了更多的其他栽培变种。当柑橘长大以后,就只
有酸橙被制成枳壳,而甜橙类则会作为水果出售,这就使得枳
壳药材的品种来源较一致,成分也一致。当然,实际原因还有
待于进一步调查研究。
由于枳实的品种来源复杂,导致其成分变化也非常复
杂。以柚皮苷为例,可以看出酸橙中的柚皮苷含量远高于甜
橙的柚皮苷含量。袁旭江等[8]发现,化橘红中柚皮苷含量随果
龄果径增长而递减,这是因为酸橙枳实的柚皮苷含量远高于
酸橙枳壳。
综上,不同产地枳实由于生长条件、果龄不同以及采收后
加工炮制方法不同,都会影响药材中各成分含量的变化。辛
弗林可以作为不同来源的枳实的指标性成分;而在测定柚皮
苷时必须分清枳实的品种。
参考文献
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(收稿日期:2010-12-01 修回日期:2011-05-31)
HPLC法测定杠板归不同药用部位槲皮素的含量
李元宏*,杨务彬,兰 鸿(湖北医药学院附属太和医院药学部,十堰市 442000)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2011)39-3714-02
摘 要 目的:对杠板归不同药用部位槲皮素含量进行测定。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为DiamonsilTMC-18(200 mm×
4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(50 ∶50),检测波长为360 nm,流速为1.0 mL·min-1。结果:槲皮素的进样量在0.05~
1.00 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 8);平均回收率为97.73%,RSD=1.03%(n=6)。杠板归不同药用部位
槲皮素含量差异较大。结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于杠板归的质量控制。
关键词 杠板归;药用部位;槲皮素;高效液相色谱法;含量测定
Content Determination of Quercetin in Different Parts of Polygoni Polygonum perfoliatum
LI Yuan-hong,YANG Wu-bin,LAN Hong(Dept. of Pharmacy,Taihe Hospital Affiliated to Hubei Medical Col-
lege,Shiyan 442000,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To determinate the contents of quercetin in different parts of Polygonum perfoliatum. METHODS:
HPLC was performed on DiamonsilTMC-18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm)with methanol-0.4%phosphatic acid(50 ∶ 50)as mobile
phase at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 360 nm. RESULTS:The linear range of quercetin was
0.05~1.00 μg(r=0.999 8)with an average recovery of 97.73%(RSD=1.03%,n=6). The contents of quercetin were different sig-
nificantly among different parts of P. perfoliatum.CONCLUSION:The method is simple,accurate and highly reproducible,and can
be used for the quality control of P. perfoliatum.
KEY WORDS Polygonum perfoliatum;Medicinal parts;Quercetin;HPLC;Content determination
*主管药师。研究方向:医院药学。电话:0719-8801135。
E-mail:liskey99@163.com
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中国药房 2011年第22卷第39期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 39
杠板归为蓼科蓼属植物贯叶蓼Polygonum perfoliatum L.
的全草,别名蛇倒退、梨头刺、河白草、蛇不过、穿叶蓼等[1],具
有清热解毒、利水消肿的作用,主治水肿、小便不利、痢疾、腹
泻、百日咳、痈疖疮毒、皮炎、湿疹、毒蛇咬伤等,是一种具有很
高药用价值的传统中草药。在实际应用中,笔者发现其不同
药用部位的治疗效果不同,故本文以其主要活性成分槲皮素
作为定量指标,采用高效液相色谱(HPLC)法对杠板归不同药
用部位槲皮素含量进行测定。
1 仪器与试药
LC-10A型HPLC仪、SPD-10A型紫外检测器(日本岛津公
司);HW-2000型色谱工作站(南京千谱软件有限公司);
FA2004型电子分析天平(上海精科公司)。
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:
100081-200406);甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯;杠板归
采自武当山八仙观3个不同地点,经湖北医药学院生药学教研
室陈吉炎教授鉴定为贯叶蓼P. perfoliatum L.。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:DiamonsilTMC-18(200 mm×4.6 mm,5 μm),加装
Phenomenex保护柱;流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50 ∶ 50);流
速:1.0 mL·min-1;检测波长:360 nm[2];柱温:30℃;进样量:10
μL。色谱见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经真空干燥至恒重的槲皮素对照品适量,用甲
醇配成每1 mL含槲皮素0.50 mg的对照品贮备液。精密量取
该贮备液1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即
得每1 mL含槲皮素0.050 mg的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取杠板归药材粉末(过三号筛)约 2.0 g,置于具塞
锥形瓶中,精密加入80%甲醇50 mL,密塞,称定重量,加热回
流 1 h,放冷,再称定重量,用 80%甲醇补足失重,摇匀,滤过。
精密量取续滤液20 mL,加入盐酸10 mL,置水浴中加热水解3
h[3],取出,迅速冷却,转移至50 mL量瓶中,加80%甲醇稀释至
刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2.4 线性关系考察
精密量取上述对照品贮备液 0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0
mL,分置6支10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。分别
精密吸取10 μL注入液相色谱仪,每一浓度重复进样3次,求平
均峰面积。以平均峰面积积分值(Y)为纵坐标,槲皮素进样量
(X,μg)为横坐标,进行线性回归,得回归方程为 Y=3.679×
103X+19.746(r=0.999 8,n=18)。结果表明,槲皮素进样量在
0.05~1.00 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 10 μL,重复进样 6次,测定峰面积。
结果,RSD=1.34%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液,分别于 0、1、2、4、8、24 h各进
样 10 μL,测定峰面积。结果,RSD=1.13%(n=6),表明供试
品溶液在制备后24 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批杠板归粉末(约1.0 g)6份,精
密加入槲皮素对照品贮备液3 mL,按“2.3”项下方法制成供试
品溶液,按上述方法测定槲皮素含量,计算加样回收率,结果
见表1。
表1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery test(n=6)
试验号
1
2
3
4
5
6
样品含量/mg
1.78
1.84
1.72
1.88
1.75
1.83
加入量/mg
1.50
1.50
1.50
1.50
1.50
1.50
测得量/mg
3.27
3.31
3.19
3.35
3.21
3.27
回收率/%
99.09
97.90
97.83
98.22
97.23
96.10
x/%
97.73
RSD/%
1.03
2.8 样品含量测定
取3个不同采样点杠板归根、茎、全草(药材)粉末(过三号
筛)各约 2.0 g,叶粉末约 1.0 g,精密称定,按“2.3”项下方法制
成供试品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL注
入液相色谱仪,测定峰面积,计算槲皮素含量。样品含量测定
结果见表2。
表2 样品含量测定结果(n=3)
Tab 2 Result of content determination of samples(n=3)
样本号
1
2
3
根/mg·g-1
0.83
0.79
0.91
茎/mg·g-1
1.23
1.17
1.26
叶/mg·g-1
6.41
6.25
6.38
药材/mg·g-1
1.76
1.73
1.81
3 讨论
本试验以杠板归中槲皮素作为定量指标,利用HPLC法对
杠板归的根、茎、叶及全草(药材)中槲皮素含量进行测定,结
果证实杠板归不同药用部位槲皮素含量存在较大差异。
杠板归以全草或干燥地上部分入药,由于各药用部位所
含成分差异较大以及根、茎、叶在杠板归药材中所占比例悬
殊,故应在药材收购、使用过程中引起重视。
综上,本方法简便、准确、重复性好,可用于杠板归的质量
控制。
参考文献
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(收稿日期:2011-07-04 修回日期:2011-08-22)
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图1 高效液相色谱图
A.槲皮素对照品;B.供试品
Fig 1 HPLC chromatograms
A.quercetin control;B. test sample
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